河北省自然科学基金(C2008001065)
- 作品数：5 被引量：11H指数：1
- 相关作者：吕占军王秀芳王晓燕谢英王红钢更多>>
- 相关机构：河北医科大学河南大学河北医科大学第三医院更多>>
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- L1-ORF2不同位置的片段对GFP报告基因表达的影响
- 人类基因组约有40-50%的序列属于重复 DNA 序列,长散在核元件(long interspersed nuclear elements,LINEs)是其中重要的一种类型。LINEs 包括 LINE-1(L1)和 LI...
- 王秀芳谢英段肖翠吕占军
- 关键词：L1GFP
- 文献传递
- L1-ORF2不同片段对报告基因表达产生不同影响被引量：7
- 2009年
- 长散布重复序列-1（Line-1，LI）是重要的人类基因组成分，完整的LI有6kb，在基因组中存在的L，多数是不完整序列，有必要研究LI片段对基因表达的调控作用。PCR扩增LI第二读码框（LI-ORF2）不同位置的280bp片段，共7段，同向8串联按正、反方向分别插入pEGFP质粒GFP基因下游，观察插入序列对GFP报告基因表达的影响。构建的质粒瞬时转染HeLa细胞，经荧光显微镜和Northern检测，不同片段对转录量和终止影响不同。7个片段正序对GFP报告基因的抑制均高于其反序，在正序串联表达载体p280—1＊8和p280—9＊8的GFP基因转录量超过其他280正序插入片段，在反序串联表达载体p280—1＊8as和p280．9＊8as的G即基因转录量超过其他280反序片段。280．1。8、280—9＊8、280—1＊8as和280—9＊8as属于转录终止性序列。Alu在基因组的多数区段与L，分布呈反比，Alu正、反序均对GFP表达有抑制作用，但反序抑制作用高于正序，Alu正序属于转录延伸性序列。280bp片段反序插入的所有质粒荧光阳性细胞均高于正序插入质粒。经碱基分析，L1-ORF2各段均存在A碱基含量多，T碱基含量少的现象，这可能是其正、反序对基因表达影响不同的原因。
- 段肖翠靳霞谢英焦宁刘静王晓燕吕占军
- 关键词：L1ALUPEGFP-C1ORF2GFP
- SV40PolyA片段串联拷贝数目影响GFP报告基因表达被引量：1
- 2011年
- Alu元件(约280bp)是人类基因组中的重要重复序列,串联Alu呈长度依赖性下调GFP报告基因表达,在Alu串联序列上游正向或反向插入SV40PolyA(简称PolyA,240bp),解除Alu串联序列对GFP基因的抑制作用.PCR法扩增PolyA反序(PolyAas)不同位置的60bp片段,插入pAlu14质粒(14个Alu正向串联插入pEGFP-C1)的GFP基因和Alu14之间,瞬时转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察和Northern检测,1F1R(PolyAas5′端第1个60bp片段)和4F4R(自PolyAas5′端计算第4个60bp片段)不能活化基因;2F2R和3F3R(PolyAas中间的2段)可以解除Alu14对GFP基因的抑制作用.将2F2R和3F3R各自反复首尾串联,分别插入pAlu14质粒GFP基因和Alu串联序列之间,瞬时转染HeLa细胞,用插入4个2F2R的pAlu28,插入4个3F3R的pAlu18,插入4个3F3R的pAlu28作长度对照,以排除由于插入片段长度增加可能对结果造成的干扰,发现2～4个拷贝的2F2R和3F3R活化基因作用高于一个拷贝的同样片段,但是多于8拷贝以后,活化GFP基因作用减弱.本实验证明,SV40 PolyAas至少含有两段活化基因序列,活化基因序列(2F2R,3F3R)的最适活化基因条件需要合适的拷贝数.
- 尹康马欢王秀芳谢英冯晶晶杨钦清吕占军
- 关键词：拷贝数GFPALU
- SV40PolyA顺式活化基因元件中不完整茎环结构的发现和序列研究被引量：1
- 2011年
- 研究室的前期工作发现,Alu串连序列插入pEGFP-C1质粒的GFP基因下游,瞬时转染HeLa细胞抑制GFP基因表达,2F2R(来自SV40PolyA反序5′端的第2个60 bp)插入GFP和Alu串连序列之间可以解除Alu序列对GFP基因的抑制作用。文章通过删减2F2R发现,45R(2F2R 5′端的45 bp)、30R和22R可以活化基因,且二串连体活化基因作用高于单体。Secloop(2F2R近中部的22 bp)和Poly4(2F2R 3′端的30 bp)不能活化基因。30R与Poly4用9碱基连接形成30R-Poly4,其活化基因作用低于2F2R,两个22R之间连接碱基数对活化GFP基因作用没有明显的影响。22R(5′-GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3′)含有不完整的回文序列,可以形成不完整的茎环结构,包括一个3碱基loop、3 bp第一茎、2碱基泡和3 bp第二茎。改变22R茎环结构的碱基突变明显影响其活化GFP基因的作用,过多互补和过少互补的茎环结构均不利于活化基因,提示适当的不完整茎环结构与活化基因有关。
- 王红钢马欢李珠张彬景向阳张媛吕占军
- 关键词：非编码序列GFP茎环结构ALU
- SV40 PolyA序列及其AATAAA信号对上游GFP基因表达及转录终止的影响被引量：1
- 2012年
- SV40 PolyA(猴空泡病毒PolyA,简称PolyA)序列是有转录终止作用和使转录的mRNA添加PolyA尾的DNA序列(240 bp),含有AATAAA六核苷酸多腺苷化信号(Polyadenylation signal)。在pEGFP-C1质粒的GFP基因下游插入14个同向串联的Alu序列(Alu14),构建pAlu14质粒,瞬时转染HeLa细胞,用Northern blot检测和荧光显微镜观察GFP RNA和GFP蛋白表达,发现Alu串联序列强烈抑制GFP基因表达,该序列没有转录终止作用产生高分子量GFP融合RNA。又在pAlu14质粒GFP基因和Alu串联序列之间按正、反方向插入PolyA序列及去除AATAAA信号的PolyA序列,插入的这些PolyA序列均能部分解除Alu14对GFP基因的抑制作用;去除AATAAA信号的PolyA正、反序列仍然引起转录终止。将PolyA反序(PolyAas)分为4段每段60 bp,中间的2段分别称为2F2R和3F3R,将2F2R或3F3R插在pAlu14质粒的Alu串联序列的上游,随着插入2F2R片段拷贝数的增加转录的GFP融合RNA的分子量增加;2F2R的下游如果依然是2F2R那么2F2R可以支持转录延伸,如果2F2R下游是Alu串联序列则2F2R导致转录终止。无论插入一个3F3R或插入64个3F3R,均产生低分子量GFP RNA。
- 李书平冯晶晶王红钢王秀芳吕占军
- 关键词：ALUSV40POLYAGFP转录终止
- 反义RNA在细菌、病毒研究中的进展被引量：1
- 2008年
- 反义RNA(asRNA)不仅可以调节真核生物基因表达,而且在细菌和病毒中也有沉默基因作用。耐药细菌不断增加,而发现具备新作用机制的抗生素已经非常困难,asRNA可以增敏细菌对潜在抗生素的作用,在发现新抗生素方面有应用价值。目前缺乏对人类1型免疫缺陷病毒(HIV-1)和人类乳头瘤病毒16型(HPV-16)感染的有效治疗措施,asRNA对这两种病毒有多个作用靶点,有希望发展成治疗病毒感染的有效药物。
- 王晓燕王秀芳吕占军
- 关键词：增敏抗生素HIV-1HPV-16
