江苏省医学重点学科基金(2003-19)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 人IL-1RⅡ基因腺病毒载体的构建及在子宫内膜异位症细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:利用AdEasy XL系统,构建并鉴定IL-1RII基因重组腺病毒载体,并在子宫内膜异位症(EM)细胞中表达。方法:PCR扩增含有IL-1RII全长cDNA的片段,亚克隆到pShuttle-CMV穿梭质粒,经酶切和测序验证无误后,再经电转化与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生腺病毒载体质粒。经过抗性筛选、酶切鉴定以及再次测序验证无误后得到阳性的重组质粒,经PacI酶切线性化再在293细胞中进行包装扩增,用ELISA检测IL-1RII蛋白的表达。利用Adeasy XL系统的对照载体pShuttle-CMV-LacZ同上操作作为对照。收集的重组腺病毒感染原代培养的EM基质细胞,并以免疫组化法鉴定IL-1RII表达。结果:测序证实连接后IL-1RII序列完全正确;抗性筛选及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;pShuttle-CMV-LacZ转染293细胞3d后X-gal染色阳性,回收病毒可以重复感染293细胞,ELISA鉴定表达IL-1RII可溶性蛋白,证明病毒包装成功。重组的腺病毒感染EM基质细胞后,免疫组化法证实IL-1RII表达。结论:成功地构建了IL-1RII基因重组腺病毒载体,并且在EM基质细胞中表达,为进一步研究IL-1RII基因在EM中的作用乃至生物治疗都奠定了基础。
- 侯振周静高李英胡艳秋刘嘉茵
- 关键词：子宫内膜异位症
