中央级科研院所科技基础性工作专项(2001DEB20055)
- 作品数：2 被引量：28H指数：2
- 相关作者：曲连东刘家森李慕瑶司昌德韩凌霞更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学沈阳农业大学更多>>
- 发文基金：中央级科研院所科技基础性工作专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 兔出血症病毒VP60基因在昆虫细胞中形成病毒样颗粒及其特性被引量：7
- 2007年
- 目的将兔出血症病毒(RHDV)VP60全长基因在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,验证重组蛋白形成病毒样颗粒(VLPs)的能力及其生物学特性,探讨VLPs作为检测抗原及亚单位疫苗的潜力。方法用Bac-to-Bac系统体外表达RHDVVP60全长基因。以免疫荧光及Western blotting检测蛋白表达情况及确定蛋白最佳表达条件;免疫电镜观察VLPs形态,并对VLPs的血凝性、免疫原性进行检测。结果SDS-PAGE电泳分析表明,表达的重组蛋白分子量大小约为68KDa,在免疫荧光、琼脂扩散、ELISA试验中均与RHD多克隆抗血清特异性反应;接种重组病毒的Sf9细胞裂解液在电镜下可观察到与RHDV形态相似的VLPs;该VLPs可凝集人“O”、“B”型红细胞,凝集可被RHD多克隆抗血清所抑制;含VLPs的Sf9细胞裂解液可不经纯化用作间接ELISA抗原,所建立的ELISA方法与进口商品化试剂盒相比,特异性良好,敏感性、检出率稍低;将含VLPs的细胞裂解液加氟氏佐剂免疫兔,HI效价可达1∶40,可经受致死量病毒攻击。结论RHDV-VLPs的获得及其良好的免疫原性,为RHD血清学检测试剂的标准化、亚单位疫苗研制应用奠定基础,同时在转移载体及RHDV受体方面研究亦有潜在应用价值。
- 刘怀然刘家森胡迎东陈洪岩单安山曲连东
- 关键词：兔出血症病毒昆虫细胞病毒样颗粒
- 犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：21
- 2007年
- 根据GenBank上发表的犬细小病毒(CPV)VP2蛋白基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增VP2基因全长。将其克隆到pET-30a载体中,构建了原核表达载体pET-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白,Western-blotting证明该重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白为抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为15.8 ng/孔,血清的最佳稀释倍数为1∶100,建立了检测CPV血清抗体的间接ELISA方法。
- 李慕瑶姜骞刘家森司昌德韩凌霞曲连东
- 关键词：VP2基因原核表达纯化间接ELISA
