湖南省教育厅科研基金(08C569)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：贺智敏侯德富陈主初万恂恂更多>>
- 相关机构：中南大学湖南师范大学更多>>
- 发文基金：湖南省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 反义四环素转录激活子表达细胞系的构建及鉴定
- 2009年
- 目的:构建反义四环素转录激活子(reverse Tc-controlled transactivator,rtTA)表达细胞系。方法:将RevTet-On基因表达系统中调控载体pRevTet-On转染NIH3T3细胞,经G418筛选及RT-PCR鉴定。结果:获得7个rtTA不同表达水平的细胞克隆。结论:成功构建rtTA表达细胞模型,为进一步研究特定外源基因的功能提供一个理想实验平台。
- 侯德富贺智敏余艳辉陈主初
- 关键词：RT-PCR
- Tet调控CYP2E1基因表达细胞系的代谢能力分析被引量：1
- 2009年
- 应用Tet-On基因表达系统,调控CYP2E1基因在NIH3T3细胞中的表达水平,探讨CYP2E1在化学致癌物二甲基亚硝胺(N-nitrosodimethylamine,NDMA)代谢中的作用.先后将Tet-on基因表达系统的调控质粒pRevTet-on和反应质粒pRevTRE-2E1转染NIH3T3细胞,分别用G418和潮霉素筛选,并通过RT-PCR和Western印迹检测,成功获得了3个具有良好诱导性Tet调控的CYP2E1基因表达细胞系(Tet/3T3-2E1).应用不同浓度强力霉素(doxycycline,Dox)处理Tet/3T3-2E1细胞诱导CYP2E1表达,HPLC分析细胞对CYP2E1特异性药物探针氯唑沙腙的原位代谢能力及MTT法分析CYP2E1介导的NDMA细胞毒性作用.结果显示,Tet/3T3-2E1细胞CYP2E1的表达及其代谢能力有明显的Dox浓度依赖性,而且NDMA对Dox诱导组细胞有明显浓度依赖性细胞毒性作用,其IC50值为12.06μmol/L,无Dox诱导组未见明显的NDMA细胞毒性作用.该细胞模型的成功建立对于开展与CYP2E1相关的毒物、致癌物代谢研究,筛选抗毒物、抗癌物等具有重要价值.
- 侯德富万恂恂贺智敏陈主初
- 关键词：CYP二甲基亚硝胺强力霉素
