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造血干细胞移植后淋巴细胞增殖症患者单个核细胞来源DC负载EBV抗原肽制备DC-CIK被引量：1: 2010年; 目的:以造血干细胞移植后并发淋巴细胞增殖症(post-transplant lympholiferative disorder,PTLD)患者外周血单核细胞培养诱导DC,负载抗原肽后制备DC-CIK(cytokine-induced killer cell),为探索新的PTLD治疗方法奠定基础。方法:分离造血干细胞移植后EBV(Epstein-Barr virus)感染致PLTD患者外周血单个核细胞,贴壁细胞培养诱导DC,悬浮细胞诱导CIK;负载EBV抗原肽LMP2后建立DC-CIK共培养体系。流式细胞仪分析共培养前后细胞的免疫表型,ELISA检测共培养前后细胞上清IFN-γ的分泌水平,基因扫描仪分析T细胞受体(Tcell receptor,TCR)β家族基因谱。结果:成功制备负载EBV抗原肽的DC-CIK,HLA-DR+CD86+DC细胞从诱导前的12.5%增加到91.17%;DC-CIK共培养14 d后,两例患者的CIK数量分别增加了5.3和6.8倍;CD3+、CD8+、CD3+CD8+以及CD3+CD56+细胞比例在DC-CIK共培养后均明显升高(均P<0.05)。抗原肽负载的DC-CIK共培养体系中IFN-γ的分泌水平明显高于未经抗原肽负载的DC组[(1 332.6±92.38)pg/mlvs(693.42±62.41)pg/ml,P<0.01)]。DC-CIK培养后细胞的TCRβ家族基因在5.2家族出现单克隆表达峰。结论:EBV抗原肽负载后DC可诱导DC-CIK共培养体系中CD3+CD8+以及CD3+CD56+细胞扩增,并分泌高水平IFN-γ,为临床应用DC-CIK对移植后EBV感染致PTLD患者进行过继性细胞免疫治疗提供实验基础。; 郭晓玲魏雅朱平牛志云蔡圣鑫张改玲达万明潘崚; 关键词：CIK细胞过继性细胞免疫治疗

白血病细胞株KG-1中Mxi1基因突变的检测和表达载体的构建: 2011年; 目的检测白血病细胞株KG-1中Mxil基因SID和bHLHzip区突变情况并构建Mxil基因的野生型和突变型真核表达载体,观察其转染真核细胞后基因表达的情况。方法应用RT-PCR和SSCP分析KG-1细胞株Mxil基因的突变,将Mxil野生型/突变型基因cDNA插入到pDs-red2-N1质粒中,构建pDs-red2-N1/Mxil(野生型/突变型)真核表达载体,采用脂质体方法将质粒转染COS-7细胞,流式细胞仪检测红色荧光蛋白表达并计算转染效率。RT-PCR检测转染后Mxil基因的表达。结果 Mxil基因突变位于HelixⅡ区第82编码子的CAT/TAT(His/Tyr)。成功构建pDs-red2-N1/Mxil(野生型/突变型)真核表达载体,经酶切、电泳可以看到在4 700、1845 bp存在两条电泳条带,Mxil基因在COS-7细胞中得到表达,转染后COS-7细胞红色荧光蛋白表达的阳性细胞为18.07%,表达高峰出现在转染后第3天,并可持续表达6d左右。结论 Mxil基因的高度保守区域bHLHzip存在基因突变,Mxil突变基因的真核表达载体构建成功,并成功转染真核细胞COS-7。; 郭晓玲张改玲尹风雷牛志云张学军董作仁朱平潘崚; 关键词：基因转染

白血病细胞株KG1中Mxi1突变基因真核表达载体的构建: 2012年; 目的构建Max结合蛋白1(Max interacting protein 1,Mxi1)基因的野生型和突变型真核表达载体,观察表达载体转染真核细胞后蛋白表达的情况。方法将正常人和白血病细胞株KG1细胞的Mxi1野生型/突变型基因cDNA插入到红色荧光蛋白质粒pDs-red2-N1中,构建为pDs-red2-N1/Mxi1(野生型/突变型)真核表达载体;采用脂质体方法将质粒转染Cos-7细胞;荧光显微镜观察Cos-7细胞红色荧光蛋白表达情况。流式细胞仪方法检测红色荧光蛋白中Mix1的基因表达率,以此计算转染效率。转染后48h提取细胞总RNA,进行RT-PCR检测Mxi1基因表达。结果成功构建了一种pDs-red2-N1/Mxi1(野生型/突变型)真核表达载体。荧光显微镜下观察转染后Cos-7细胞可见红色荧光蛋白的表达;流式细胞仪检测野生型和突变型的转染效率以转染后前3d较高,并可持续至第6d。质粒转染Cos-7细胞后均出现阳性Mxi1基因转录产物。RT-PCR方法可以检测到Mxi1基因在Cos-7细胞中的表达。结论 Mxi1的真核表达载体构建成功,通过脂质体的方法转染真核细胞中并在其胞浆中表达。; 郭晓玲牛志云张改玲尹风雷杨琳任金海董作仁朱平潘崚

CD4^+CD25^+调节性T细胞检测在急性髓细胞白血病中的临床意义被引量：2: 2013年; 目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞检测在急性髓细胞白血病(AML)中的临床意义。方法:选取AML患者41例和体检健康者16例,用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例。结果:AML患者外周血的CD4+CD25+调节性T细胞表达明显高于对照者[(3.88±1.99)%∶(1.96±1.66)%,P<0.01]。AML组内,化疗耐药者(15例)的CD4+CD25+调节性T细胞表达显著高于化疗敏感者(14例)[(3.90±1.89)%∶(2.00±1.65)%,P<0.01]。14例化疗敏感者中,缓解后复发者(4例)的CD4+CD25+调节性T细胞表达显著高于持续缓解者(10例)[(3.95±1.86)%∶(2.02±1.55)%,P<0.05]。结论:CD4+CD25+调节性T细胞可能诱导免疫耐受,从而导致AML细胞的恶性增殖,影响白血病化疗的疗效,也可能是引起缓解患者复发的原因之一。; 陶贞霞郭晓玲孟宇于彦居丁继生王娟; 关键词：急性髓细胞白血病 CD4+CD25+调节性T细胞免疫表型流式细胞术

Ang-1在多发性骨髓瘤患者中的表达及临床意义被引量：4: 2010年; 目的研究血管生成素-1（angiopoietin-1,Ang-1）及其受体Tie-2在多发性骨髓瘤（MM）患者和骨髓瘤细胞株RPMI8226的表达情况,探讨其意义.方法采用RT-PCR和Western blot方法检测112例MM患者、24例非肿瘤患者（对照组）以及RPMI8226细胞株中Ang-1及其受体Tie-2的表达水平,分析阳性率及表达水平在MM患者与对照组、MM不同分期间的差异,探讨Ang-1表达与MM患者骨髓微血管密度、临床分期及预后的关系.结果 MM组Ang-1表达阳性率、表达水平均显著高于对照组（P＜0.05）;Ang-1表达阳性率在初治组和复发/难治MM组的差异无统计学意义（P＞0.05）,但复发/难治MM组的Ang-1表达水平高于初治组（P＜0.05）;Tie-2 mRNA仅在12例MM患者中检出,对照组未检出.MM患者骨髓微血管密度（25.21±0.80）明显高于对照组（5.23±0.20）（P＜0.01）;Ang-1阳性患者的骨髓微血管密度（32.98±1.70）高于Ang-1阴性患者（16.55±1.30）（P＜0.05）;Ang-1表达阳性率在Ⅱ期和Ⅲ期MM患者中差异无统计学意义（52.1%对60.9%,P＞0.05）,但Ⅲ期MM患者Ang-1蛋白的表达水平（0.40±0.07）明显高于Ⅱ期患者（0.22±0.04）（P＜0.05）;初治患者中,治疗无效组Ang-1表达阳性率（70.0%）明显高于有效组（19.1%）（P＜0.01）.结论 Ang-1在MM患者中高表达;Ang-1表达与MM临床分期、预后判断及靶向治疗有关.; 陈浩师亮杨晓阳郭晓玲潘峻; 关键词：多发性骨髓瘤血管生成素-1 血管内皮生长因子

急性髓细胞白血病患者外周血中CD4^+CD25^+FOXP3^+调节性T细胞的表达及临床意义被引量：2: 2014年; 目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)初诊患者外周血中CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞的表达及临床意义。方法:采用流式细胞术检测57例AML初诊患者及15例健康对照者外周血中CD4+CD25+、CD4+FOXP3+、CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞的表达。结果:AML初诊患者外周血中CD4+CD25+、CD4+FOXP3+、CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞的比例均明显高于健康对照者(均P<0.01)。AML中4种主要亚型(M2、M3、M4、M5)患者外周血中上述指标表达均无明显差异(均P>0.05)。结论:AML初诊患者CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例增高可能是患者免疫抑制并导致肿瘤免疫逃逸的重要原因之一。; 陶贞霞郭晓玲丁继生; 关键词：外周血免疫抑制

CD4^+CD25^+T调节性细胞抑制肿瘤免疫研究进展被引量：1: 2012年; 肿瘤是一群失去正常生长调控机制,发生恶性转化自身细胞,我们已经很清楚地知道肿瘤生长能激发特异性免疫应答包括CD4和CD8T细胞反应,它们可能延缓肿瘤生长并且可能根除肿瘤。; 陶贞霞郭晓玲丁继生王娟曹艳丽李新萌于彦居孟宇; 关键词：肿瘤免疫

多发性骨髓瘤患者血清血管生成素水平的测定及意义: 2011年; 目的研究血管生成素(Angs)与多发性骨髓瘤(MM)的关系并探讨其临床意义。方法用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法检测60例MM患者不同时期的Angs血清浓度,观察其与MM临床分期、肿瘤量分级和治疗效果的关系。结果 MM患者血清中Ang-2较正常对照组明显升高;血清Ang-1含量与正常对照组差异无统计学意义。MM患者Ⅱ期的Ang-2血清水平显著低于Ⅲ期。不同肿瘤量分级的MM患者血清Ang-2含量差异有统计学意义。MM治疗有效者,血清Ang-2水平比治疗前明显降低,血清Ang-1水平与治疗前差异无统计学意义;治疗无效者,其血清Ang-1、Ang-2含量与治疗前比较差异均无统计学意义。结论 MM患者血清Ang-2水平测定对MM的发病机制研究、病情评价、疗效监测、预后预测有一定意义。; 陈浩师亮李玉红郭晓玲潘崚; 关键词：多发性骨髓瘤血管生成素酶联免疫吸附测定法

骨髓增殖性疾病合并假性高血钾4例被引量：8: 2010年; 骨髓增殖性疾病（MPD）主要包括真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）、原发性骨髓纤维化（IMF）等疾病,以一系或多系血细胞的过度增多为临床表现。近来国内外的病例报道显示,在这些患者中会出现假性高血钾的情况。本文报道4例出现假性高血钾的临床病例，分析患者发生假性高血钾的情况，并结合文献讨论假性高血钾发生的原因。; 郭晓玲王慈张改玲牛志云蔡圣鑫潘崚; 关键词：骨髓增殖性疾病原发性血小板增多症真性红细胞增多症原发性骨髓纤维化临床病例

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河北省自然科学基金(C2008001097)

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