留学人员科技活动项目择优资助经费([2003]8)
- 作品数：2 被引量：14H指数：2
- 相关作者：吴绍强魏冬霞宋慧群林瑞庆朱兴全更多>>
- 相关机构：华南农业大学江苏农牧科技职业学院更多>>
- 发文基金：留学人员科技活动项目择优资助经费广东省自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 猪蛔虫雄虫cDNA文库的构建被引量：6
- 2006年
- 采用Tripure Isolation Reagent抽提猪蛔虫雄虫成虫的总RNA,用poly(A)PuristTM纯化试剂盒分离mR-NA。分离mRNA后,用Clontech公司的CreatorTMSMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建了猪蛔虫雄虫成虫的cDNA文库。结果获得了7.26×105独立克隆,重组率达96.7%,插入片段的平均长度约为1 kb。猪蛔虫雄虫cDNA文库的成功构建为利用文库筛选雄虫差异表达基因提供了材料来源,为研究猪蛔虫性别发育的分子机制奠定了基础。
- 邓艳魏冬霞吴绍强林瑞庆宋慧群朱兴全
- 关键词：猪蛔虫雄虫CDNA文库SMART技术
- 用SMART技术构建猪蛔虫雌虫cDNA文库被引量：9
- 2007年
- 为克隆出与猪蛔虫产卵或发育相关基因的全长序列,本研究根据SMART(Switching mechanism at5'end of RNA transcript)技术,采用Clontech公司的CreatorTM SMARTTM cDNA Library Construction Kit构建了猪蛔虫雌虫的全长cDNA文库。用TriPure Isolation Reagent和Poly(A)PuristTM试剂盒提取mRNA后,以逆转录酶PowerScriptTM反转录合成第一链cDNA,然后通过LD-PCR合成并扩增ds cDNA。扩增产物经纯化、SfiⅠ酶切、过CHROMA SPIN-400TM柱去除小片段后,连接到SfiⅠ消化过的pDNR-LIB(带有SfiⅠA和B两个位点)质粒载体中,最后用电转化法将重组质粒转化到E.coli DH5α内得到原始文库,扩增后的文库保存在96孔细胞培养板中。经测定,构建的cDNA文库约含有1.6×106个重组子,重组效率达100%,插入片段多在0.4kb～2kb之间,平均插入片段长度约1.2kb,扩增后文库滴度为3×109CFU/mL。结果表明猪蛔虫雌虫的全长cDNA文库已构建成功,从而为筛选猪蛔虫雌虫的功能基因全长序列奠定了基础。
- 魏冬霞邓艳吴绍强林瑞庆宋慧群朱兴全
- 关键词：CDNA文库SMART技术
