黑龙江省博士后基金(LBH-Z09)
- 作品数：10 被引量：79H指数：6
- 相关作者：崔丽春李丹丹张国财曹际娟田长永更多>>
- 相关机构：东北林业大学海南出入境检验检疫局海南省出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：黑龙江省博士后基金国家质检总局科技计划项目黑龙江省青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- DNA环介导恒温扩增技术快速检测霍乱弧菌被引量：5
- 2010年
- 霍乱弧菌是一种重要的食源性致病菌,主要引起急性肠道传染病,其快速检测具有重要意义。根据霍乱弧菌的mdh管家基因序列,设计2对特异性检测引物,利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),经反应体系优化,成功建立了霍乱弧菌的LAMP快速检测方法。该方法最佳反应温度为65℃,60min完成检测,对培养菌的检测限为25CFU/mL,污染食品中霍乱弧菌的检测限为32CFU/g。对33株同种或近源细菌进行LAMP检测,仅霍乱弧菌得到阳性扩增。LAMP方法实践应用结果表明,对1057份虾、蟹、牡蛎、肉类、人腹泻物等样本进行检测,共检出85份阳性,与国际标准(ISO TS21872-1-2007)检测结果的符合率为100%。结果表明,本研究建立的霍乱弧菌LAMP检测方法特异性强、灵敏度高、操作简便,有利于霍乱弧菌疫情的监测。
- 徐义刚李苏龙李丹丹张洪祥姜艳春
- 关键词：霍乱弧菌
- 多重PCR-DHPLC检测4种主要致腹泻性大肠埃希氏菌方法的建立与应用被引量：6
- 2010年
- 肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)和肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)是引起腹泻、危害食品安全和人类健康的4种主要大肠杆菌。本实验基于ETEC LT基因、EPEC bfpA基因、EHEC O抗原基因和EIEC侵袭性质粒基因序列,设计了4对特异性引物,利用聚合酶链反应(PCR)和变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术,通过体系优化,建立了致腹泻性大肠杆菌多重PCR-DHPLC检测方法,达到同时检测4种致病菌的目的。该方法灵敏度高,最低检测限为EHEC6×101拷贝/μL、ETEC1.3×102拷贝/μL、EPEC9×101拷贝/μL、EIEC7×101拷贝/μL。特异性试验表明,对22种共41株细菌进行检测,所试6株致腹泻性大肠杆菌均为阳性。实践证明,该方法具有良好的实用性,可用于ETEC、EPEC、EHEC和EIEC的单一或混合感染的检测。
- 徐义刚崔丽春李苏龙曹际娟姜艳春张子群刘新亮
- 关键词：聚合酶链式反应变性高效液相色谱
- 肠出血性大肠埃希菌O157∶H7环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用被引量：7
- 2010年
- 目的肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是一种重要的人畜共患病致病菌,主要通过被污染的食物传播,引起出血性结肠炎,建立其快速检测方法具有重要意义。方法基于EHEC O157∶H7保守的rfbE基因序列,设计4条引物,利用环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP),成功建立了EHEC O157∶H7LAMP快速检测方法 ,60min内即可完成致病菌检测。结果利用该LAMP方法对30种共38株细菌进行检测,所试EHEC O157∶H7均为阳性结果 ,说明该方法具有高度特异性。本方法对纯培养的EHEC O157∶H7检测限为12CFU/mL,污染食品中EHEC O157∶H7的检测限为18CFU/g。实践应用表明,对1121份进出口肉类、奶类制品及人工污染样品等进行检测,检出57份LAMP阳性,与采用AOAC标准检测结果的符合率为100%。结论该LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。
- 徐义刚崔丽春李苏龙于恒纯李丹丹谢晓峰姜艳春
- 多重PCR方法快速检测4种主要致腹泻性大肠埃希菌被引量：6
- 2010年
- 肠毒素性大肠埃希菌（ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）、肠出血性大肠埃希菌（EHEC）和侵袭性大肠埃希菌（EIEC）是引起腹泻的主要大肠埃希菌,威胁着食品安全和人类健康,建立同时检测4种致腹泻性大肠埃希菌的方法具有重要意义。基于ETEC LT肠毒素基因、EPEC bfpA基因、EHECO抗原基因和EIEC侵袭性质粒特异性基因,设计了4对特异性引物,通过对单一PCR反应条件的优化建立了快速检测4种主要致腹泻性大肠埃希菌的多重PCR方法,彼此之间无交叉反应。该多重PCR方法具有良好的特异性和灵敏性,对24株致病菌进行检测,所试4株致腹泻性大肠埃希菌均为PCR阳性,其他菌株则为阴性。实践证明,利用所建立的多重PCR方法对124份肉类、奶类制品及人工污染样品等进行检测,检出15份阳性,与国标（GB4789.6-1994）检测结果相同。结果表明本文建立的多重PCR方法可用于ETEC、EPEC、EHEC和EIEC的单一或混合感染的鉴别诊断及食品安全风险评估,具有良好的实用性。
- 徐义刚崔丽春李苏龙姜艳春谢晓峰刘新亮
- 关键词：多重PCR
- 食品中沙门氏菌DNA环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：10
- 2010年
- 根据沙门氏菌属高度保守的fimY基因序列设计了2对特异性引物,采用环介导等温扩增方法(LAMP)建立了食品中沙门氏菌的LAMP快速检测方法。结果表明,建立的LAMP方法具有高度特异性,经对40种共68株细菌进行扩增,所试32株沙门氏菌均为LAMP阳性,其他菌株为LAMP阴性。建立的LAMP方法对培养的沙门氏菌的检测灵敏度为5CFU/管,对污染食品中沙门氏菌的检测灵敏度为9CFU/管,60min内即可完成检测。用建立的LAMP方法对802份肉类、蛋、奶及其制品和动物腹泻物、人工污染样品等进行检测,共检出165份LAMP阳性样本,与国标(GB/T4789.4-2008)方法的检测结果一致。建立的LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。
- 徐义刚崔丽春杨君宏李苏龙李丹丹姜艳春张子群
- 关键词：沙门氏菌环介导等温扩增
- 应用DNA环介导恒温扩增技术快速检测空肠弯曲菌被引量：4
- 2012年
- 【目的】空肠弯曲菌是一种重要的人畜共患病致病菌,主要经被污染的水源、乳制品、生禽肉进行传播,建立快速、准确的诊断方法是防控空肠弯曲菌感染的重要措施。【方法】本文引入一种新型的核酸检测技术——DNA环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以空肠弯曲菌ORF-C序列为检测靶基因,建立了空肠弯曲菌LAMP快速检测方法。【结果】利用本LAMP方法对21种病原菌进行检测,仅空肠弯曲菌为阳性结果,说明该方法具有高度的特异性。该LAMP方法对空肠弯曲菌纯培养菌的检测灵敏度达6CFU/反应管,对污染材料中空肠弯曲菌的检测灵敏度为9CFU/反应管。【结论】本研究建立的空肠弯曲菌LAMP检测方法操作简便、检测快速,具有良好的实用性。
- 徐义刚李丹丹田长永刘忠梅李苏龙张国财
- 关键词：空肠弯曲菌
- 水产品中创伤弧菌DNA环介导恒温扩增快速检测方法的建立及初步应用被引量：12
- 2010年
- 创伤弧菌是一种重要的食源性致病菌,主要存在于河口和海洋环境中,严重危害水产养殖业的发展和人类健康。建立快速、准确、易操作的检测方法对防控创伤弧菌的传染,保障水产养殖业发展和增强食品安全意义重大。基于创伤弧菌vvHA基因,利用一种新型的核酸扩增技术-环介导恒温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）,建立了创伤弧菌LAMP快速检测方法。对11种共46株细菌进行扩增,仅创伤弧菌为LAMP阳性结果,说明LAMP方法具有高度特异性。灵敏度试验结果表明,对创伤弧菌纯培养菌的检测灵敏度为15CFU/ml,对污染食品中创伤弧菌的检测灵敏度为24CFU/g。此法40~60min内即可完成检测,检验检疫实践证明：LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高且成本低廉,具有良好的应用前景。
- 徐义刚李苏龙杨君宏李丹丹姜艳春谢晓峰崔丽春
- 关键词：创伤弧菌食源性致病菌
- 食品中金黄色葡萄球菌DNA环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用被引量：22
- 2010年
- 【目的】金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌,主要经食品传播,引起食物中毒、组织及器官的化脓性炎症,建立快速、准确的检测方法对预防和控制金黄色葡萄球菌的传染具有重要意义。【方法】DNA环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是一种新颖的快速、高灵敏核酸扩增技术,本研究利用该技术建立金黄色葡萄球菌LAMP检测方法。基于金黄色葡萄球菌高度保守的Sa442基因序列,设计4条特异性LAMP扩增引物,两条外引物F3和B3及两条内引物FIP和BIP,在BstDNAPolymerase作用下,65℃恒温水浴中,对26个种类共45株细菌进行扩增,所试的20株金黄色葡萄球菌均为LAMP阳性,说明所设计的LAMP引物具有高度特异性。【结果】本LAMP方法对纯培养的金黄色葡萄球菌检测灵敏度为25CFU/mL,对污染食品中金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为42CFU/g,40—60min内即可完成检测。检验检疫实践证明,利用本LAMP方法对958份肉类、蛋奶及其制品、人工污染样品等进行检测,检出115份LAMP阳性,与国标法(GB)检测结果一致。【结论】本LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。
- 徐义刚李苏龙李丹丹姜艳春谢晓峰
- 关键词：金黄色葡萄球菌
- 志贺氏菌属环介导恒温扩增快速检测方法的建立及初步应用被引量：1
- 2010年
- 为建立快速检测志贺氏菌属的方法,本研究针对其ipaH基因,建立了志贺氏菌属环介导恒温护增(LAMP)快速检测方法。利用该方法对50株细菌进行检测,结果显示7株志贺氏菌均为阳性,其它菌均为阴性,表明该方法具有高度特异性。灵敏度试验显示,对志贺氏菌纯培养菌的检测灵敏度为28cfu/mL,对污染食品中志贺氏菌的检测灵敏度为35cfu/mL。利用该方法对195份涉及肉类、奶类、豆制品及人工污染样品进行检测,共检出29份阳性样品,与细菌分离鉴定检测结果一致。该LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高且成本低廉,具有良好的应用前景。
- 徐义刚崔丽春张昕哲李苏龙于恒纯张子群李丹丹
- 关键词：志贺氏菌属IPAH基因
- 食品中单核细胞增生李斯特菌DNA环介导恒温扩增快速检测方法的建立被引量：9
- 2012年
- 基于单核细胞增生李斯特菌胞壁质水解酶iap基因,设计两对特异性引物,利用DNA环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以扩增副产物焦磷酸镁实时浊度为判定标准,建立食品中单核细胞增生李斯特菌LAMP快速检测方法。结果显示,本LAMP方法特异性强,经过对29株细菌进行检测,所试单核细胞增生李斯特菌均为LAMP阳性,其他菌株为阴性;本LAMP方法对单核细胞增生李斯特菌纯培养菌的检测灵敏度为8CFU/管,对污染食品中单核细胞增生李斯特菌的检测灵敏度为12CFU/管。本研究建立的LAMP检测方法简便快速、结果判断直观。
- 徐义刚崔丽春李丹丹刘忠梅李苏龙张子群张国财
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌
