国家自然科学基金(2107601321276014)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 相关作者：田平芳葛喜珍李会玉王朝绚钟杉杉更多>>
- 相关机构：北京化工大学北京联合大学北京天坛生物制品股份有限公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 三种不同磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆、表达及其对宿主菌生长的影响被引量：1
- 2014年
- 应用PCR技术分别克隆了集胞藻6803、鲍曼不动杆菌和大肠杆菌的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因,构建重组大肠杆菌。SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,来自集胞藻6803和大肠杆菌的PEPC实现了高效表达,而来自鲍曼不动杆菌的PEPC表达较弱,提示密码子偏好性的影响。前两菌提前进入对数生长期,来自鲍曼不动杆菌PEPC工程菌却延迟生长,但这3种重组菌发酵24 h后的生物量与对照菌几乎相同。如果排除质粒复制造成的代谢负荷,过表达PEPC促进了宿主菌的生长,推测是因为重排了代谢流量。
- 李会玉赵鹏葛喜珍田平芳
- 关键词：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶CO2固定集胞藻6803鲍曼不动杆菌大肠杆菌
- 吡咯喹啉醌生产菌的发酵条件优化被引量：2
- 2013年
- 对一株产吡咯喹啉醌(PQQ)假单胞杆菌Pseudomonas 0813的发酵条件进行了优化,通过单因素试验确定碳源、氮源及无机盐成分,之后用正交试验法优化各成分配比,考察了发酵温度、初始pH值和转速对该菌产PQQ的影响。结果表明,最优的培养基配方为:酵母粉5 g/mL、蛋白胨1 g/mL、KH2PO40.5 g/mL;最适的发酵条件为:发酵温度30℃、初始pH 6.5、发酵转速150 r/min。在此条件下,Pseudomonas 0813菌株在250 mL体系摇瓶发酵中的PQQ产量为448 mg/L,在1.5 L体系发酵罐扩大培养后的最高产量可达695 mg/L,这是目前报道未经优化或基因改造菌株的较高产量。
- 钟杉杉刘辉葛喜珍田平芳
- 关键词：吡咯喹啉醌发酵单因素试验正交试验
- 大肠杆菌中插入表达信号肽提高吡咯喹啉醌产量的研究被引量：3
- 2013年
- 本文将载体pET-22b的信号肽基因pelb插入pET-28a-pqq的T7启动子和pqq基因之间,得到重组工程菌E.coli BL21(pET-28a-pelb-pqq),发酵生产吡咯喹啉醌(PQQ)。结果表明PQQ最高产量可达40.73 mg/L,比对照菌E.coli BL21(pET-28a-pqq)提高了24.36%。此外,工程菌和对照菌前3 h发酵的单位菌体产量及单位菌体产率均较高,且此后呈下降趋势。而E.coli BL21(pET-28a-pelb-pqq)在21h后的PQQ产量及生物量均增加,推测PQQ产量与菌体生物量之间存在同促关系。
- 王朝绚葛喜珍田平芳
- 关键词：吡咯喹啉醌信号肽大肠杆菌
- 重排NAD^+合成途径提高磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性
- 2015年
- 为提高磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的催化活性,构建了两个载体分别表达:(1)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC);(2)与NAD+合成相关的关键酶,包括烟酸转磷酸核糖激酶(pnc B)、烟酸单核苷酸腺苷酰转移酶(nad D)和NAD+合成酶(nad E)。将这两个载体共转化大肠杆菌,获得重组菌E.coli(p ET-pepc&p UC-pnc B-nad D-nad E)。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示这些酶均实现了高表达。摇瓶发酵显示,与单独过表达PEPC的重组菌相比,双质粒工程菌的PEPC酶活提高了4.36倍;与野生型大肠杆菌相比,双质粒工程菌的琥珀酸产量提高了4.23倍,达到0.9 g/L,富马酸产量提高了5.23倍,达到5.4 mg/L。上述结果表明加强NAD+合成途径提高了PEPC活性,并增加了还原三羧酸循环的代谢流量。
- 润顺琪李会玉田平芳
- 关键词：大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶琥珀酸富马酸
- 过表达醛脱氢酶对Klebsiella pneumoniae合成3-羟基丙酸的影响
- 2013年
- 克隆了肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)及大肠杆菌(Escherichia coli)各自的醛脱氢酶基因puuC和aldH,获得了重组肺炎克雷伯氏菌K.p(pET-PK-puuC)和K.p(pET-PK-aldH),这两株菌均能以甘油为唯一碳源生产3-羟基丙酸(3-HP)。发酵实验结果显示K.p(pET-PK-puuC)的甘油转化率和单位菌体产量与野生菌相比分别提高了135%和18%;K.p(pET-PK-aldH)的3-HP产量达1.43 g/L,是K.p(pET-PK-puuC)的1.8倍,比野生菌提高了81%,甘油转化率和单位菌体产量比野生菌分别提高了150%和88%。
- 李莎曹宁葛喜珍田平芳
- 关键词：肺炎克雷伯氏菌醛脱氢酶3-羟基丙酸
- 基于全局转录工程促进肺炎克雷伯氏菌吡咯喹啉醌的生物合成被引量：3
- 2014年
- 用易错PCR构建肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)RNA聚合酶rpoD基因的突变文库,将其与载体连接后转化肺炎克雷伯氏菌,从1500个阳性克隆中筛选出一株吡咯喹啉醌(PQQ)生产菌。发酵试验表明,该工程菌的PQQ产量为76mg/mL,比携带未突变rpoD基因的对照菌提高了10%。测序发现rpoD基因在核酸和蛋白质水平的突变率分别达到2.5%和0.5%。二级结构预测发现α螺旋、β转角和无规则卷曲数目均发生了变化,推测由此改变了σ因子与启动子的亲和程度,从而导致了PQQ基因的转录以及K.pneumoniae代谢流量再分配,使得PQQ得到更高效表达。
- 张军静田平芳
- 关键词：肺炎克雷伯氏菌Σ因子RPOD吡咯喹啉醌
