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国家自然科学基金(31201889)

作品数：6 被引量：14H指数：3
相关作者：李俊杜以军吴家强时建立彭喆更多>>
相关机构：山东省农业科学院青岛农业大学山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室更多>>
发文基金：国家自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金山东省农业科学院青年科研基金更多>>
相关领域：农业科学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 6篇农业科学

主题

  • 5篇病毒
  • 3篇圆环病毒
  • 2篇点突变
  • 2篇糖基化
  • 2篇突变
  • 2篇猪圆环病毒
  • 2篇猪圆环病毒2...
  • 2篇位点
  • 2篇位点突变
  • 2篇免疫层析
  • 2篇金免疫
  • 2篇抗体
  • 2篇胶体金
  • 2篇胶体金免疫层...
  • 2篇N-糖基化
  • 2篇PCV2
  • 2篇REP蛋白
  • 1篇性疾病
  • 1篇圆环病毒2型
  • 1篇真核

机构

  • 6篇山东省农业科...
  • 5篇青岛农业大学
  • 2篇山东省畜禽疫...
  • 1篇山东师范大学

作者

  • 6篇时建立
  • 6篇吴家强
  • 6篇杜以军
  • 6篇李俊
  • 5篇丛晓燕
  • 5篇徐绍建
  • 5篇王金宝
  • 5篇彭喆
  • 4篇孙文博
  • 3篇吴晓燕
  • 2篇徐胜男
  • 2篇张玲玲
  • 1篇王鹏
  • 1篇陈蕾
  • 1篇刘代成
  • 1篇郭立辉
  • 1篇邹榕凯
  • 1篇于江
  • 1篇刘畅
  • 1篇柳晓

传媒

  • 3篇家畜生态学报
  • 2篇中国动物检疫
  • 1篇中国兽医杂志

年份

  • 2篇2016
  • 1篇2015
  • 1篇2014
  • 2篇2013
共 6 条 记 录，以下是 1-6
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排序方式：
PK-15细胞α干扰素效应因子qPCR检测方法的建立及其初步应用
2013年
为建立一种用SYBR Green I荧光染料检测PK-15细胞α干扰素(α-IFN)效应因子Mx1、OAS的mRNA表达水平的qPCR检测方法,通过在猪圆环病毒2型(Porcine Circo-virus Type 2,PCV2)抑制α-IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。根据GenBank中目的基因的序列,利用分子生物学软件Premier 5.0在其保守区设计并合成相应的特异性引物。利用TRIzol法提取总RNA,经Oligo d(T)15进行反转录,利用PCR扩增各段目的基因,并克隆至pMD 18-T载体,转化大肠杆菌DH 5α,经鉴定为阳性的重组质粒作为标准品模板建立SYBR Green I qPCR标准曲线和溶解曲线,并进行灵敏性、特异性和重复性试验。根据建立的实时qPCR方法,检测PCV2对α-IFN效应因子的抑制效果。对建立的PK-15细胞α-IFN效应因子SYBR Green I qPCR方法进行分析,结果表明Mx1、OAS和内参β-actin基因的Ct值与标准品稀释度在1×101～1×108 copies/μL的范围分别呈良好的线性关系。PK-15细胞在接种PCV2,并受到α-IFN刺激后Mx1、OAS的相对表达量较未接种PCV2明显降低。本试验建立了PK-15细胞α-IFN效应因子的qPCR检测方法,为在mRNA水平上对PK-15细胞α-IFN效应因子的定量分析奠定了基础,并成功地初步应用于PCV2抑制α-IFN发挥效应的信号通路研究中。
邹榕凯李俊时建立柳晓丛晓燕孙文博杜以军吴家强王金宝
关键词：SYBRI猪圆环病毒2型PK-15细胞Α-干扰素
PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变及其真核表达载体的构建被引量：3
2014年
根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列设计并合成引物,通过点突变的方法对其进行单点、两点和3点突变,成功获得含单点、两点和3点的突变体。设计引物扩增突变体的ORF1片段,将目的片段分别经KpnI和XbaI双酶切进而将其连接到真核表达载体pVAX1中,成功构建PCV2-pVAX1-Rep真核表达载体。此重组表达载体的成功构建为进一步研究PCV2 ORF1编码蛋白的生物学活性打下了基础。
王鹏张熙艳时建立徐绍建丛晓燕刘畅彭喆孙文博杜以军吴家强王金宝李俊
关键词：猪圆环病毒2型突变
PCV2 Rep蛋白N-糖基化位点突变对病毒复制的影响被引量：1
2015年
N-糖基化对病毒的感染与增殖均具有重要作用,与PCV2复制相关的Rep蛋白含有三个N-糖基化位点。为了分析PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变对病毒复制的影响,本试验构建了三个双拷贝突变体感染性克隆2M23、2M256、2M286,并成功拯救病毒。通过间接免疫荧光检测病毒的拯救效果,TCID50测定病毒的感染力,荧光定量PCR检测细胞病毒的载量。结果显示,PCV2Rep蛋白的23~25aa、256~258aa N-糖基化位点突变后降低病毒的复制能力,而286~288aa突变后增强病毒的复制能力,为进一步阐明PCV2的复制及致病机制提供参考。
徐胜男时建立彭喆徐绍建吴晓燕丛晓燕杜以军吴家强李俊王金宝
关键词：REP蛋白
山东省规模化猪场四种病毒性疾病的抗体检测被引量：5
2016年
为及时了解山东省规模化猪场重大病毒性疾病的抗体水平,试验采用进口ELISA试剂盒,分别对山东省不同地区7个规模化猪场分别送检的共224份血清进行猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病毒及猪圆环病毒的抗体检测。结果显示：7个规模化猪场猪瘟、猪蓝耳病、猪圆环病毒病的抗体阳性率分别在20.00%~87.50%、5.00%~93.10%、38.89%~100.00%之间;猪伪狂犬病野毒感染率为0.00%~88.89%,经SPSS 19.0软件分析知7个不同猪场之间各种疾病的抗体阳性率均存在显著差异性（P〈0.05）。根据以上数据对猪场四种病毒性疾病的抗体水平进行分析,为制定完善的免疫防控方案提供重要的依据。
张玲玲时建立彭喆徐绍建郑书轩吴晓燕丛晓燕杜以军吴家强李俊王金宝
关键词：病毒性疾病ELISA抗体检测
SPA胶体金免疫层析方法检测PCV2抗体的初步建立及应用被引量：2
2013年
采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上制备金标垫,将纯化的Cap蛋白、兔抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测猪圆环病毒2型抗体的胶体金免疫层析方法。检测结果显示,组装的检测卡只与圆环病毒阳性血清发生特异性反应,检测的灵敏度可以稀释到100倍。用此检测卡与商品化ELISA试剂盒对86份临床血清进行平行检测,两者的检测阳性率分别为65.12%和70.93%。该方法检测速度快,15min内可出结果,特异性强,操作简便,可广泛应用于基层。
时建立战翔李俊丛晓燕孙文博杜以军彭喆徐绍建吴家强陈蕾郭立辉王金宝刘代成
关键词：SPA胶体金免疫层析
圆环病毒2型抗体胶体金检测试纸条的初步研制及应用被引量：3
2016年
为快速检测猪群中猪圆环病毒2型抗体,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记纯化的猪圆环病毒Cap蛋白和兔IgG,包被至玻璃纤维膜上制备金标垫,将纯化抗原和羊抗兔IgG分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了检测猪圆环病毒2型抗体的胶体金免疫层析方法并组装检测卡。结果显示,组装的检测卡只与圆环病毒阳性血清发生特异性反应,阳性血清稀释10倍后仍然能够检出。用此检测卡与商品化ELISA试剂盒对100份临床血清进行平行检测,阳性率分别为89%和93%,两种方法符合率在95%以上。该方法操作简便、特异性强,可广泛应用于基层,也为圆环病毒疫苗效果评价提供了良好的试剂选择。
时建立徐胜男彭喆张玲玲徐绍建郑书轩吴晓燕于江孙文博杜以军吴家强李俊
关键词：胶体金免疫层析
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