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巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因的克隆和分析被引量：2: 2011年; [目的]获得巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[方法]以巴夫杜氏藻cDNA为模板,采用简并引物进行PCR扩增,获得533bp特异cDNA片段。在此基础上,设计特异引物,采用5'-Genome Walking和3'-RACE的方法,获得基因的5'-端DNA序列和3'-端cDNA序列,进而获得β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[结果]获得了巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因的特异cDNA片段、5'-端DNA和3'-端cDNA片段。经拼接后,扩增出全长cDNA。β-肌动蛋白基因cDNA全长1754bp,包括1137bp的开放读码框和617bp的3'-非翻译区序列。氨基酸序列相似性分析发现,巴夫杜氏藻β-肌动蛋白氨基酸序列与杜氏盐藻、莱茵衣藻等的同源性较高。系统发育分析表明,巴夫杜氏藻β-肌动蛋白与杜氏盐藻的相似性最高。[结论]首次获得了巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并发现巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因非常保守。; 尚常花朱顺妮袁振宏王忠铭; 关键词：克隆

普通小球藻细胞色素b559α亚基编码基因的克隆及序列分析被引量：1: 2011年; 细胞色素b559是由α和β两个亚基组成的一种血红蛋白,是光系统Ⅱ的必需组分,可以保护光系统Ⅱ免受光抑制的危害。为了从分子水平深入了解细胞色素b559的功能,从普通小球藻(Chlorella vugaris)中克隆了编码细胞色素b559α亚基的基因序列及其5′-侧翼序列。结果表明,DNA全长包括1个252 bp的开放读码框,442 bp的5′-侧翼序列和195 bp的3′-侧翼序列,5′-侧翼序列区域存在一系列预测的顺式作用元件。; 尚常花朱顺妮袁振宏王忠铭; 关键词：普通小球藻克隆

巴夫杜氏藻GAPDH基因部分序列的克隆被引量：2: 2011年; 3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解途径中的一个关键酶,由于其基因表达量相对恒定,因此在定量和半定量PCR试验中常被用作内源参照基因来确定目标基因的相对表达量。从巴夫杜氏藻(Dunaliella parva)中克隆GAPDH基因,并对基因序列进行了分析。以巴夫杜氏藻cDNA为模板,根据GAPDH的保守序列设计引物,PCR扩增获得了673 bp的cDNA序列。在此基础上,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了913 bp的3′-cDNA序列,进而获得了cDNA部分序列1 393 bp。序列分析结果表明:巴夫杜氏藻GAPDH cDNA部分序列包括1 055 bp的编码区和338 bp的3′非翻译区。该基因的克隆为半定量和定量PCR等技术在巴夫杜氏藻分子生物学研究中的应用提供了内源参照基因。; 尚常花朱顺妮袁振宏王忠铭; 关键词：克隆

藻类转基因研究进展: 2011年; 从藻类遗传背景、选择标记基因、报告基因、启动子和转化方法等方面对藻类基因工程的研究进展进行了综述。; 尚常花杨康袁振宏王忠铭朱顺妮; 关键词：藻类转基因报告基因启动子

巴夫杜氏藻1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因的克隆和分析被引量：7: 2011年; 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)是光合作用中的一个关键酶,其小亚基rbcS具有调控羧化反应催化效率和影响该酶对二氧化碳/氧气底物特异性的功能。从巴夫杜氏藻中克隆rbcS基因及其5′-上游序列,并对基因及5′-上游序列进行了分析。根据已知rbcS基因保守核苷酸序列设计引物,分别克隆到1 841 bp的DNA和380 bp的cDNA序列。以此为基础,使用染色体步移(Genome walking)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了799bp的5′端DNA序列和500 bp的3′端cDNA序列。序列分析发现,巴夫杜氏藻rbcS DNA全长为2 031 bp(不包括476 bp 5′-上游序列),cDNA全长包括570 bp开放读码框(GenBank登录号:HQ315783)和294 bp 3′端非翻译区。5′-上游序列区域存在一系列预测的顺式作用元件。该研究旨在为后继的rbcS基因的功能和表达研究、Rubisco的遗传改造奠定基础。同时,rbcS启动子因其可驱动基因高效表达而引起广泛关注,因此获得的rbcS 5′-上游序列经验证和优化后,可用于在嗜盐微藻中驱动转基因的高效表达以及完善微藻转化系统。; 尚常花朱顺妮袁振宏吕鹏梅王忠铭; 关键词：基因克隆 RBCS 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶

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中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室开放基金(y107j6)