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LCR 6013降解亚硝酸盐的途径及其亚硝酸盐还原酶的初步定位被引量：14: 2013年; 研究了在De Man,Rogosa and Sharpe medium(简称MRS培养基)体系中NaCl、Vc对Lactobacillus casei subsp.rhamnosus6013(简称LCR 6013)降解亚硝酸盐的影响。并利用电子捕获-气相色谱法和靛酚蓝染色法确定亚硝酸盐的降解途径。通过测定LCR6013细胞中不同组分的酶活研究了亚硝酸盐还原酶(Nitrite reductase,NiR)的定位。在MRS体系中,NaCl、Vc浓度分别为0.75%、0.02%时,LCR 6013对亚硝酸盐的降解量最高分别为9.29μg/mL和9.89μg/mL,与对照比,此降解效果显著(p 0.01)。当NaNO2初始量为10.00μg/mL时,降解产物中含有28.81 10-6的N2O气体,没有NH4+。当NaNO2初始量为50.00μg/mL,在16 h时LCR 6013能够将NaNO2完全降解,14 h时N2O体积百分比含量最高为96.61 10-6;细胞周质间隙中NiR酶活是细胞质中的2.5倍。总之,在MRS体系中,LCR 6013能有效降解亚硝酸盐是源于细胞内亚硝酸盐还原酶NiR的作用;最可能通过NO2-NO N2O N2的途径进行降解,而非铵化作用;降解产物中含有N2O气体。; 张馨月刘冬梅许喜林李平李理; 关键词：干酪乳杆菌鼠李糖亚种一氧化二氮反硝化

蜡样芽孢杆菌LJ01的鉴定及亚硝酸盐还原酶性质被引量：3: 2015年; 从豆瓣酱中筛选出一株能高效降解亚硝酸盐的菌株LJ01,经鉴定为蜡样芽孢杆菌.通过测定LJ01细胞中不同组分的酶活,研究了亚硝酸盐还原酶的初步定位.LJ01经100 mg/L的Na NO2诱导后,用溶菌酶破壁,粗酶液先经阴离子DEAE Sepharose Fast Flow层析柱分离,测定不同蛋白组分a、b、c降解亚硝酸盐的活力,利用0.1 mol/L无机电子供体丁二酸和亚硫酸钠等鉴定出组分c为亚硝酸盐还原酶,再经葡聚糖凝胶G-150层析柱分离,获得较纯的亚硝酸盐还原酶,每升发酵液可得到0.54 mg活性酶蛋白,酶蛋白活力达到4004.89 U/mg,得率为2.37%,纯化后其NiR的比活力提高了17.57倍.经SDSPAGE电泳后确定LJ01中亚硝酸盐还原酶的单体分子质量约为30 ku.; 刘冬梅罗彤晖杨丹霞黄娟吴晖余以刚李理; 关键词：蜡样芽孢杆菌 RDNA 细胞定位

花生粕的枯草芽孢杆菌BSH001发酵及产物性质被引量：4: 2014年; 为改善花生粕中的氨基酸平衡,减少花生蛋白质中的过敏原,将枯草芽孢杆菌BS H001用于花生粕的发酵,对发酵条件进行了优化,并研究了发酵后花生粕的部分性质.正交试验结果表明:枯草芽孢杆菌BS H001发酵花生粕的最优条件为含水量52%、发酵时间44 h、搅拌间隔8 h、灭菌时间45 min、硫酸铵含量4.0%,在此条件下发酵花生粕中的蛋白质含量达56.20%,比花生粕的提高了23.49%;发酵花生粕中非必需氨基酸、必需氨基酸和总氨基酸的含量分别提高了4.92%、43.97%和16.49%.SDS-PAGE电泳分析表明,经优化后第9、13、15、16组发酵花生粕中分子质量为63、48、41 ku的蛋白质大分子被全部降解.上述结果表明,BS H001发酵花生粕可成为动物可利用高蛋白质的来源.; 刘冬梅陈浩胡小慧吴晖李理; 关键词：发酵枯草芽孢杆菌花生粕氨基酸电泳正交试验

戊糖乳杆菌的鉴定及其发酵D-乳酸的研究被引量：1: 2013年; 分离得到1株乳酸杆菌LCA,根据其形态、生理生化性质和16S rDNA分子生物技术鉴定,被鉴定为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus),其发酵产物经手性柱高效液相色谱法测定,含有光学纯度为80%以上的D-乳酸,并能利用D-木糖产生D-乳酸。筛选合适的D-乳酸生产菌株和研究D-乳酸的发酵技术对拓宽D-乳酸的应用范围具有重要意义。; 周劲松刘冬梅曹燕华张馨月; 关键词：戊糖乳杆菌 RDNA D-乳酸手性柱

植物乳杆菌DMDL 9010中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化被引量：10: 2015年; 研究了植物乳杆菌DMDL 9010亚硝酸盐还原酶基因克隆、表达及表达产物的纯化。首先以植物乳杆菌DMDL 9010的DNA为模板,利用PCR扩增亚硝酸盐还原酶基因,扩增后nir编码序列大小为1638 bp,再将其编码序列克隆到原核表达载体p ET-32a(+)上,转化到感受态细胞DH5α,成功构建重组质粒p ET-32a(+)-nir。将重组质粒转化到大肠杆菌表达菌株E.coli BL21中,在IPTG浓度为1 mmol/L和诱导温度为25℃的条件下诱导4 h后诱导表达NIR蛋白,经诱导后的工程菌能将50μg/m L的亚硝酸盐降解90%以上,利用亲和层析柱Ni sepharose 6 Fast flow进行纯化得到重组蛋白,该重组蛋白经SDS-PAGE电泳后的分子量约为60 KDa。总之,经由植物乳杆菌DMDL 9010克隆出亚硝酸还原酶基因,并成功构建了重组质粒p ET-32a(+)-nir,利用基因工程方法得到的工程菌能有效降解亚硝酸盐,并能利用亲和层析得到高纯度的NIR。; 王盼费永涛刘冬梅黄娟吴晖余以刚唐语谦肖性龙; 关键词：植物乳杆菌基因克隆蛋白表达工程菌

黑曲霉A.niger 6640生物转化制备蔗果低聚糖: 2015年; 优化了黑曲霉A.niger 6640发酵制备蔗果低聚糖的发酵条件,研究了A.niger6640中β-呋喃果糖苷转移酶(β-Ffase)的性质,用阴离子柱DEAE Sepharose CL-6B对β-Ffase进行了分离纯化,用SDS-PAGE电泳初步分析了β-Ffase的分子质量.结果表明:A.niger 6640发酵制备FOS的最佳p H值为7.6、最佳发酵时间为40 h、最佳发酵温度为33℃、最佳蔗糖质量分数为40%;在磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中,采用真空干燥工艺从A.niger 6640中制得的β-Ffase的催化反应的最佳p H值为6.5、最佳反应时间为16 h、最适酶用量为0.19 g;分离纯化得到的β-Ffase的分子质量约为75 ku.; 刘冬梅周劲松尚雍贺杨丹霞柯亦纯于淑娟; 关键词：蔗果低聚糖生物转化

牛奶中β-内酰胺类抗生素残留检测试剂盒的研制被引量：3: 2014年; 以牛奶中残留的β-内酰胺类抗生素为检测目标,开发一种能快速检测其残留的试剂盒。利用嗜热脂肪芽孢杆菌BS 10208对酸和β-内酰胺类抗生素敏感的特点,优化其最优的生长条件,并制成在2.5 h内能发生显色反应的检测试剂盒。单因素结果表明,当菌液接种量5%、生长初始pH 8.0、培养温度55℃、蛋白胨添加量0.50%,其菌落数对数值分别为2.9、7.5、7.3、5.8。正交结果表明,在外加入0.5%蛋白胨营养肉汤中,接种5%种子液,在65℃恒温振荡器中培养24 h,其菌落数对数值为7.6。优化后检测试剂盒在2.5 h内能检测牛奶中β-内酰胺类抗生素残留,其各项参数为:反应体积为0.5 mL,1.5%琼脂,0.01 g/L溴甲酚紫浓度,BS 10208细胞总数为1.30×108 cfu,最适反应温度65℃,青霉素钠的限值为2～4μg/L。该试剂盒还能检测牛奶中残留的四环素类、磺胺类、大环内酯类、氨基糖苷类等抗生素。; 刘冬梅郭均梁洁英吴晖余以刚李晓凤唐语谦; 关键词：嗜热脂肪芽孢杆菌 Β-内酰胺类抗生素牛奶溴甲酚紫

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