美国中华医学基金(CMB96655)
- 作品数：8 被引量：88H指数：5
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- 一种检测同一部位两种蛋白共表达的新方法─CSA/SP双染色法被引量：1
- 2000年
- 王承兴李晓艳肖绘邓锡云曹亚
- 关键词：免疫组化共表达
- EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌中结合磷酸化的TRAFs被引量：3
- 2001年
- 对鼻咽癌中潜伏膜蛋白 1 (LMP1 )是否结合磷酸化的肿瘤坏死因子受体相关因子 (tumornecrosis factor receptor- associated factors,TRAFs)信号分子进行探讨 .首先应用 CSA/SP双染色法在 30例鼻咽癌活检组织中发现 1 6例 (52 % ) LMP1与 TRAF1、TRAF2和 TRAF3共表达于癌细胞胞膜及胞浆同一部位 .这提示 EB病毒 LMP1在鼻咽癌中可能结合 TRAF1、TRAF2或TRAF3发挥作用 .进一步以导入载体 p SG5的鼻咽癌细胞系 HNE2 - p SG5为对照 ,建立了稳定表达 LMP1的鼻咽癌细胞系 HNE2 - LMP1 ,利用这两种细胞系 ,以免疫共沉淀 - Western印迹方法 ,证实了 LMP1可与磷酸化的 TRAF1、TRAF2或 TRAF3直接或间接作用形成免疫共沉淀复合物 .
- 王承兴李晓艳顾焕华邓锡云曹亚
- 关键词：鼻咽癌潜伏膜蛋白1肿瘤坏死因子受体相关因子EB病毒
- EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过NF-κB、AP-1促进IL-8分泌被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨EB病毒LMP1分子致瘤机制 ,在已证实鼻咽癌细胞系中LMP1有效激活NF κB或AP 1的基础上 ,对LMP1是否通过NF κB或AP 1促进IL 8分泌进行探讨。方法 以稳定表达LMP1及其 3种突变体、空白载体的鼻咽癌细胞系 [HNE2 LMP1、HNE2 LMP1(1 185 )、HNE2 LMP1(1 2 31)、HNE2 LMP1△ 187 35 1和HNE2 pSG5 ]及antisense LMP1处理的HNE2 LMP1鼻咽癌细胞系为材料 ,将IL 8报道质粒瞬时导入这些细胞系中 ,通过测定luciferase值以反映LMP1是否促进IL 8转录 ;将mutAP 1 IL 8 luc或IκBα(S32A S36A)表达质粒导入HNE2 LMP1细胞系中 ,比较其IL 8报道活性 ,以确定LMP1是否通过AP 1或NF κB诱导IL 8转录 ;利用ELISA方法测定HNE2 LMP1、HNE2 pSG5、anti sense LMP1处理的HNE2 LMP1鼻咽癌细胞系中的IL 8浓度 ,进一步从蛋白水平上确定LMP1是否促进IL 8分泌。结果 与HNE2 pSG5相比 ,在HNE2 LMP1、HNE2 LMP1△ 187 35 1和HNE2 LMP1(1 2 31)细胞系中IL 8报道活性分别升高了原来水平的 11.5、8.6和 3.4倍 ,而HNE2 LMP1(1 185 )对IL 8报道活性不影响。在HNE2 LMP1细胞系中IL 8蛋白水平提高了 17.4倍 ,而antisense LMP1则使HNE2 LMP1细胞的IL 8报道活性及蛋白水平分别下降到原来水平的 18.3%和 9.2 % ;
- 王承兴顾焕华邓锡云李晓艳夏林庆易薇翁新宪曹亚
- 关键词：EB病毒IL-8分泌NF-ΚBAP-1鼻咽癌
- EBV LMP1通过诱导c-myc表达活化端粒酶hTERT被引量：5
- 2003年
- 利用原代人胚鼻咽上皮细胞和Tet on LMP1HNE2等良好的细胞体系,采用报道基因法和Westernblot法等,分别检测Epstein Barr病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)诱导的c myc反式激活活性和蛋白表达水平,从LMP1诱导细胞内c myc表达的角度,探讨LMP1诱导端粒酶表达的分子机制。结果表明,LMP1促使细胞内c myc反式激活活性增强,c Myc蛋白表达量升高;导入反义LMP1表达质粒阻断LMP1表达后,c myc反式激活活性下降。将端粒酶hTERT启动子上c myc结合位点突变后,LMP1不能诱导端粒酶hTERT表达。因而认为,EB病毒LMP1通过诱导c myc表达而活化端粒酶hTERT。
- 杨静邓锡云邓琳丁琳顾焕华易薇曹亚
- 关键词：潜伏膜蛋白1EB病毒
- EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过NF-κB、AP-1促进MMP9表达被引量：34
- 2002年
- 目的 探讨EB病毒 (Epstein BarrVirus,EBV)LMP1是否通过NF κB和AP 1促进MMP9表达 ,为全面阐明LMP1的分子致瘤机制提供实验依据。方法 将MMP9 CAT表达质粒导入HNE2 pSG5、HNE2 LMP1、HNE2 LMP1(1 185 )、HNE2 LMP1(1 2 31)、HNE2 LMP1Δ187 35 1鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma ,NPC)细胞系 ,比较各组细胞系的氯霉素乙酰转移酶 (CAT)活性 ,以确定LMP1或其不同的结构域是否上调MMP9转录 ;采用明胶Zymography法检测上述细胞产生MMP9的活性 ,以确定LMP1或其不同的结构域是否促进MMP9蛋白表达 ;借助报道基因分析法确定在NPC中野生型LMP1能否激活NF κB和AP 1的活性 ,进一步将突变了NF κB或AP 1结合位点的MMP9 CAT表达质粒导入上述细胞系 ;比较相应的CAT活性 ,以确定LMP1或其不同的结构域是否通过NF κB或AP 1上调MMP9表达。结果 与导入载体pCDNA3比较 ,HNE2 LMP1、HNE2 LMP1(1 185 )、HNE2 LMP1(1 2 31)和HNE2 LMP1Δ187 35 1NPC细胞系CAT活性分别提高 7.2 ,1.3,3.3和 4.0倍。明胶Zymography法检测显示 ,在HNE2 LMP1、HNE2 LMP1(1 2 31)和HNE2 LMP1Δ187 35 1细胞系中 ,均可检测到 92 0 0 0MMP9活性 ,而HNE2 pSG5、HNE2 LMP1(1 2 31)几乎均为阴性。较之母细胞 ,野生型LMP1活化NF
- 王承兴邓锡云李晓艳顾焕华易薇翁新宪夏林庆曹亚
- 关键词：EB病毒LMP1NF-ΚBAP-1鼻咽癌
- EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF-kB被引量：18
- 2000年
- 目的：为了探讨ＥＢ病毒（ＥＢＶ）中ＬＭＰ１的致瘤机制，对鼻咽癌ＬＭＰ１激活重要的核转录因子ＮＦ－_ＫＢ的机制进行了研究。方法：①以ＬＭＰ１阴性的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２及表达载体（ｐＳＧ５）的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ｐＳＧＳ为对照，采用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法在稳定表达ＬＭＰ１的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中证实ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２是否直接结合形成免疫共沉淀复合物；②在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系导入ＴＲＡＦ２表达质粒或不同剂量ＴＲＡＦ２显性负性突变体（ＴＲＡＦ２Ａ６－ ８６）表达质粒，以 ＮＦ－ｋＢ报道基因方法确定 ＬＭＰ1是否通过 ＴＲＡＦ2活化 ＮＦ－ｋＢ ；③将ＬＭＰ１（１－２３１）（ＣＴＡＲ２缺失区）或ＬＭＰ１△１８７－３５１（ＣＴＡＲＩ缺失区）及不同剂量ＴＲＡＦ２Ａ６－８６瞬时导入ＨＮＥ２中以证实ＬＭＰ１ ＣＴＡＲ１或ＣＴＡＲ２是否介导了这种效应；④以转染或未转染ＴＲＡＦ２６－８６的ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系为材料，应用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法，确定ＴＲＡＦ２△６－８６是否竞争性抑制ＴＲＡＦ２与ＬＭＰ１结合。结果：①在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２形成复合物?
- 王承兴李晓艳肖绘邓锡云曹亚
- 关键词：LMP1TRAF2NF-KBEB病毒
- 鼻咽癌中EB病毒潜伏膜蛋白1对p53表达的调控被引量：23
- 2001年
- 目的 探讨EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)是否通过NF κB在鼻咽癌细胞中促进p5 3蛋白的表达 ,为阐明LMP1促进细胞凋亡的机制提供实验依据。方法 利用四环素诱导表达系统 ,建立受四环素调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系。用报道基因检测法和Western印迹技术 ,观察LMP1过量表达对NF κB的功能性活化及p5 3、bcl 2表达的影响。结果 在鼻咽癌细胞中 ,LMP1能活化NF κB。过量表达的LMP1促进p5 3基因的表达 ,这种促表达可以被硫代磷酸化修饰的LMP1及p6 5反义寡聚脱氧核苷酸阻断。LMP1和p6 5对bcl 2的表达则没有影响 ,LMP1过表达对bcl 2的表达无影响。结论鼻咽癌中LMP1通过活化核转录因子NF κB调节p5 3的表达 ;而在LMP1过表达时 ,bcl 2介导的抗凋亡机制未被启动 ,至少是未被上调的。
- 廖伟唐敏殷莉群邓锡云曹亚
- 关键词：鼻咽肿瘤潜伏膜蛋白1P53基因
- TRAF1在鼻咽癌及癌旁组织中的表达被引量：7
- 2000年
- 目的：研究鼻咽癌组织EB病毒LMP1与TRAF1(tumornecrosisfactorreceptorassociatedfactor1)表达的关系，以探讨LMP1可能促进TRAF1表达的作用。方法：应用LMP1和TRAF1抗体对30例鼻咽癌和12例慢性炎症鼻咽粘膜石蜡标本，以SP免疫组织化学技术检测LMP1及TRAF1的表达。结果：30例鼻咽癌中16例是LMP1阳性（53.3％），17例TRAF1阳性（56.7％）。其中16例LMP1阳性中，TRAF1表达阳性为14例（87.5％），TRAF1阴性为2例（12.5％），两者差异具有显著性(P<0.01)。30例鼻咽癌中有5例带有癌旁上皮，其中3例癌旁上皮LMP1及TRAF1均表达阳性;1例LMP1阳性，TRAF1表达阴性;1例LMP1与TRAF1均表达阴性。而12例慢性炎症鼻咽粘膜LMP1及TRAF1均无表达。结论：鼻咽癌组织中LMP1阳性者有较高的TRAF1表达，可能由于LMP1的表达促进了TRAF1表达。
- 王承兴邓锡云李晓艳肖绘曹亚
- 关键词：鼻咽肿瘤EB病毒TRAF1免疫组化癌旁组织
