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兔肝VX2肝癌经肝动脉化疗栓塞后碘油沉积及血管变化的研究被引量：8: 2014年; 目的观察兔肝VX2肝癌经肝动脉化疗栓塞（TACE）术后碘油沉积及血管变化，为确定TACE术后联合射频消融（RFA）治疗最佳时间提供实验基础。方法采用“开腹瘤块包埋法”建立兔肝VX2肝癌模型，成模后行TACE术。将TACE术后肿瘤血管完全闭塞的30只兔肝癌模型根据观察时间点的不同，分为TACE术后24、48h，第7、14、21、28天共6组，通过影像学检查（CT扫描及动脉造影）和病理切片染色法观察各组肿瘤碘油沉积及微血管的变化。结果TACE术后24～48h肿瘤内碘油沉积完全，瘤周正常肝组织亦可见较多碘油沉积；7d后瘤周肝组织内碘油沉积减少，28d后肿瘤内碘油沉积不全；24h～21d肝动脉造影均未见肿瘤染色，28d后肿瘤局部可见云雾状染色。TACE术后21d肿瘤包膜内及肿瘤间质内有少量散在的小血管，28d肿瘤包膜内及肿瘤问质可见较多小血管。术后各组血管内皮生长因子（VEGF）阳性率逐渐升高，各组VEGF阳性率分别为（24．0±7．8）％、（27．0±9．1）％、（36．24±8．4）％、（53．0±9．5）％、（72．4±7．3）％、（73．6±12．1）％，术后48h、7、14、21d各组VEGF阳性率比较差异均有统计学意义（P〈0．05），而21d与28d比较差异无统计学意义（P〉0．05）。术后各组微血管密度（MVD）分别为10．8±5．3、12．0±6．0、12．6±3．8、24．3±5．4、38．8±9．5、39．6±6．2，术后第7天开始MVD呈上升趋势，7、14、21d各组MVD比较差异均有统计学意义（P〈0．05），而21d与28d比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论TACE术后48h内碘油沉积覆盖范围最广，血管闭塞最完全；7d后肿瘤组织VEGF表达上调，并随时间延长逐渐升高，在术后21d达到高峰；TACE术后7～14d肿瘤组织内微血管开始形成，21d有小血管出现，28d血管形成明显。; 林继宗王晨虎陈署贤林楠胡昆鹏方和平许瑞云; 关键词：动脉化疗栓塞碘油沉积血管内皮因子

联合位点突变的乙肝病毒核心启动子转染L-02及对细胞增殖能力的影响被引量：1: 2013年; 目的通过基因合成A1762T／G1764A／T1753A／T1768A联合突变后的核心启动子（CM—HBX），再以慢病毒感染的方式构建稳定表达核心启动子的L-02细胞株，建立肝癌发生的细胞模型。方法通过基因合成的方法，合成A1762rr／G1764A／T1753A／T1768A联合突变后的核心启动子，在N末端加上标记序列HBX—Flag，分别双酶切pLenO—RTP载体和pUC57-CM—HBX，纯化酶切产物后进行定向连接，得到重组质粒pLenO-RTP—CM—HBX。钙转法将重组质粒转入293T细胞进行病毒包装然后转染肝细胞。噻唑蓝（Mr丌）比色法检测转染后细胞增殖能力的变化，Westernblot法检测HBX—Flag在慢病毒感染后L-02中的表达以及转染后细胞内s期激酶相关蛋白2（Skp2）、增殖细胞核抗原（PCNA）、p21、p53的表达的变化。结果构建pLenO。RTP—CM—HBX核心启动子慢病毒载体可以效率较高地感染L-02（〉95％），并在细胞内转录、翻译、合成HBX—Flag，随着培养时间的延长，红色荧光强度无明显变化；同空载组和空白对照组比较，联合突变组L-02的增殖能力明显增强（P〈0．05），skp2、PCNA表达增加，p21、p53表达降低（P〈0．05）。而空载组和空白对照组的各指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论慢病毒载体pLenO—RTP．CM—HBX核心启动子成功转染L-02，转染后的L-02具有癌变倾向。; 颜见胡昆鹏林继宗姚志成钟跃思李明亮陈骋许瑞云邓美海; 关键词：核心启动子乙肝病毒慢病毒载体联合突变

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国家教育部博士点基金(20110171120090)

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