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非酯化脂肪酸对体外培养的牛肝细胞中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶mRNA丰度及其活性的影响被引量：3: 2009年; 采用荧光定量PCR方法、酶活性速度测定法,探讨了非酯化脂肪酸(NEFA)对体外培养的牛肝细胞中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA丰度及其活性的影响。结果显示,添加1.5 mmol/L和2.0mmol/L NEFA时,PEPCK mRNA丰度显著低于对照组(P<0.05);添加0.5～2.0 mmol/L NEFA时,PEPCK的活性显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低。结果表明,NEFA对体外培养的牛肝细胞中PEPCK mRNA丰度和PEPCK酶活性均具有抑制作用。; 苏蔚易学瑞姜玉富刘国文孔祥平王哲; 关键词：乳牛肝细胞

Constructing Competitive Reverse Transcription Polymerize Chain Reaction Inter-Reference of PC mRNA by Intron Approach: 2004年; Inter-reference of competitive reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR)was constructed by intron method to detect the change of PC mRNA level in the pathway ofcarbohydrate metabolism. The experiment based on the principle that 81bp intron sequencewas deleted in PC mRNA compared with PC DNA sequence. The 466bp competitive DNA templaterecombinant plasmid of PC mRNA was successfully built by a pair of primer and was clonedonce, PC DNA and PC mRNA could be inter-referred each other. The intron approach used inthe experiment has broken through the traditional method of constructing competitivetemplate.; XUChuang XIACheng LIUGuo-wen WANGZhe JIANGYu-fu ZHANGNai-shen~ FUShi-xin; 关键词：PC INTRON CLONE

小鼠腹水IgG类单克隆抗体纯化方法的研究被引量：42: 2006年; 分别采用辛酸硫酸铵法(CA AS)、硫酸铵沉淀法(AS)和DEAE离子交换层析法对小鼠IgG腹水进行了纯化效果的比较。结果表明:CA AS法提取IgG的纯度为67.5%,高于AS法(43.2%),低于DEAE法(100%);CA AS法提取IgG的回收率为51.2%,远高于DEAE(8.9%),略低于AS法(63.8%)。将不同纯化方法获得的IgG定容至相同浓度。ELISA试验结果表明:DEAE法的OD值明显降低,表明DEAE纯化方法降低了IgG的免疫学活性。说明CA AS法是一种操作简单、成本低、纯化效果和回收效果较佳的提取小鼠腹水IgG的首选方法。; 周玉李岩松潘风光谭建华柳增善王哲; 关键词：辛酸硫酸铵离子交换层析

应用内含子法构建PC基因mRNA竞争RT-PCR内参照被引量：8: 2004年; 运用PC基因mRNA与PC基因DNA相比缺少1个81bp内含子序列的基本原理,应用PCR技术和生物工程原理,通过1对引物,进行1次克隆,成功构建了PC基因mRNA的466bp竞争DNA模板重组质粒,PC基因mRNA与PC基因DNA可以互为内参照。为应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测糖代谢过程中PC基因mRNA水平奠定方法学基础。; 徐闯夏成刘国文王哲姜玉富; 关键词：MRNA RT-PCR

应用竞争PCR检测丙酸盐对体外培养牛肝细胞丙酮酸羧化酶mRNA水平的影响被引量：5: 2005年; 根据牛肝细胞内PC(丙酮酸羧化酶)基因组与PCcDNA相比多含有一个内含子序列,在其中再插入一外源DNA序列,从而使最终构建的突变体片段的长度大于PCcDNA的长度,成功构建了PCcDNA的竞争DNA模板,然后应用竞争PCR方法研究了丙酸盐对体外培养新生牛单层肝细胞PCmRNA水平的影响。使单层肝细胞培养液中丙酸钠浓度分别为0、1.5、2.5、3.5、4.5、8.5、11.5mmol/L,处理24h,提取总RNA、逆转录,在同一体系中用相同引物扩增目的带和竞争模板带。结果表明,随着丙酸钠浓度的升高,PCmRNA水平呈上升趋势,提示肝细胞内PCmRNA的表达水平受培养液中丙酸钠浓度的影响。; 徐闯夏成刘国文王哲李家奎张乃生王兴龙欧阳红生张永亮; 关键词：肝细胞内含子

环丙沙星人工抗原的合成与鉴定(英文)被引量：9: 2006年; 采用碳二亚胺法将半抗原环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白进行偶联。采用非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法对偶联物中环丙沙星与载体蛋白的分子结合比进行分析。紫外分光光度法表明,环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白的分子结合比分别为6∶1和13∶1。非变性凝胶电泳显示,即使只有6个环丙沙星分子与载体蛋白偶联,偶联物在凝胶中的迁移轨迹与载体蛋白和偶联剂处理的载体蛋白对照样品均有明显不同。结果表明,非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法可用于环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白分子结合比的定性分析和定量分析。; 周玉李岩松王哲谭建华柳增善; 关键词：环丙沙星半抗原载体蛋白

丙酸钠和丙酮酸钠对体外培养牛肝细胞内丙酮酸羟化酶基因mRNA水平的影响: 2007年; 在成功构建牛肝细胞培养模型和PC基因DNA竞争模板的基础上,采用竞争RT-PCR方法检测了丙酸钠和丙酮酸钠对体外培养新生牛单层肝细胞PC基因mRNA丰度的影响。结果,随着丙酸钠浓度的升高,PC基因mRNA水平呈上升趋势,PC基因mRNA对丙酸钠的耐受范围较广;随着丙酮酸钠浓度的升高PC基因mRNA水平呈先上升后下降的趋势。结果表明,肝细胞内PC基因mRNA的表达水平受丙酮酸钠浓度的调控,在一定范围内丙酮酸钠对PC基因mRNA的转录具有促进作用,而浓度过高时则起抑制作用。; 徐闯郝贵增刘国文王哲夏成; 关键词：MRNA水平酶基因体外培养细胞内牛肝 PCR方法

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国家自然科学基金(30230620)