广东省科技计划工业攻关项目(2011B031500012) 作品数:3 被引量:12 H指数:2 相关作者: 凌莉 易敏英 刘静宇 胡科锋 陈碧玲 更多>> 相关机构: 广东检验检疫技术中心 广东出入境检验检疫局 华南农业大学 更多>> 发文基金: 广东省科技计划工业攻关项目 广东出入境检验检疫局科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 轻工技术与工程 农业科学 更多>>
细菌“活的非可培养”状态的研究进展 2013年 活的非可培养(Viable but nonculturable,VBNC)状态是细菌在不良条件下的一种特殊生存方式。处于这种状态的细菌仍具有致病性,能够通过动物肠道复苏而致病,但采用常规培养方法不能被检测出来,造成VBNC状态菌的漏检,对公共卫生和人类生命健康构成巨大的威胁。因此,对VBNC状态菌的研究、检测有着重要的意义。该研究介绍了细菌进入VBNC状态的诱导因素、生物学特性、检测方法的最新进展。 凌莉 易敏英 胡科锋 陈碧玲 刘静宇关键词:细菌 活的非可培养状态副溶血性弧菌实时荧光逆转录PCR检测方法的建立及其毒力研究 被引量:8 2013年 目的建立检测活的非可培养(VBNC)状态副溶血性弧菌的荧光逆转录PCR方法并研究其毒力基因表达。方法将副溶血性弧菌AS079菌株添加到陈化海水中,4℃冰箱内培养,使其进入VBNC状态,针对其管家基因、鉴定基因和毒力基因分别设计实时荧光逆转录PCR引物,通过不同的PCR反应程序和引物浓度组合试验,摸索最佳反应体系条件,用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力研究。结果用所建立的检测VBNC状态副溶血性弧菌的实时荧光逆转录PCR方法,对接种于陈化海水培养的不同时期的AS079副溶血性弧菌进行荧光定量逆转录PCR扩增,结果显示,随着培养时间的延长,毒力基因tdh2和鉴定基因toxR表达水平持续下降,但即使细菌进入VBNC状态,这两个基因也能够得到很好的扩增,说明以toxR基因和tdh2基因对进入VBNC状态的副溶血性弧菌进行检测和毒力研究方法可行。灵敏度试验表明,鉴定基因toxR的最低检测限可达到48 cfu/ml,研究毒力基因tdh2的表达需要细菌浓度至少为4.8×102cfu/ml,同时试验证明此方法与其他相近食源性致病菌无交叉反应。结论该实时荧光逆转录PCR方法检测快速、特异性强、敏感度高,适用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力分析。 刘静宇 凌莉 邓翼惠 易敏英 胡科锋 陈碧玲关键词:副溶血性弧菌 毒力基因 食源性致病菌 恒温实时荧光法检测副溶血性弧菌 被引量:4 2013年 为了更加准确、快速地检测进出口食品中的副溶血性弧菌,针对副溶血性弧菌的tlh基因设计环介导等温扩增(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP)引物,结合ESEQuant tube scanner来对扩增结果进行实时检测。结果显示:该引物扩增效率高、特异性强、灵敏度高(1-10 CFU/反应,约为荧光PCR的100倍)。126株副溶血性弧菌,恒温荧光法检测出126株,荧光PCR的方法检测出121株。恒温实时荧光检测仪与荧光PCR仪类似,均可以对检测结果进行实时监测和熔解曲线分析,表明该恒温实时荧光检测仪可广泛应用于基础实验室的科学研究或经济发展相对落后区域的临床初步诊断。 易敏英 凌莉 刘助红 叶蕾 唐大运 石磊关键词:副溶血性弧菌 实时检测 环介导等温扩增