贵州省教育厅自然科学研究项目(2010044)
- 作品数：7 被引量：24H指数：3
- 相关作者：杨亦彬谭州科罗茜张子阳唐智更多>>
- 相关机构：遵义医学院附属医院遵义医药高等专科学校遵义医科大学附属医院更多>>
- 发文基金：贵州省教育厅自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 槲皮素通过转化生长因子-β1／Smad通路减轻环孢素诱导的大鼠肾小管间质纤维化被引量：8
- 2015年
- 目的探讨槲皮素对环孢素诱导的大鼠肾小管间质纤维化的影响及其机制。方法将sD大鼠分为3组：模型组（环孢素灌胃，剂量为每天25mg／kg），干预组（在给予等量环孢素基础上加用槲皮素，剂量为每天15mg／kg），对照组（不给药物）。实验过程均采用低盐饮食，6周后处死大鼠获取标本，Masson染色评判肾脏组织病理学改变及纤维化程度；免疫组织化学检测肾脏组织转化生长因子-β1（TGF-β1）、Ⅳ型胶原（COL-Ⅳ）的染色；Westernblot检测Smad2、Smad3和Smad7蛋白表达，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad7mRNA的表达。结果与对照组比较，模型组大鼠肾组织间质纤维化积分明显升高（2．25±0．27，P〈0．01），TGF-β1、COL-Ⅳ表达明显增加（5．94±0．10、6．20±0．09，P〈0．01），TGF—β1、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表达明显升高（1265．73±195．40、212．75±22．97、123．34±26．13、87．37±9．06，P〈0．01），Smad2、Smad3蛋白表达均升高（P〈0．01）；与模型组比较，槲皮素干预组间质纤维化积分（干预组比模型组1．63±O．14比2．25±0．27，P〈0．05）、TGF-β1mRNA及蛋白（干预组比模型组876．76±221．71比1265．73±195．40，P〈0．01）、COL-Ⅳ蛋白（干预组比模型组5．62±0．19比6．20±0．09，P〈0．01）、Smad2、Smad3mRNA（分别为155．78±32．49、84．17±15．34，P〈0．05）及蛋白表达均不同程度降低，而Smad7mRNA及蛋白表达进一步升高（干预组比模型组151．63±5．25比87．37±9．06，P〈0．01）。结论槲皮素可能通过TGF．[31／Smad通路减缓环孢素诱导的大鼠肾小管间质纤维化。
- 谭州科罗茜杨蝶张子阳杨亦彬
- 关键词：环孢素肾小管间质纤维化槲皮素转化生长因子-Β1
- TGF-β/Smads/ILK通路与慢性环孢素肾病被引量：2
- 2013年
- 环孢素A（cyclosporine A,CsA）是目前常用的强效免疫抑制药物之一,广泛用于器官移植的抗排异反应以及一些免疫性疾病的治疗。长期使用CsA可引起慢性毒性而发生慢性环孢素肾病（chronic cyclosporine nephrotoxicity,CCN）,CCN的致病机制尚未完全明确,间质-上皮转分化引起的慢性肾纤维化被认为是其主要机制之一,
- 郑杰杨亦彬曾强林
- 关键词：环孢素A肾毒性
- TGF-β1/ILK/FSP1信号通路在环孢素诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用被引量：4
- 2019年
- 目的通过体外特异阻断试验,探讨转化生长因子-β1/整合素连接激酶/成纤维细胞特异蛋白1(TGF-β1/ILK/FSP1)信号通路在环孢素A致肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法构建并鉴定ILK-RNAi慢病毒表达载体ILKshRNA。将NRK52E细胞培养分为5组,分别为空白对照组;环孢素诱导组:细胞培养液加环孢素A 1 mg/L;TGF-β1干预组:阻断剂(SB431542)10μmol/L加环孢素A 1 mg/L;ILK干预组:阳性转染ILKshRNA后加入环孢素A 1 mg/L;阴性对照组:阴性转染ILKshRNA后加入环孢素A 1 mg/L。实时荧光定量PCR检测TGF-β1、ILK和FSP-1 mRNA的表达,Western blot检测TGF-β1、ILK、FSP-1的蛋白表达。免疫组化检测细胞爬片α-SMA阳性表达细胞数。结果与空白对照组比较,环孢素诱导组细胞TGF-β1、ILK、FSP-1基因及蛋白表达量均显著增加(P<0.05);TGF-β1干预组经SB431542处理后,TGF-β1、ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低(P<0.05);经ILKshRNA沉默后,ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低(P<0.05)。α-SMA阳性细胞数经SB431542和ILKshRNA处理后较环孢素诱导组降低(P<0.05)。结论 TGF-β1/ILK/FSP1信号通路激活是环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的重要机制之一,ILK参与环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化过程。
- 白志勋陆静杨亦彬
- 关键词：上皮细胞转分化转化生长因子-Β1整合素连接激酶
- 大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的构建大鼠整合素连接激酶-RNAi（ILK-RNAi）慢病毒表达载体,为下一步干预研究细胞转分化及其信号通路奠定基础。方法针对大鼠ILK基因RNAi有效靶序列,合成4条干扰（KD）序列。与pGCSIL-GFP载体连接产生shILK-RNAi慢病毒载体。将连接产物转入制备完毕的细菌感受态细胞,PCR鉴定阳性克隆,测序验证。包装慢病毒,以绿色荧光蛋白（GFP）表达水平验证病毒滴度。慢病毒载体感染大鼠NRK-52E细胞后,RTPCR、WB检测及荧光显微镜观察ILK在其细胞中的表达。结果测序验证成功构建3条大鼠ILK-RNAi慢病毒载体,滴度分别为5×10^8,2.5×10^8,3.5×10^8 pfu/mL。分别以不同感染复数（MOI）感染NRK-52E细胞进行内源筛靶,荧光观察80%细胞的绿色荧光蛋白,RT-PCR、WB检测ILK的表达明显下降。相对于阴性对照序列,KD2,KD3在高MOI组中对ILK表达的敲减达到65%以上（P〈0.05）,为有效靶点。其中KD2及KD3的ILK 2-△△Ct值分别为0.337,0.217。KD2序列为对ILK的表达抑制最显著。结论成功构建大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体。
- 白志勋陆静杨亦彬
- 关键词：NRK-52E整合素连接激酶慢病毒载体
- 槲皮素对大鼠慢性环孢素肾病的保护作用被引量：6
- 2012年
- 目的建立慢性环孢素A肾病大鼠模型,观察槲皮素对环孢素A导致慢性肾损害的影响。方法在低盐饮食基础上将SD大鼠分为四组:环孢素模型组、槲皮素干预组素、正常对照组、溶剂对照组。慢性环孢素肾病采用橄榄油稀释环孢素A灌药造模,槲皮素灌药干预。4周后处死,分别测定肾功能、尿蛋白和体重变化;HE、Mas-son染色评判肾脏组织病理学改变及纤维化程度;免疫组化检测肾脏组织TGF-β1的表达情况。结果①环孢素模型和槲皮素干预组大鼠体重明显下降,其血肌酐水平和尿蛋白排泄量均较两对照组明显升高(P<0.01),但槲皮素干预组上述指标改变明显低于环孢素模型组(P<0.05)。②环孢素模型组肾脏病理组织学改变主要为小管间质损伤,间质纤维化,小管萎缩;槲皮素干预后肾小管损伤以及间质纤维化积分明显低于环孢素模型组(P<0.01)。③环孢素模型和槲皮素干预组肾组织TGF-β1较两对照组明显上调(P<0.01),但槲皮素干预组肾组织TGF-β1表达明显低于环孢素模型组(P<0.05)。结论槲皮素对慢性环孢素肾病有一定的保护作用,可能与降低尿蛋白排泄、下调肾组织TGF-β1的表达,延缓肾小管间质纤维化进程有关。
- 谭州科唐智罗茜杨亦彬
- 关键词：槲皮素环孢素慢性肾毒性肾小管间质纤维化
- 抑制TGF-β1对慢性环孢素肾病小鼠Smad2/3及ILK信号分子的影响被引量：3
- 2017年
- 目的:特异性抑制TGF-β,观察Smad2/3、ILK信号蛋白变化,评估TGF-β1/Smad/ILK信号通路在环孢素肾病(CCN)模型小鼠小管间质纤维化中的作用。方法:BALB/c小鼠随机分成:环孢素模型组(CMG)、干预模型组(IMG)、溶媒对照组(SCG)、低盐对照组(LCG)和正常对照组(NCG)。CMG与IMG组采用低盐饲养并环孢素60 mg/(kg·d)灌胃,从第28天腹腔给予TGF-β1特异抑制剂SB-431542 10 mg/(kg·2 d),第38天后采样,比较各组血清肌酐(Scr);观察肾组织羟脯氨酸(Hyp)含量及其病理变化,免疫组化或Western blot观察TGF-β1、P-Smad2/3、ILK表达,RT-PCR检测TGF-β1、Smad2/3及ILK mRNA表达。结果:CMG和IMG小鼠SCr显著升高(P<0.01),肾小管结构不同程度损伤,间质炎性细胞增多,蓝色胶原染色不同程度增多,肾组织Hyp含量明显增多(P<0.01),其中IMG上述指标较CMG明显改善。CMG和IMG小鼠肾小管间质TGF-β1、P-Smad2/3及ILK基因和蛋白表达明显增强(P<0.01),而IMG上述因子表达明显低于CMG(P<0.05)。肾脏Hyp含量与Scr、TGF-β1、P-Smad 2/3、ILK水平呈正相关(r=0.860、0.711、0.776、0.676,均P<0.01)。结论:TGF-β1/Smads信号通路是CCN模型小鼠肾间质纤维化重要机制之一;ILK参与CCN小管间质纤维化,且可能系TGF-β1/Smads信号通路下游因子参与CCN小管间质纤维化进程。
- 曾强林白志勋王丹杨亦彬
- 关键词：小管间质纤维化整合素连接激酶
- 慢性环孢素肾病大鼠模型制作体会被引量：3
- 2012年
- 目的总结慢性环孢素肾病大鼠模型制作体会。方法将SD大鼠分为四组:环孢素模型组(环孢素+橄榄油),溶剂对照组(橄榄油),低盐对照组,正常对照组。前三组均给予低盐饮食,慢性环孢素肾病模型组采用橄榄油稀释后的环孢素溶液灌胃,并定期测定环孢素血药物浓度,各组分别于灌药4周、6周后处死,测定大鼠体重等一般情况,尿蛋白,血肌酐等肾功能变化;HE和Masson染色观察肾组织病理改变;免疫组化检测肾脏组织TGF-β1、α-SMA的表达情况。结果①环孢素模型组大鼠4、6周均出现体重下降、血肌酐升高和尿蛋白排泄量增加,肾小管空泡变性,小管萎缩等损害,间质纤维化。与正常对照组相比,溶剂对照组与低盐对照组以上指标均无明显改变(P>0.05);②环孢素模型组4周即可出现慢性环孢素肾病典型病理组织学改变;6周小管间质纤维化进行性加重(P<0.01);③与对照组相比,环孢素模型组4、6周均可见肾组织TGF-β、α-SMA表达明显上调(P<0.01)。结论在低盐饮食下,给予环孢素灌药4周后可建立慢性环孢素肾病大鼠模型。
- 谭州科张子阳罗茜唐智杨亦彬
- 关键词：环孢素慢性肾毒性肾小管间质纤维化Α-SMA动物模型制作
