国家自然科学基金(31160004) 作品数:9 被引量:22 H指数:3 相关作者: 岳昌武 邵美云 李园园 王苗 保玉心 更多>> 相关机构: 遵义医学院 中国科学院 昆明理工大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 贵州省科学技术基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
赤水丹霞来源抗白色念珠菌放线菌分离及进化分析 被引量:6 2014年 目的分离、筛选抗白色念珠菌放线菌菌株,为开发微生物来源的抗白色念珠菌感染药物提供菌株资源。方法采集赤水丹霞山区土壤样品,利用不同的放线菌选择培养基分离、纯化单菌落。提取分离菌株基因组DNA,以细菌16S rRNA通用引物PCR扩增16S rRNA基因,产物测序并比对分析以确定分离菌株的分类地位。小量发酵产物进行抗白色念珠菌活性测试。结果筛选得到7株具有抗白色念珠菌活性的放线菌,其中6株为链霉菌,1株为地中海拟无枝酸菌。结论从赤水丹霞山区分离得到多株具有抗白色念珠菌活性的放线菌,可为开发微生物来源的抗白色链珠菌药物提供菌株来源。 王苗 李园园 邵美云 罗显涛 吴述铭 曾令荣 胡咏雄 岳昌武关键词:白色念珠菌 抗菌活性 RRNA 系统发育分析 贵州5种药用植物内生菌的分离及次级代谢产物研究 被引量:5 2013年 目的分离筛选具有抗菌活性及抗肿瘤活性的药用植物内生菌。方法采集贵州地道药用植物大黄、刺梨、杜仲、白芍和刺五加等5种组织材料,经表面消毒、无菌匀浆后,用改良的GYM培养基和TWYE培养基进行分离,利用耐药大肠杆菌、耐药金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌及白色链球菌等测试菌和稻瘟霉模型对分离菌株的发酵产物进行筛选,并通过HPLC对活性菌株发酵产物做进一步分析。结果分离得到植物内生菌180株,其中46株有不同程度的抗菌活性,占分离菌株总数的25.6%,58株菌有不同程度的抗稻瘟霉活性,占分离菌株总数的32.2%。结论 5种药用植物中内生菌种类极其丰富,且有活性的菌株所占比例较高,HPLC检测有新的紫外吸收峰,值得对其次级代谢产物进一步研究。可见贵州药用植物具有丰富的活性内生菌资源,有巨大的开发研究价值。 李园园 彭廷文 吕玉红 保玉心 邵美云 罗显涛 曾令荣 岳昌武关键词:药用植物 内生菌 发酵产物 抗菌活性 抗肿瘤活性 赤水丹霞山土壤来源抗菌活性链霉菌的分离及放线菌素产生链霉菌Streptomyces sp.CSDX001发酵产物分析 被引量:3 2014年 分离、鉴定赤水丹霞地区土壤来源的抗临床耐药菌活性的链霉菌。采集赤水丹霞山区不同海拔的土样并利用多种培养基分离、纯化菌株。热酚法提取菌株基因组DNA,PCR扩增16S r RNA基因并测序后在线比对以确定其系统分类学地位。利用多种测试菌测试抗菌活性,通过HPLC和LC/MS分析菌株发酵抽提物并与数据库比较。分离得到菌株600株,其中59株链霉菌中有41株具有1种以上的抗测试菌活性。Streptomycetes sp.CSDX001具有抗耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、抗耐万古霉素金黄色葡萄球菌、抗多药耐药鲍曼不动杆菌、抗枯草芽孢杆菌、抗藤黄微球菌、抗白色念球菌的活性,具有抗多种微生物的活性和产生多种新结构次级代谢产物潜力,可能是抗微生物新天然活性产物的重要来源。 岳昌武 李园园 黄兵 罗显涛 邵美云 王苗 保玉心 黄英关键词:链霉菌 抗菌活性 RRNA 次级代谢产物 链霉菌CSDX076次级代谢产物PseurotinA的分离及结构鉴定 被引量:2 2016年 对从赤水丹霞山土壤样品中分离得到的链霉菌(Streptomyces sp.)CSDX076进行液体发酵。利用乙酸乙酯萃取,硅胶柱层析、薄层层析和反相中压柱层析对发酵液中的次级代谢产物进行分离、纯化;通过核磁共振法对纯化的分离产物进行结构鉴定。结果表明,该研究从链霉菌属中成功分离得到次级代谢产物Pseurotin A。采用滤纸片法对Pseurotin A进行抗菌活性测试,Pseurotin A对金黄色葡萄球菌具有抑制作用,其抑菌圈直径为5.0 mm。 钱声艳 李宇真 邵美云 程桂广 保玉心 岳昌武关键词:次级代谢产物 链霉菌Streptom yces olivaceusFXJ7.023多功能葡糖淀粉酶SoGA的克隆、表达及鉴定 2015年 根据海洋来源链霉菌Streptomyces olivaceus FXJ7.023基因组测序结果设计特异引物,通过PCR扩增获得1条全长为1 788 bp的糖苷水解酶15家族蛋白新成员完全编码区DNA片段,该片段编码1个595个氨基酸残基、分子量为66.2 k D的预测蛋白。利用基因工程技术将该片段重组入原核表达质粒p ET32a并转化宿主菌BL21(DE3)ply Ss,IPTG诱导融合蛋白表达,表达的包涵体融合蛋白经纯化、复性后利用DNS法测定其在不同温度、p H条件下催化不同底物产生还原糖的活性。结果表明,该酶能够水解纤维素、淀粉等多种底物产生还原糖活性,且对不同底物表现不同的最适p H和最适反应温度。 王苗 李园园 岳昌武 邵美云 吕玉红 保玉心 黄英关键词:链霉菌 基因克隆 蛋白表达 酶活 海洋链霉菌Streptomyces olivaceus FXJ7.023来源多功能几丁质酶的克隆、表达及鉴定(英文) 被引量:3 2014年 碳水化合物水解酶家族在自然界碳素循环及农业废弃物中几丁质、纤维素等碳水化合物的生物质转化利用中发挥了重要作用。通过PCR技术从海洋链霉菌Streptomyces olivaceus strain FXJ 7.023的fosmid基因组文库中成功克隆得到1个全长885bp的编码295个氨基酸残基的包含1个19个氨基酸残基的N-末端信号肽的壳聚糖酶完全编码区。系统进化分析表明该基因编码蛋白与已报道的Streptomyces sp.SirexAA-E来源壳聚糖酶csnA同源性为71%,与Streptomyces coelicolor A3(2)来源的csn46A同源性为70%。将该编码区重组入原核表达质粒载体pET32a并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)plysS,添加IPTG在18℃条件下振荡诱导该蛋白表达,Ni2+-NTA亲和纯化获得分子量为50.3 kDa融合表达蛋白TrxA-SoCsn。该融合重组蛋白在最适反应条件下对底物胶体壳聚糖和羧甲基纤维素的最大酶活分别为3.673U/mg和1.302U/mg,最适反应温度分别为37℃和50℃,最适反应pH分别为pH5.0和pH6.0。TrxA-SoCsn相关的研究结果表明该酶在农业废弃物生物质转化等方面具有一定的应用潜力。 岳昌武 李园园 吕玉红 王苗 邵美云 刘明皓 黄英关键词:几丁质酶 异源表达 生物催化 抗多种病原微生物菌株的分离与鉴定 被引量:3 2014年 为畜牧养殖业新型抗生素药物的研究和开发利用提供优良菌株,采用分离纯化、形态学、分子生物学和超高压液相-紫外二极管阵列-高分辨率质谱联用(UPLC-DAD-HRMS)方法对贵州赤水丹霞地貌区300份土样中的菌株进行分离鉴定。结果表明:1)在分离纯化获得的31株菌株中,有21株菌株对耐万古霉素金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌和藤黄微球菌表现出不同的抗菌活性。其中,有8株菌株表现出抗2种测试菌生物活性,1株菌株(S.sp.CSDX435)表现出抗3种测试菌生物活性,1株菌株(S.sp.CSDX416)表现出抗4种测试菌生物活性。2)有20株分离菌株与Stenotrophomonas sp . A18嗜麦芽窄食单胞菌的16S rRNA同源性达99%,为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophononas maltophilia);11株菌株与S.sp.A18的16S rRNA同源性达78%~97%。其中,S.sp.CSDX58菌株与S.sp.A18的16S rRNA同源性最低,为78%,可能为嗜麦芽窄食单胞菌的新类群。3)从S.sp.CSDX252菌株的发酵代谢产物中发现了可能为聚醚类的新化合物 B,分子式为 C47 H78 O14,且产量较高。因此,在分离得到的31株菌株中,有21株菌株对1种或多种病原微生物表现出不同的抗菌活性,可作为畜禽新型抗生素菌株进行深入研究和开发利用。 邵美云 李园园 岳昌武 王苗关键词:病原微生物 抗菌活性 微生物来源卤化天然产物研究进展 被引量:2 2016年 卤化天然产物特别是微生物来源卤化天然产物在生理和生物化学上具有重要作用,是抗生素类药物的重要来源,在控制病原微生物特别是耐药菌感染方面发挥着重要作用。本文综述了近年来发现的放线菌、真菌及其它微生物来源的卤化天然产物及其应用前景。 王荫荫 邵美云 岳昌武关键词:抗生素 真菌 放线菌 链霉菌查尔酮合成酶基因克隆及原核表达载体构建 2013年 根据Genbank数据库已知的链霉菌的查尔酮合成酶基因的保守区设计chs基因特异简并引物,土壤总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到该1条chs基因编码区,通过TA克隆、测序和同源比对及进化分析表明:该基因为放线菌来源chs基因.分别在该基因5'末端和3'末端分别引入的限制酶NcoI和EcoR I酶切位点,利用上述2种限制酶分别酶切导入到psimple-T/chs载体和原核表达pET32a,凝胶回收目的片段后,将二者连接并转化大肠杆菌感受态细胞,转化子经菌液PCR筛选、双酶切鉴定后,3730测序结果表明,该基因全长编码区为1089 bp,推测该基因编码全长为362个氨基酸残基,等电点(PI)为5.41、分子量为3 965道尔顿含有CHS保守功能区的酸性蛋白质.分析表明,该基因与Streptomyces lividans来源的查尔酮合成酶RppA基因核苷酸相似性高达93﹪,氨基酸序列相似性高达87.70﹪.测序结果表明,该基因已经成功插入到pET32a载体中. 肖静 吕玉红 李园园 陈雪梅 彭廷文 周春伶 曾令荣 保玉心 凌锌 岳昌武关键词:查尔酮合成酶 基因克隆 原核表达