国家杰出青年科学基金(81201741)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：谭玉林法镇中吴宝强石亮荣江勇更多>>
- 相关机构：常州市武进人民医院苏州大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅面上科研课题常州市卫生局重大招标项目常州市社会发展科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒介导siRNA沉默EGFR基因及其对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨利用慢病毒介导小干扰核糖核酸(siRNA)沉默表皮生长因子受体(EGFR)基因的可行性及其对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建慢病毒表达载体LV-shEGFR,包装慢病毒表达载体及制备慢病毒颗粒EGFR-shRNA。实验分为Panc-1组(空白组)、绿色荧光蛋白(GFP)-Panc-1组(对照组)及siEGFR-Panc-1组(干扰组)共3组。空白组使用未经处理的对数生长期的胰腺癌细胞株Panc-1细胞,对照组使用不含siRNA片段的慢病毒颗粒及干扰组使用制备好的EGFR-shRNA慢病毒颗粒感染对数生长期的Panc-1细胞。采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测EGFR基因表达量(以与β-肌动蛋白相对浓度比值表示),采用蛋白质印迹法(Western-blot)检测细胞中EGFR蛋白表达(以灰度值表示),采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况。3组EGFR表达、吸光度(A)值、细胞凋亡率、细胞周期比较采用单因素方差分析和t检验。结果干扰组EGFR基因相对含量为0.20±0.04,明显低于对照组(1.00±0.15)及空白组(1.13±0.13),差异有统计学意义(LSD-t=7.865,7.668;P<0.05)。干扰组EGFR蛋白表达量为0.185±0.009,与对照组(0.801±0.087)及空白组(0.825±0.092)相比,干扰组EGFR蛋白表达明显降低(LSD-t=4.216,3.975;P<0.05)。干扰组细胞增殖受抑制,生长速度较对照组生长缓慢。干扰组G2/M期细胞比率为(8.87±0.29)%,与空白组(20.00±1.88)%和对照组(21.48±2.13)%比较明显减少,比较差异有统计学意义(LSD-t=2.015,2.323;P<0.05),干扰组S期细胞比率为(50.97±3.04)%,与空白组(36.67±6.18)%和对照组(39.91±2.09)%比较明显增加,比较差异有统计学意义(LSD-t=1.987,2.251;P<0.05)。干扰组细胞凋亡率为(18.4±2.3)%明显高于对照组(7.4±1.4)%和空白组(7.7±1.2)%,比较差异有统计学意义(LSD-t=2.585,2.667;P<0.05)。结论慢病毒介导siRNA可以沉默EGFR基因,抑制胰腺癌细胞增殖,阻滞细胞在S期
- 法镇中江勇谭玉林吴宝强石亮荣
- 关键词：慢病毒小干扰核糖核酸
