国家自然科学基金(81160090)
- 作品数：22 被引量：38H指数：4
- 相关作者：杨晓萍张春江赵丹马莉陈建平更多>>
- 相关机构：石河子大学石河子大学医学院第一附属医院新疆石河子大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高层次人才科研启动基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 活性维生素D_(3)对人肾小球系膜细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响被引量：2
- 2021年
- 目的探讨活性维生素D_(3)对肾小球系膜细胞中Bcl-2及Bax蛋白表达的影响及调控作用。方法将对数生长期的人肾小球系膜细胞随机分为4组,空白对照组加入MEM正常培养基培养,高糖组加入含30 mmol/L葡萄糖的MEM培养基培养,VD_(3)干预组加入含10^(-8) mol/L 1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25-(OH)_(2)D_(3)]的MEM培养基培养,联合干预组加入含10^(-8)mol/L 1,25-(OH)_(2)D_(3)和30 mmol/L葡萄糖的MEM培养基培养。各组均干预48 h后收集细胞,显微镜下观察各组细胞形态,应用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,应用Western blot法检测各组细胞中Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果显微镜下观察,高糖组、VD_(3)干预组、联合干预组细胞数目依次减少,细胞体积缩小、胞核皱缩,可见凋亡小体。高糖组、VD_(3)干预组和联合干预组的细胞凋亡率及Bax蛋白表达量均明显高于空白对照组(P均<0.05),VD_(3)干预组和联合干预组均明显高于高糖组(P均<0.05),联合干预组均明显高于VD_(3)干预组(P均<0.05);高糖组、VD_(3)干预组和联合干预组Bcl-2蛋白表达量及Bcl-2/Bax均明显低于空白对照组(P均<0.05),VD_(3)干预组和联合干预组均明显低于高糖组(P均<0.05),联合干预组明显低于VD_(3)干预组(P均<0.05)。结论高糖干预可促进人肾小球系膜细胞凋亡,活性维生素D_(3)干预高糖诱导下的人肾小球系膜细胞可进一步诱导细胞凋亡,二者诱导细胞凋亡的机制可能与调节凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达有关。
- 刘刚任国臣杨晓萍
- 关键词：细胞凋亡BCL-2蛋白BAX蛋白
- 1,25(OH)_2D_3对人肾小球系膜细胞增殖及mTOR/p70s6K表达的影响
- 2015年
- 目的：探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25（OH）2D3]对人肾小球系膜细胞增殖的影响及其在肾小球系膜细胞调控中对mTOR/p70s6K信号通路的作用。方法体外培养人肾小球系膜细胞，取传代培养至3～7代细胞分为4组：正常对照组（加含5%胎牛血清DMEM培养基），VD组[加1,25（OH）2D310-8 mol/L]，R组（加雷帕霉素5 mg/L），R＋VD组[加雷帕霉素5 mg/L及1,25（OH）2D310-8 mol/L]，干预48 h。采用细胞增殖与活性检测试剂盒CCK-8检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞周期时相分布，免疫荧光法检测细胞中mTOR、p70s6K的表达情况。结果正常对照组、VD组、R组、R＋VD组：（1）吸光度值（A450）依次降低，组间多重比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）；抑制率（IR）依次升高。（2）G1期细胞比例依次增加，S期、G2/M期依次减少，增殖指数（PI）依次降低，除R组与VD组比较差异无统计学意义外，其余组间多重比较差异均有统计学意义。（3）系膜细胞中mTOR、p70s6K蛋白表达强度均依次降低，除R组与VD组比较差异无统计学意义外，其余组间多重比较差异均有统计学意义。结论1,25（OH）2D3可显著抑制人系膜细胞增殖，且其可能通过抑制mTOR/p70s6K信号通路调控肾小球系膜细胞增殖。
- 唐玉玲马莉赵丹贾林杨锐杨晓萍
- 关键词：肾小球系膜细胞细胞增殖细胞周期1,25-二羟基维生素D3
- 1,25(OH)_2D_3对Thy-1肾炎大鼠Ki67、mTOR表达的影响
- 2015年
- 目的研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对Thy-1肾炎模型大鼠Ki67和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)表达的影响,并探讨其机制。方法 90只清洁级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、1,25(OH)2D3组,每组30只。模型组与1,25(OH)2D3组尾静脉注射抗Thy-1单克隆抗体建立肾炎模型,对照组给予等剂量生理盐水。建模后,1,25(OH)2D3组给予1,25(OH)2D30.5μg/d灌胃,连续给药21 d,对照组及模型组给予等体积花生油。分别于给药后第1、3、7、14、21天每组随机处死6只大鼠,处死前1 d收集24 h尿液进行24 h尿蛋白定量;取各组肾组织标本,经HE和PAS染色后进行肾脏病理损害评分,免疫组化法检测肾组织中Ki67、m TOR表达。结果模型组和1,25(OH)2D3组大鼠在建模后第1天尿蛋白水平升高,模型组第3天达高峰,至第14天恢复至正常水平,1,25(OH)2D3组大鼠第1、3、7天的尿蛋白水平均低于模型组(P<0.05)。1,25(OH)2D3组大鼠肾组织病理损害程度第3、7天较模型组减轻(P<0.05),Ki67、m TOR蛋白表达水平较模型组降低(P<0.05)。24 h尿蛋白定量,Ki67表达水平,m TOR表达水平及肾组织病理损害评分彼此间均呈正相关。结论 1,25(OH)2D3可抑制Thy-1肾炎模型大鼠肾小球系膜细胞的增殖,其作用机制可能与减少Ki67、m TOR的表达有关。
- 杨锐索洁李建锋王文政赵瑾陶林杨晓萍
- 关键词：蛋白尿哺乳动物雷帕霉素靶蛋白KI671,25(OH)2D3THY-1肾炎
- 大鼠足细胞的原代培养及其Nephrin的特异表达被引量：1
- 2017年
- 目的建立简便的大鼠足细胞原代培养体系,检测其去氧肾上腺素(Nephrin)mRNA及蛋白的表达水平。方法无菌取肾,分离肾皮质,胶原酶消化法分离肾小球,培养9~10 d,胰蛋白酶差异消化法传代,过筛去除肾小球继续培养5~7 d:形态学观察和间接免疫荧光法进行足细胞鉴定;流式细胞仪分析足细胞纯度;实时定量PCR(qRT-PCR)、间接免疫荧光法和Western blot法比较前三代足细胞中Nephrin mRNA及蛋白的表达水平。结果接种5 d后大部分肾小球贴壁,肾小球周围有细胞爬出,其最外缘有树枝状细胞分布,形态学及特异性抗体Nephrin、WT-1鉴定为足细胞;流式细胞仪分析足细胞纯度为94.7%;间接免疫荧光和qRT-PCR均显示:与第二、三代足细胞相比,第一代足细胞中Nephrin mRNA和蛋白表达均较高(均P<0.05);Western blot示体外培养大鼠足细胞表达两种分子量的Nephrin,且第一代足细胞Nephrin灰度值高于第二、三代足细胞(P<0.05)。结论酶消化法结合差异过筛法接种可促进肾小球贴壁,有利于培养纯度高的足细胞;大鼠足细胞体外培养条件下能特异性表达Nephrin结构及功能蛋白。
- 顾杰张春江贾林杨晓萍
- 关键词：足细胞细胞培养技术NEPHRIN
- 钙对人系膜细胞增殖及1,25-D3-MARRS蛋白表达的影响被引量：2
- 2019年
- 目的探讨钙离子对人肾小球系膜细胞(HMC)增殖的影响及维生素D膜相关快速反应结合蛋白(1,25-D3-MARRS)表达的改变。方法①体外培养HMC,给予不同浓度钙离子培养液干预细胞48 h,分为3组:正常对照组(0 mol/L CaCl 2)、低钙组(10^-4 mol/L CaCl 2)、高钙组(1.8×10^-3 mol/L CaCl 2);② CCK-8法检测细胞增殖能力;③免疫荧光法和Western blot法检测各组1,25-D 3-MARRS蛋白的表达;④ RT-PCR法检测各组1,25-D 3-MARRS mRNA的含量。结果①与正常对照组比较,低钙组(10^-4 mol/L) HMC抑制率增高,高钙组(1.8×10^-3 mol/L ) HMC的抑制率降低( P <0.05);② 1,25-D 3-MARRS在各组HMC均有表达,且主要表达在细胞膜,与正常对照组比较,低钙组1,25-D 3-MARRS蛋白表达升高( P <0.05);高钙组蛋白表达降低,但差异无统计学意义;③与正常对照组比较,低钙组 1,25-D 3-MARRS mRNA 表达升高( P <0.05),高钙组mRNA表达降低,但差异无统计学意义。结论低浓度钙离子可以抑制HMC的增殖,其作用机制可能与1,25-D 3-MARRS蛋白的表达增高有关。
- 任国臣刘刚赵丹顾杰杨晓萍
- 关键词：肾小球肾炎钙离子系膜细胞
- 1,25-二羟维生素D_3对人系膜细胞增殖与凋亡的影响被引量：6
- 2014年
- 目的:探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对人系膜细胞增殖与凋亡的影响。方法 :体外培养人系膜细胞,随机分为4组:正常对照组、表皮生长因子(EGF)(10 ng/mL)组、1,25(OH)2D3(10-8mol/L)组、EGF联合1,25(OH)2D3干预组,采用CCK-8法检测各组干预48 h后系膜细胞的增殖情况,流式细胞术检测各组干预48 h后系膜细胞周期分布情况,TUNEL法检测各组干预48 h后系膜细胞凋亡情况。结果:与正常对照组相比,EGF组能显著促进系膜细胞增殖,G1期细胞显著减少,S期细胞显著增加,且凋亡指数显著降低(P<0.01),1,25(OH)2D3组系膜细胞增殖显著受抑制,G1期细胞增加,S期细胞减少,且凋亡指数增高(P<0.01);与EGF组比较,EGF联合1,25(OH)2D3干预组系膜细胞增殖显著受抑制,G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少,且凋亡指数显著增高(P<0.01或P<0.05)。结论 :1,25(OH)2D3可显著抑制人系膜细胞的增殖,促进其凋亡,且1,25(OH)2D3可抑制EGF对系膜细胞的促增殖作用及抑制凋亡的作用。
- 陈建平张春江赵丹马莉尹璇杨晓萍
- 关键词：肾小球系膜细胞表皮生长因子增殖凋亡
- 连续性肾脏替代治疗时机对肺结核合并急性肾损伤的效果评价
- 2022年
- 目的探讨连续性肾脏替代治疗(continuous renal replacement therapy,CRRT)不同介入时机治疗肺结核合并急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)患者的临床疗效及预后。方法回顾性分析2017年5月—2020年12月笔者所在医院收治的肺结核合并急性肾损伤患者68例,参照改善全球肾脏病预后组织(kidney disease:improving the global outcome,KDIGO)的AKI诊断指南将患者分为早期组和晚期组,进行CRRT治疗。比较两组治疗前后肾功能指标、炎症指标、疾病严重程度评分和肾功能恢复时间及28 d病死率。结果治疗5 d后早期组肾功能指标低于晚期组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者的炎症指标、入住ICU时长、呼吸机支持时间与血管活性药物使用时间、疾病严重程度评分、28d病死率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者的住院总时长、CRRT替代时长、肾功能恢复时间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于肺结核合并AKI患者,早期CRRT介入有利于改善患者的整体预后。
- 贺德刚许秀华白培进杨晓萍林志君周荣
- 关键词：连续性肾脏替代治疗介入时机肺结核急性肾损伤
- 活性维生素D_3对大鼠肾小球系膜细胞增殖影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨活性维生素D3(1,25(OH)2D3)对大鼠系膜细胞增殖的影响。方法体外培养大鼠系膜细胞,随机分为正常对照组、表皮生长因子(EGF)(10 ng/m L)组、1,25(OH)2D3(10-8mol/L)组、EGF联合1,25(OH)2D3组,采用MTT法检测各组干预48 h后对大鼠系膜细胞增殖的影响,流式细胞术检测各组干预48 h后大鼠系膜细胞周期分布情况,免疫荧光法检测各组干预48 h后,大鼠系膜细胞中增生性细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果与正常对照组比较,EGF组能明显促进大鼠系膜细胞增殖,G0/G1期细胞减少,S期及G2/M期细胞增加,且PCNA表达增加,1,25(OH)2D3组大鼠系膜细胞增殖受抑制,G0/G1期细胞增加,S期及G2/M期细胞减少,且PCNA表达降低;与EGF组比较,EGF联合1,25(OH)2D3干预组系膜细胞增殖受抑制,G0/G1期细胞增多,S期及G2/M期细胞减少,且PCNA表达降低。结论 1,25(OH)2D3可阻滞大鼠系膜细胞的细胞周期并抑制大鼠系膜细胞的增殖和EGF对大鼠系膜细胞的促增殖作用。
- 张春江陈建平赵丹陈志刚杨晓萍
- 关键词：1,25(OH)2D3肾小球系膜细胞
- 活性维生素D_3对人系膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响被引量：3
- 2015年
- 目的探讨活性维生素D3〔1,25(OH)2D3〕对人系膜细胞凋亡的影响,并初步探究其作用机制。方法体外培养人系膜细胞,随机分为4组:正常对照组,表皮生长因子(EGF)组,1,25(OH)2D3组,EGF联合1,25(OH)2D3组,采用流式细胞术检测各组系膜细胞的凋亡率,Western blotting检测各组半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的情况。结果与正常对照组比较,EGF组系膜细胞凋亡率降低,Caspase-3表达量降低(P<0.05),1,25(OH)2D3组系膜细胞的凋亡率升高,Caspase-3表达量升高(P<0.05);与EGF组比较,EGF联合1,25(OH)2D3组系膜细胞的凋亡率升高,Caspase-3表达量升高(P<0.05);EGF联合1,25(OH)2D3组与正常对照组系膜细胞的凋亡率和Caspase-3表达量间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 1,25(OH)2D3可能是通过上调Caspase-3的表达而诱导系膜细胞的凋亡。EGF可抑制人系膜细胞的凋亡,1,25(OH)2D3可逆转EGF对系膜细胞凋亡的抑制作用。
- 张昊尹璇陈建平马莉张春江刘春
- 关键词：人系膜细胞1,25(OH)2D3细胞凋亡表皮生长因子
- 1,25-（OH）2D3对阿霉素肾病模型大鼠足细胞损伤及podocin表达缺失的影响被引量：1
- 2019年
- 目的研究活性维生素D3〔1,25-(OH)2D3〕对阿霉素(ADR)肾病模型大鼠足细胞的作用及对podocin表达的影响。方法90只雄性SD大鼠随机选取30只作为对照组,其余60只被一次性尾静脉注射ADR7.5mg/kg。建模成功后,随机均分为ADR组、治疗组,治疗组每日给予1,25-(OH)2D30.25μg/kg灌胃,对照组及ADR组每日给予等量的花生油灌胃。于治疗第2、4、6、8、10周末收集24h尿,进行生化分析;取肾组织进行后续的组织学观察和分子水平检测。结果与对照组相比,ADR组24h尿蛋白显著增加(P<0.05),1,25-(OH)2D3显著减少24h尿蛋白含量(P<0.05)。苏木素-伊红(HE)染色结果显示,对照组肾小球形态完好,ADR组肾小球基底膜增厚、肾间质纤维化、大量炎性细胞浸润,1,25-(OH)2D3治疗减轻了肾小球损伤。电镜观察显示:与对照组比较,模型组足细胞超微结构发生改变,出现细胞空腔、细胞核畸形,基底膜呈节段性增厚、足突被压扁且融合;1,25-(OH)2D3治疗后,足细胞损伤减轻。免疫组织化学检测显示:podocin主要定位于细胞膜,在正常肾小球中高表达,而ADR组表达较低(P<0.05);1,25-(OH)2D3治疗后,podocin的表达显著增高(P<0.05)。荧光定量PCR和Western印迹结果显示:podocin mRNA和蛋白水平具有高度的一致性,与对照组相比,ADR组表达显著降低(P<0.05);1,25-(OH)2D3治疗后,podocin表达有所恢复。结论1,25-(OH)2D3能够改善ADR肾病模型大鼠肾脏足细胞损伤,逆转podocin蛋白表达缺失,从而减少24h尿蛋白,发挥重要的肾脏保护作用。
- 赵丹陈亚茹于曼丽马国英杨晓萍罗星
- 关键词：活性维生素D3足细胞PODOCIN
