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副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白研究进展被引量：3: 2012年; 副猪嗜血杆菌是猪革拉泽氏病的病原体,该病是近年来严重危害养猪业的细菌性传染病之一,呈世界性分布。副猪嗜血杆菌相关致病性毒力因子的研究目前很少,关于转铁结合蛋白更是鲜为人知。在此对副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白的结构、形成机制、影响因素及其免疫原性进行综述,对阐明致病菌的慢性感染机理有一定的生物学意义。; 李淑芳张培君龚玉梅侯娜赵兴绪贺云霞; 关键词：副猪嗜血杆菌

副猪嗜血杆菌外膜蛋白TbpB基因的克隆和表达: 2011年; 为了克隆和表达副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白TbpB基因,试验采用基因工程的方法对已发布的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计并合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得长为1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子质量约为41 ku,将该基因片段定向克隆至表达载体pGE X-6p-1中。结果表明:诱导表达后分子质量约为67 ku,与副猪嗜血杆菌阳性血清发生了特异性反应。说明该蛋白与抗体发生了反应,有一定免疫原性。; 叶飞张培君田德雨孙慧玲王宏俊龚玉梅贺云霞; 关键词：副猪嗜血杆菌克隆

副猪嗜血杆菌15个血清型标准分离株对小鼠毒力的研究被引量：10: 2011年; 为了确定Balb/c小鼠是否适合作为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的试验动物模型,试验用1～15血清型HPS标准菌株感染Balb/c小鼠,每只小鼠接种量为1.0×109 cfu。结果表明:用血清型1,2,5,10,12,13,14接种的5只小鼠均死亡4只,用血清型4,15接种的5只小鼠分别死亡2,3只,用血清型3,6,7,8,9,11接种的5只小鼠均没有死亡;各血清型的毒力与猪体试验的结果基本相符。说明Balb/c小鼠适合作为副猪嗜血杆菌的试验动物模型。; 贺云霞徐慧叶飞孙慧玲王宏俊龚玉梅张莉黄秀芬张培君; 关键词：副猪嗜血杆菌标准菌株小鼠毒力

Construction of Mutation Library in Haemophilus parasuis by Inserting Tn5 Transposon and the Screening of Attenuated Strain被引量：1: 2011年; [Objective] The study aimed to obtain attenuated strain of Haemophilus parasuis.[Method] Tn5 transposon technology was used to construct a library of mutants.Positive mutants were screened by kanamycin resistance.False positive was identified by PCR and then removed.Mice were infected to detect the virulence of mutants.The bionomics of attenuated strains were detected,too.[Result] The attenuated mutants showed similar reproductive activity to that of wild strain.The virulence of mutants was still stable after 30 passages.[Conclusion] This study provided foundation for exploring the virulence factors and pathogenic mechanism of HPS.; 贺云霞徐慧叶飞孙慧玲王宏俊龚玉梅张莉黄秀芬张培君; 关键词：TRANSPOSON

副猪嗜血杆菌单因子血清的制备被引量：1: 2014年; 利用副猪嗜血杆菌(Hps)的15个血清型的参考菌株分别制备相应的兔抗血清,然后对抗血清进行交叉吸收试验,得到15个血清型的单因子血清,不同血清型的单因子血清不与其他血清型抗原发生反应。应用这15种单因子血清对临床分离到的9株副猪嗜血杆菌进行血清型的鉴定,结果表明,其中6株为5型,2株为4型,1株为7型。; 路明华王雪敏李淑芳路迎迎张培君龚玉梅王宏俊; 关键词：副猪嗜血杆菌

副猪嗜血杆菌tbpB基因的PCR-RFLP分型: 2013年; 本研究应用生物学软件Vector NTI对副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)的转铁结合蛋白tbpB进行基因分型研究,通过选择AluⅠ、AvaⅡ和RsaⅠ3种限制性内切酶对15株Hps标准株和12株分离株的tbpB基因进行RFLP分析。经过生物学软件Vector NTI精确分型,标准株得到了11个基因型,其中基因型Ⅰ(AAA)包括血清型1、3和15,Ⅱ(BBB)包括血清型2、9和11;分离株的分型产生了10种基因型,其中6种为新的基因型。这一结果证实了Hps流行株的多样性,说明该方法对于猪革拉泽氏病流行病学规律的研究具有实用意义,同时,需要对更多的分离株做进一步的研究。; 李淑芳龚玉梅侯娜赵成全赵兴绪张培君; 关键词：副猪嗜血杆菌

副猪嗜血杆菌EZ-Tn5转座子插入突变体库的构建及减毒株的筛选被引量：5: 2011年; [目的]获得副猪嗜血杆菌减毒株。[方法]应用转座子技术构建转座子插入突变体库,卡那抗性筛选阳性菌株,PCR扩增卡那特异片段去除假阳性,小鼠感染试验检测突变株毒力,并对获得的减毒株进行生物学特性检测。[结果]所获得减毒突变菌株具有与野毒株相似的增殖能力,传代后毒力稳定,遗传学特性稳定。[结论]该研究结果为进一步探讨HPS毒力因子、致病机制奠定了基础。; 贺云霞徐慧叶飞孙慧玲王宏俊龚玉梅张莉黄秀芬张培君; 关键词：副猪嗜血杆菌转座子突变体库减毒株

副猪嗜血杆菌外膜蛋白pilA基因的克隆与表达被引量：3: 2011年; [目的]克隆和表达副猪嗜血杆菌菌毛蛋白pilA基因。[方法]对已发表的HPS的pilA序列进行分析,合成引物,并以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS的pilA编码基因,获得目的基因片段;构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达至大肠杆菌BI21(DE3)中,进行SDS-PAGE与Western blot检测。[结果]表达的重组蛋白分子质量与预期的43 kD一致。[结论]该研究为制备亚单位疫苗和诊断试剂奠定了基础。; 叶飞张培君田德雨孙慧玲王宏俊龚玉梅贺云霞; 关键词：副猪嗜血杆菌克隆

副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5基因的克隆和表达被引量：7: 2010年; 副猪嗜血杆菌病(Haemophilus parasuis)是规模化猪场的重要细菌性疾病之一。对已发表的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子量大约为41 kDa,利用基因工程的方法将该基因片段定向克隆至表达载体pGEX-6p-1中,诱导表达后的分子量约为67 kDa。该研究为制备亚单位疫苗和诊断试剂奠定了基础。; 叶飞张培君田德雨徐慧孙慧玲王宏俊龚玉梅贺云霞; 关键词：副猪嗜血杆菌克隆

副猪嗜血杆菌aroA基因自杀载体的构建被引量：1: 2011年; 为了构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变自杀载体,试验采用自杀质粒介导的同源重组方法首先构建了自杀质粒pSD,根据副猪嗜血杆菌aroA基因设计PCR特异性引物,上游引物5'末端加BamHⅠ位点,下游引物5'末端加SalⅠ位点,PCR扩增aroA基因后连接到T载体,经酶切位点分析发现在aroA中有1个HindⅢ位点,将氯霉素表达盒通过该位点,构建T-aroA-cm载体,再通过BamHⅠ和SalⅠ将aroA-cm定向克隆到自杀质粒pSD中。结果表明:成功获得aroA基因插入突变自杀载体。说明进一步进行同源重组,从而构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变株。; 贺云霞徐慧叶飞孙慧玲王宏俊龚玉梅黄秀芬张莉张培君; 关键词：副猪嗜血杆菌

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