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不同结核分枝杆菌菌株对Ⅰ型干扰素基因的诱导作用及其在结核病患者外周血中的表达: 目的研究不同结核菌株对Ⅰ型干扰素的诱导作用及其在结核患者外周血中的表达.方法从人外周血单个核细胞中分选出CD14+细胞,用重组人巨噬细胞集落刺激因子(M-CFS)刺激7d诱导分化成人巨噬细胞.再应用实时定量PCR(r...; 詹森林张国良钟红剑金晓菲林巧张明霞陈心春周伯平; 关键词：结核

白细胞介素-6基因启动子单核苷酸多态性对其蛋白表达水平及结核易感性的影响被引量：5: 2013年; 目的鉴定位于IL-6基因启动子区影响结核易感性的单核苷酸多态性（SNP）位点，探讨SNP对IL-6分泌水平的影响。方法采用病例一对照的研究方法，借助MassARRAY飞行时间质谱技术检测研究队列（495例结核患者和358例健康对照）IL-6基因6个SNP位点（rs13306436、rs2069824、rs1800795、rs36215814、rs1800797、rs1800796）基因型，通过∥检验比较两组人群SNP位点等位基因频率差异，并计算各种等位基因型人群发生结核的风险性。应用免疫磁珠技术从结核患者PBMC中分选CD14^＋单核细胞，使用结核菌裂解产物（Mtb）、19×10^3脂蛋白进行刺激，通过ELISA检测不同基因型CD14^4单核细胞上清中IL-6分泌水平的差异。结果健康对照人群中6个SNP位点的基因型分布均符合Hardy—Weinberg遗传平衡检验。rs1800796位点3种基因型CC、CG和GG在结核组和对照组的频率分别为64．5％、30．7％、4．8％和56．4％、34．9％、8．7％，结核组G等位基因频率（21．3％）显著低于对照组（26．I％），差异有统计学意义（P=0．02），携带C等位基因人群患结核风险明显升高（OR=1．40，95％CI=1．11—1．75）。其余SNP位点等位基因频率分布在两组间差异无统计学意义。在19×10^3脂蛋白刺激下，rs1800796位点GG基因型单核细胞上清IL-6浓度为（490．10±55．08）ps／ml，分泌水平显著低于CC或CG基因型（P〈0．05），而使用Mtb刺激组间差异无统计学意义。结论首次在汉族人群中发现IL-6基因rs1800796位点影响结核易感性，C为易感等位基因。rs1800796位点多态性能够影响IL-6蛋白表达水平，属于功能性SNP位点。; 张国良张明霞詹森林陆坚陈心春文玉欣杨林王正; 关键词：白细胞介素-6 单核苷酸多态性结核易感性蛋白表达

不同毒性Mtb菌株对Ⅰ型干扰素基因的诱导作用及其在结核病患者外周血中的表达: 2015年; 目的研究不同Mtb菌株对Ⅰ型干扰素基因的诱导作用及其在结核病患者外周血中的表达。方法从2012年2月至2012年8月在深圳市第三人民医院健康体检者中利用随机数字表法抽取30名健康人外周血标本，并提取单个核细胞中分选出CD14^＋细胞，用重组人巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor，M-CSF）刺激，诱导分化为人巨噬细胞，并分别感染Mtb减毒株H37Ra和Mtb标准株H37Rv，应用实时定量PCR（real—time PCR）检测2种菌株感染后Ⅰ型干扰素基因IFNB和IFNA的相对表达量2^-ΔΔCt值。此外使用上述方法对同期选取的结核病组（15例）、健康对照组（15例）、Mtb潜伏感染组（15例）的Ⅰ型干扰素基因的相对表达量进行检测。采用GraphPad4．0软件对数据进行统计处理，两组均数间比较采用t检验，三组均数间比较采用方差分析，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果经H37Rv感染的健康人巨噬细胞的IFNB基因相对表达量2^-ΔΔCt值（10．38±2．24）显著高于空白对照组（6．26±3．42），差异有统计学意义（t=2．47，P=0．026）；经H37Ra感染的巨噬细胞的IFNB基因相对表达量2^-ΔΔCt值（8．92±0．85）与空白对照组（6．26±3．42）比较差异无统计学意义（t=1．84，P=0．09）；IFNA相对基因表达量2^-ΔΔCt值在H37Rv感染组（5．11±2．31）、H37Ra感染组（5．17±3．40）及空白对照组（4．41±1．69）之间差异无统计学意义（F=0．16，P=0．85）。结核病组IFNB基因表达（4．32±1．22）显著高于健康对照组（2．73±1．23），差异有统计学意义（t=3．55，P=0．0014）；IFNA基因在健康对照组（3．91±0．75）、Mtb潜伏感染组（4．25±1．03）、结核病组（4．73±1．44）之间表达差异无统计学意义（F=1．93，P=0．064）。结论Mtb的感染可以诱导Ⅰ型干扰素基因的表达，在结核病患者中IFNB基因表达上调显著。; 詹森林张国良钟红剑金晓菲林巧张明霞陈心春周伯平; 关键词：结核

IFNA8基因单核苷酸多态性与我国汉族人群结核分枝杆菌易感性的关联分析被引量：3: 2014年; 目的探讨我国汉族人群IFNA8基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）与结核分枝杆菌易感性的关系.方法收集2010年1月至2011年12月期间深圳市第三人民医院收治的结核病患者资料,采用病例对照研究方法,应用MassARRAY飞行时间质谱生物芯片技术,分成检测结核病组（1533例）和对照组（1445名）IFNA8基因SNPs（rs1330322、rs10964982、rs4978116）的基因型,计算各SNP位点等位基因频率（allele frequency,AF）,应用“四格表”x2检验比较两组人群中候选SNP位点等位基因频率的差别,以P＜0.05为差异有统计学意义,并计算相应的比值比（odds ratio,OR）和95％置信区间（95％CI）.结果（1）rs1330322位点A等位基因频率在结核病组、对照组中分别为30.5％（936/3066）、27.8％（804/2890）,差异有统计学意义（x2=5.277,OR=1.140,95％CI=1.019～1.275,P=0.022）.rs10964982和rs4978116位点的次要等位基因频率在结核病组中分别为17.0％（520/3066）和28.8％（882/3066）,在对照组中分别为17.0％（491/2890）和28.6％（826/2890）,两组间差异无统计学意义（x2值分别为0.001、0.025,P值分别为0.976、0.874）.（2）根据性别分层发现,结核病组女性患者中,rs1330322位点等位基因A频率为30.8％（330/1072）,对照组等位基因A频率为26.6％（300/1126）,两组间差异有统计学意义（x2=4.605,OR=1.225,95％CI=1.018～1.474,P=0.032）.男性结核病组、对照组患者等位基因A频率分别为30.4％（606/1994）、28.6％（504/1764）,两组间差异无统计学意义（x2=1.489,OR=1.091,95％CI=0.948～1.256,P=0.222）.（3）对女性患者进一步进行年龄分层发现,对于rs1330322位点,≤25岁结核病组、对照组A等位基因频率分别为33.8％（111/328）、25.2％（112/444）,两组间差异有统计学意义（x2=6.818,OR=1.516,95％CI=1.108～2.074,P=0.009）.而＞25岁人群A等位基因在两组人群中差异无统计学意义（x2=0.610,O; 文玉欣张国良林巧钟红剑张明霞杨林陈心春王正; 关键词：干扰素Α 疾病遗传易感性汉族

飞行时间质谱与TaqMan探针技术在结核病易感性相关基因单核苷酸多态性筛选中的应用被引量：4: 2014年; 目的对比分析飞行时间质谱技术（MALDI-TOF）和TaqMan探针筛选与结核病易感性相关单核苷酸多态性（SNP）位点的结果,以及联合应用的方法学和效果评价.方法选取2010年10月至2011年4月在深圳市第三人民医院收治并确诊的结核病患者400例为结核病组,对照组为同时期收集的健康体检者300名,利用MALDI-TOF对选取的7个SNP位点（rs2227476、rs1800795、rs56077270、rs1800797、rs2227484、rs2227472和rs2227473）同时进行基因分型,初步筛选易感SNP位点;与结核病易感相关的单个SNP位点,采用基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR对同样的标本再进行基因分型,比较两种方法的准确性与敏感度;以rs2227473位点为实例对分型结果的基因频率进行分析,确定肺结核的易感SNP.结果 MALDI-TOF分型成功率为99.7％（698/700）,TaqMan探针技术为98.4％（689/700）;在基因分型过程中,MALDI-TOF与TaqMan探针方法对1例标本的分型结果不一致,经过对此分型结果进行了测序验证,MALDI-TOF的分型结果正确,MALDI-TOF在准确性和敏感度比TaqMan法稍高.位点rs2227473基因频率分析中,结核病组G等位基因频率（90.3％,722/800）明显高于对照组（82.5％,495/600）（x2=6.911,P=0.009）.结论上述肺结核易感基因的筛选方法是可行的;实例分析中,将两种方法联合应用,发现了IL-22基因rs2227473位点等位基因G可能与肺结核发病相关,两位点中等位基因A可能为保护性基因.; 汪文斐张国良杨帆杨辉赵丽芳徐发圣张明霞陈心春; 关键词：白细胞介素类 DNA探针疾病遗传易感性

INF-γ基因+874位点SNP对肺结核易感性及蛋白分泌的影响被引量：3: 2014年; 目的探讨干扰素-γ（IFN-γ）基因＋874位点单核苷酸多态性（SNP）与肺结核易感性的关系,以及对IFN-γ分泌水平的影响。方法应用TaqMan探针基因分型技术,采用病例-对照研究方法,对142例肺结核患者和166例健康对照人群IFN-γ基因＋874位点进行分型,比较两组人群等位基因频率差异,并测定不同基因型人群外周血浆以及PBMC分泌IFN-γ水平的差异,明确基因型与IFN-γ分泌水平的关系。结果 IFN-γ基因＋874位点具有T和A两种等位基因,其中结核组A、T等位基因频率分别为88.0%、12.0%,对照组A、T等位基因频率分别为81.0%、19.0%,两组差异具有统计学意义（P〈0.05,OR=1.72,95%CI 1.09~2.70）。结核患者外周血浆IFN-γ分泌水平在不同基因型之间差异无统计学意义（P〉0.05）。PBMC经过结核菌裂解物刺激后,TT基因型细胞上清IFN-γ为（754.8±102.9）pg/mL,显著高于AA基因型（648.9±80.83）pg/mL,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 IFN-γ基因＋874多态性位点与结核病易感性相关,A等位基因是肺结核易感基因;IFN-γ基因＋874多态性影响宿主IFN-γ表达水平,在调节肺结核保护性免疫过程中起重要作用。; 钟红剑林巧文玉欣刘腊香张国良杨林王正唐瑛; 关键词：干扰素-Γ 肺结核易感性

结核分枝杆菌感染对Ⅰ型干扰素受体基因表达的影响及其在结核病患者外周血表达的意义被引量：2: 2014年; 目的研究结核分枝杆菌感染对工型干扰素受体（IFNAR）基因表达的诱导作用及其在结核病患者外周血中表达的临床意义.方法选取2013年1月至2013年5月在深圳市第三人民医院确诊的痰菌阳性的肺结核患者（TB组）15例;结核分枝杆菌潜伏感染（latent tuberculosis infection,LTBI）者（LTBI组）15例、健康对照（HC组）15例,均为同期医院体检人员.应用免疫磁珠从健康人外周血单个核细胞（PBMCs）中分选CD14＋单核细胞,在巨噬细胞集落刺激因子（M CSF）刺激下诱导分化为巨噬细胞,随后感染不同毒力结核分枝杆菌（H37Ra、H37Rv）,应用实时定量PCR检测巨噬细胞中IFNAR1和IFNAR2基因表达情况,以2-△△Ct值表示IFNAR1和IFNAR2基因拷贝数.观测HC组、LTBI组、TB组患者各15例,分析不同人群PBMCs中IFNAR基因表达的差异.采用GraphPad 4.0软件对数据进行统计处理.多组计量资料数据首先进行齐性检验以判断是否符合正态分布,若符合正态分布,则用-x±s表示,并通过方差分析进行两两比较,从而计算q值.计数资料进行“行×列”表x2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果经H37Rv刺激后,IFNAR1基因表达水平（5.95±0.41）显著低于空白对照（7.53±0.41）,差异有统计学意义（q=4.15,P＜0.05）;而H37Ra刺激后IFNAR1基因表达水平为（6.54±0.33）,与空白对照（7.53±0.41）、H37Rv感染（5.95±0.41）相比差异均无统计学意义（q值分别为2.56、1.57,P值均＞0.05）;而IFNAR2基因在H37Ra和H37Rv刺激后表达水平分别为（8.81±0.85）、（8.84±0.80）,均显著低于空白对照组（12.67±1.15）,差异具有统计学意义（q值分别为4.10、4.13,P值均＜0.05）;而H37Ra和H37Rv刺激后IFNAR2的基因表达差异无统计学意义（q=0.02,P＞0.05）.IFNAR1基因在TB、LTBI、HC三组人群之间表达水平分别为（5.39±0.64）、（6.59±0.86）、（7.08±1.10）,两两比较差异均无统计学意义（TB vs HC; 张国良詹森林钟红剑林巧汪文斐金晓菲张明霞陈心春; 关键词：结核基因表达调控巨噬细胞

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广东省自然科学基金(S2012040007213)

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