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GABARAP克隆表达及其抗体的制备与应用被引量：2: 2008年; GABARAP(GABA_A-receptor-associated protein)是最新发现的与GABA_A受体γ2亚基胞内区有相互作用的蛋白,目前的研究结果表明它可能是通过与微管相互作用辅助GABA_A受体向细胞膜上运输并使受体在膜上聚集。本文中用PCR方法扩增出编码人GABARAP(hGABARAP)的cDNA片段,然后分别克隆到真核表达载体pcDNA6/HA和谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX4T2中。将后者导入大肠杆菌BL21中,经过IPTG诱导后用谷胱甘肽偶联的Sep- harose-4B柱子纯化出融合蛋白GST-hGABARAP。以此蛋白作为抗原免疫家兔制备抗GABARAP的抗血清,并用GST- hGABARAP耦联的NHS-activated Sepharose4柱子纯化抗体。纯化的抗体可以用于真核细胞中过量表达hGABARAP的Western和免疫染色检测。结果表明,过量表达的hGABARAP在真核细胞核和细胞质中都有表达,部分集中于核周区域。; 李雪旎韩亮王芳黄世思张慧常智杰; 关键词：GST融合蛋白抗体

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清华-裕元医学科学研究基金(202400005-6)