安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2007A091)
- 作品数：5 被引量：23H指数：4
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- 相关机构：安徽大学安徽省生态工程与生物技术重点实验室安徽省农业科学院更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 溴化氰切割融合蛋白条件的研究
- 2009年
- 目的研究不同因素对溴化氰切割融合蛋白的影响。方法将含有pThioHisA-G13重组质粒的BL21工程菌,经IPTG诱导后,超声破碎,分离并溶解包涵体,再选择不同量的溴化氰、酸浓度及不同溶剂等条件进行溴化氰切割试验,Tricine-SDS-PAGE检测切割效果。结果溴化氰的量,酸浓度及不同溶剂对溴化氰切割包涵体的效果均有影响。结论高效率的切割需要在酸性条件下进行;以尿素作为促溶剂比70%的甲酸更有利于小肽的切割。
- 刘小强查向东张部昌徐康森徐佩佩
- 关键词：融合蛋白
- 甘薯NBS-LRR类抗病基因同源序列的克隆、分析及数目研究被引量：7
- 2008年
- 根据植物抗病基因保守序列设计特异引物,对甘薯高抗茎线虫病品种AB94078-1、感病品种徐18及其8个后代品系进行PCR扩增。获得15个具有完整氨基酸读码框的片段,均具有NBS类抗病蛋白4个保守基序,其中5个片段含LRR结构。利用从亲本AB94078-1扩增的R510-AB作为探针进行Southern杂交,结果表明,其在基因组中存在多个拷贝,并估计其在基因组中的拷贝数目,克隆新的甘薯RGA序列,为进一步获得甘薯抗病基因打下基础。
- 屈满义查向东王钰杨金环蒋琳阮龙
- 关键词：甘薯抗病基因同源序列NBS-LRRSOUTHERN杂交
- 巢湖微囊藻产毒株的分离、保存及种属特异性鉴定被引量：5
- 2010年
- 利用平板划线结合液体培养的方法从巢湖分离得到一个藻株,命名为Chaohu-1。甲醇粗提该藻株所产生的藻毒素(MCs),经固相萃取、HPLC检测,证实该藻株产生毒性最强的Microcystin-LR。藻细胞呈绿色球状,群体为无规则网状。全细胞PCR扩增藻蓝蛋白基因间隔序列(PC-IGS),结果与GenBank中已有的铜绿微囊藻属序列相似性达99%。综合形态学和分子生物学的分析结果,表明我们首次从巢湖分离得到1个产毒的铜绿微囊藻藻株。同时我们摸索出该藻株冻存及复苏方法,为藻株的长期保存及后续研究打下了基础。
- 刘杨査向东李玉成
- 关键词：种属鉴定冻存复苏
- 颗粒裂解肽G13结构域的表达及其对大肠杆菌活力的影响被引量：9
- 2008年
- 目的构建携带颗粒裂解肽G13结构域的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达目的蛋白,并检测其对大肠杆菌活力的影响。方法人工合成G13结构域编码DNA序列,PCR扩增后,用T-A克隆法与pBAD/TOPOThioFusion表达载体连接。通过PCR鉴定及测序筛选阳性重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经阿拉伯糖诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况,同时监测诱导表达前后工程菌A600值的变化及菌液中的突变体。结果工程菌经诱导,表达出相对分子质量约15000的特异蛋白,表达量占菌体总蛋白的3%左右。随着外源蛋白的表达,菌液A600值下降,随后又缓慢上升。提取的质粒测序结果表明,其启动子的-35区和-10区均发生了突变,随着诱导时间的增加,突变细胞的比例不断增加。结论已成功构建了G13结构域原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出G13融合蛋白。该异源蛋白的表达导致工程菌的活力降低。
- 杨金环查向东方红刘小强屈满义
- 关键词：颗粒裂解肽原核表达大肠杆菌
- 颗粒裂解肽G13结构域在大肠杆菌中的高效融合表达被引量：7
- 2009年
- 为高效表达颗粒裂解肽G13结构域并避免G13对宿主菌的毒性,将人工合成的编码G13的基因片段,PCR扩增后克隆于原核表达载体pThioHisA中,构建了重组表达载体pThioHisA-G13,将其转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达融合蛋白Trx-G13,表达产物以包涵体的形式存在,其表达量约占细菌总蛋白的58%。包涵体蛋白经8 mol/L尿素溶解后,再经CNBr切割,阳离子交换层析,得到纯化的重组G13结构域。琼脂糖扩散法检测表明重组G13结构域多肽具有抗菌活性。
- 刘小强查向东肖亚中杨金环李能树
- 关键词：颗粒裂解肽阳离子抗菌肽
