上海市浦江人才计划项目(06PJ14049) 作品数:6 被引量:37 H指数:4 相关作者: 崔大祥 贺蓉 高峰 李清 潘碧峰 更多>> 相关机构: 上海交通大学 第四军医大学西京医院 更多>> 发文基金: 上海市浦江人才计划项目 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 一般工业技术 生物学 更多>>
brcaa1基因新抗原表位片段的扩增、快速表达和活性鉴定 2009年 目的制备包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1部分肽段。方法根据brcaa1基因序列与RTS技术要求,设计并合成带有His尾巴的PCR引物,利用brcaa1基因质粒作模板,利用PCR技术扩增获取相应基因片段并测序证实,然后采用RTS系统试剂盒与配套设备,快速翻译合成蛋白,利用PAGE电泳与Western Blot技术,鉴定表达蛋白的活性。结果PCR获取包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1基因片段;测序证实所获片段是所需的目的片段;Western Blot分析证实表达的肽段具有抗原活性。结论制备了具有活性包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1肽段,为进一步制备单克隆抗体与建立诊断方法奠定了基础。 李清 崔大祥 高峰 黄拓 徐萍 贺蓉关键词:聚合酶链反应 WESTERN BLOT分析 荧光磁性纳米粒子与PSA单链抗体复合探针对前列腺癌的靶向显像和治疗 被引量:8 2008年 目的:研究荧光磁性纳米粒子与前列腺癌特异性抗原(prostate cancer specific antigen,PSA)单链抗体片段结合的复合纳米探针作为前列腺癌核磁共振靶向显像剂与治疗剂的可行性。方法:荧光磁性纳米粒子(FMCNPs)与前列腺癌特异性单链抗体片段(ScFv)桥联制备成复合纳米探针(FMCNPs-ScFv),应用高分辨电镜、荧光光谱仪与磁强度计进行鉴定。将FMCNPs-ScFv与前列腺癌LNCaP细胞共培养,观察其进入癌细胞的靶向性;采用MTT法评价复合纳米探针的细胞毒性。建立裸鼠前列腺癌细胞移植模型,进行免疫组化和病理学鉴定;荷前列腺癌裸鼠尾静脉注射复合纳米探针,采用荧光成像系统观察纳米探针在裸鼠体内的分布消除过程;利用核磁共振观察复合纳米探针肿瘤靶向显像效果;给予体外磁场照射(100W功率)30min,观察肿瘤体积的变化。结果:成功制备复合纳米探针FMCNPs-ScFv;细胞培养实验显示复合纳米探针能够进入前列腺癌细胞质;在显像浓度范围内复合纳米探针细胞毒性很低,不影响细胞增殖。成功制备裸鼠前列腺癌模型。荧光成像系统显示复合纳米探针快速地在裸鼠各重要器官分布,并逐渐集中于肿瘤部位;核磁共振显示纳米探针在24h内能够清晰显示前列腺癌图像;体外磁场照射4d后,注射复合纳米探针的裸鼠肿瘤组织生长显著慢于对照裸鼠的肿瘤组织(P<0.05)。结论:制备的复合纳米探针FMCNPs-ScFv能有效地靶向前列腺癌组织,可用于前列腺癌的核磁共振成像,也能用于体外磁场作用下的肿瘤治疗。 韩月东 崔大祥 宦怡 李智铭 刘贺亮 宋华 刘彬 杜彤 高峰 贺蓉关键词:前列腺癌 纳米探针 核磁共振成像 巯基乙酸修饰的CdTe量子点对聚合酶链反应特异性的影响 被引量:8 2008年 合成了巯基乙酸(TGA)修饰的量子点,X衍射分析证实CdTe相的存在,高分辨电子显微镜分析表明量子点的直径为3 nm,Zeta电位表征表明量子点表面带有负电荷.把TGA修饰的CdTe量子点加入到聚合酶链反应(PCR)反应液中,使用brcaa1基因载体作为PCR反应的模板,进行两轮PCR反应.最终的PCR产物通过w=1%的琼脂糖凝胶电泳进行分析,结果表明,在0-1.33 g/L范围内,随着量子点的量逐渐增加,非特异性的扩增条带逐渐消失,荧光(PL)光谱表明PCR反应后的量子点荧光强度降低.X射线光电子能谱(XPS)证实PCR反应前后Cd元素和Te元素的能谱峰并没有出现化学位移,吸收光谱(UV-vis)表明了PCR反应之后的吸收强度增强.因此,TGA修饰的CdTe量子点置于PCR反应液之中,能提高PCR的特异性,可以应用于超灵敏DNA检测、光电生物传感器. 李清 贺蓉 高峰 潘碧峰 崔大祥关键词:CDTE量子点 聚合酶链反应 特异性 量子点标记免疫凝集分析检测免疫球蛋白 被引量:5 2008年 利用量子点特殊的光学性能,结合免疫分析技术,建立快速、简便的免疫凝集分析检测方法.采用量子点标记羊抗鼠IgG,与溶液中的鼠IgG进行免疫反应,使量子点之间凝集形成网络结构,从而引起反应体系中量子点的荧光淬灭.随着鼠IgG量的增加,网络结构越来越大,量子点的荧光强度不断减弱.根据荧光信号的变化,检测溶液中鼠IgG的浓度. 邵君 高峰 尤晓刚 贺蓉 崔大祥关键词:量子点 免疫分析 荧光淬灭 核/壳型CdTe@SiO_2荧光纳米复合粒子的制备与表征 被引量:15 2007年 利用反相微乳法,以巯基乙酸修饰的水溶性CdTe量子点为核,包覆SiO2,制备得到核壳型CdTe@SiO2荧光纳米复合粒子.用紫外-可见(UV-vis)分光光度计,荧光(PL)分光光度计,红外(FT-IR)光谱仪,透射电子显微镜(TEM)等分析测试手段,对得到的荧光纳米复合粒子的性能进行表征,结果表明:得到的CdTe@SiO2纳米复合粒子是核壳型结构,由SiO2壳层包覆多个量子点,其大小均匀,水溶性好,有效地提高了量子点的稳定性,大大增强了其抗光漂白性能,为该材料的进一步生物应用打下了良好的基础. 尤晓刚 贺蓉 高峰 邵君 潘碧峰 崔大祥关键词:量子点 纳米复合粒子 核壳结构 BRCAA1蛋白在胃癌组织与不同分化细胞株中的表达及其临床意义 被引量:2 2007年 背景:BRCAA1蛋白是一个新蛋白,其在胃癌发生、发展中的作用尚不明确。目的:探讨BRCAA1蛋白在胃癌组织与不同分化细胞株中的表达水平及其临床意义。方法:收集60例胃腺癌患者,分别取胃癌和癌旁组织,应用免疫组化SP法检测BRCAA1蛋白的表达水平,并分析其与胃癌分级的关系。蛋白质印迹分析检测BRCAA1蛋白在胃癌高分化(MKN-1和MKN-74)、中分化(SGC-7901)和低分化(KATO-Ⅲ和MGC80-3)细胞株中的表达水平。结果:胃癌组织中BRCAA1蛋白的表达阳性率(23/60,38.3%)显著高于癌旁组织(0/60,0%)(P<0.01);BRCAA1蛋白在高分化(2/17,11.8%)、中分化(11/26,42.3%)和低分化胃癌组织中(10/17,58.8%)的表达阳性率存在显著差异(P<0.05)。蛋白质印迹分析结果表明BRCAA1蛋白在胃癌高、中、低分化细胞株中的表达水平逐渐增强。结论:BRCAA1蛋白参与了胃癌的发生、发展,其表达水平与胃癌低分化程度密切相关,BRCAA1蛋白可能是一个胃癌不良预后的标志物。 黄拓 崔大祥 李清 徐萍 孙荔关键词:胃肿瘤 免疫组织化学 印迹法