广东省粤港关键领域重点突破项目(2008A024200006)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：唐冬生蒋泓粟文俊邓廷贤洪亚辉更多>>
- 相关机构：佛山科学技术学院湖南农业大学华南农业大学更多>>
- 发文基金：广东省粤港关键领域重点突破项目广东省科技攻关计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学自动化与计算机技术更多>>
- 人工锌指核酸酶的电子设计与结构模拟
- 2011年
- 以电子设计用于猪的多位点基因打靶的人工锌指核酸酶为例,探索如何电子设计优化理想的人工锌指核酸酶,以减少人工锌指核酸酶的毒性。采用OPEN电子设计方法,生物信息学方法的预测分析ZFP的立体结构,设计优化合适的连接体和间隔体组合,并通过突变优化Fok I异源二聚体。采用OPEN法设计三指ZF序列,并连接为ZFP序列,设计出长度为6 bp且富含AT碱基的spacer,加上长度为4个氨基酸残基的inter-domain linker,连接FokⅠ切割结构域双突变子异源二聚体,并通过各种软件工具对ZFN的空间结构进行模拟预测,所设计得到的ZFN的有效率超过50%。探索获得电子设计理想ZFN的方案,即特异性结合DNA的锌指蛋白、最佳的linker和spacer的长度与组合以及优化的特异性切割的Fok I异源二聚体切割结构域。
- 张勇蒋泓邓廷贤粟文俊杨莉珊唐冬生
- 关键词：锌指核酸酶锌指蛋白连接体
- 脂质体转染巴马猪胎儿成纤维细胞条件的优化被引量：9
- 2011年
- 研究旨在脂质体介导基因转染巴马猪胎儿成纤维细胞时获得较高转染效率,同时以GFP为报告基因探讨影响外缘基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量及细胞与DNA与脂质体复合物的孵育时间。结果表明,6μgDNA与15μL脂质体转染8h,可获得较满意的转染效率。
- 粟文俊蒋泓唐冬生洪亚辉
- 关键词：脂质体成纤维细胞转染绿色荧光蛋白
- 锌指核酸酶介导的高效多位点基因打靶被引量：4
- 2012年
- 该研究旨在建立锌指核酸酶介导的多位点基因打靶技术,为获得稳定遗传的转基因动物或基因治疗临床应用解决技术难题.首先利用OPEN平台设计、构建能识别人基因组内rDNA基因间隔序列的锌指蛋白基因序列,与FokⅠ的切割结构域连接、表达后获得锌指核酸酶基因,再构建锌指核酸酶真核表达载体.另外,构建含有2条同源重组引导序列和绿色荧光蛋白基因(EGFP)的多位点基因打靶载体.将锌指核酸酶真核表达载体和多位点基因打靶载体共转染HEK293细胞,内参对照PCR-灰度分析法检测外源基因定点整合效率,结果显示单独转染多位点基因打靶载体的定点整合效率为6.8%;而由于锌指核酸酶在染色质DNA上切割rDNA基因的间隔序列,诱导高效同源重组,锌指核酸酶载体、多位点基因打靶载体共转染的定点整合效率为24.2%,较常规基因打靶定点整合率(10-6～10-5)提高了24000多倍.共转染的HEK293细胞在无任何筛选的条件下持续培养2个月,经过20次传代之后,子代细胞能够持续表达EGFP,提示表达稳定.本研究建立了锌指核酸酶介导的高效多位点基因打靶技术,不仅大大提高了外源基因的定点整合效率,而且兼顾了基因表达的稳定性和安全性,为动物定点转基因和人类基因治疗提供了重要的技术平台,具有广泛的应用前景.
- 唐冬生蒋泓刘芳王克振张勇曾芳梁沂梅邓廷贤欧阳宏佳李月琴张细权周天鸿
- 关键词：锌指核酸酶基因打靶同源重组转基因动物基因治疗
