吉林省科技厅科技发展计划项目(20050549)
- 作品数：25 被引量：104H指数：5
- 相关作者：王兴龙任林柱王学理刘锴李晓艳更多>>
- 相关机构：军事医学科学院吉林大学内蒙古民族大学更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 口蹄疫病毒WFL株全基因组结构及遗传变异分析
- 2008年
- 目的对FMDV WFL株全基因组进行克隆及测序,并对其基因组进行了比较分析,结果表明WFL株全长为8155nt,该毒株5’UTR长1 059nt(untranslatable region,UTR),编码区核苷酸长度为6969nt,3’UTR包括93nt非编码碱基和34nt poly(A);WFL株与HKN/2002的核苷酸及氨基酸同源性最高;WFL株的polyC长17nt,其中C碱基占94.12%,仅有一个U碱基;3A基因有10个氨基酸的缺失。
- 任林柱王兴龙刘锴王学理张辉
- 关键词：口蹄疫病毒基因组
- 布鲁氏菌分子标记、毒力基因缺失株YZ-2生物学特性及免疫原性研究被引量：4
- 2010年
- 试验旨在考查布鲁氏菌分子标记、毒力基因缺失疫苗株YZ-2的生物学特性和免疫原性。对YZ-2菌落形态、生化特性、变异检查试验、毒力、遗传稳定性等生物学特性,以及免疫小鼠后体液免疫和细胞免疫水平进行试验,并与其亲本株S19进行比较。结果显示,YZ-2的形态及生化特性同亲本株S19相一致,但变异检查试验结果显示YZ-2由亲本株的光滑型变为粗糙型;毒力试验证实YZ-2的毒力与亲本株S19显著减弱,且YZ-2遗传稳定性良好。免疫原性试验证实,布鲁氏菌YZ-2在整体上具有与亲本株相似的免疫原性。结果表明,布鲁氏菌分子标记、毒力基因缺失疫苗株YZ-2的安全性较S19进一步提高,稳定性好,且具有与亲本株相近的免疫原性,有很好的应用前景。
- 张付贤李晓艳杨艳玲张辉郎需龙唐婕王兴龙
- 关键词：布鲁氏菌免疫原性
- 口蹄疫病毒2B基因绿色荧光蛋白融合表达质粒的构建及表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和2B基因转录水平。结果经双酶切及PCR鉴定,目的基因片段大小与预期相符,测序结果与WFL株相应序列一致。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有2B基因的转录。结论已成功构建了FMDV2B基因GFP融合表达质粒,并在BHK-21细胞中获得了表达。
- 崔丽瑾王兴龙梅英武任林柱闫广谋张辉郎需龙段小宇路浩
- 关键词：口蹄疫病毒绿色荧光蛋白
- B.abortus 544A和B.melitensis 16M多克隆抗体的制备及鉴定
- 2007年
- 目的制备高效价、高纯度的布鲁菌多克隆抗体,作为检测布鲁菌的诊断试剂。方法采用弗氏佐剂乳化抗原家兔背部皮下多点免疫,制备抗体,纯化后用SDS-PAGE进行鉴定,ELISA法检测抗体水平,紫外分光光度仪检测蛋白质含量,AlphaScreenRabbitIgGDetectionKit检测IgG含量,并计算纯度。结果SDS-PAGE结果显示多抗片段大小与预期相符,B.melitensis16M和B.abortus544A抗体效价分别为1∶25600和1∶51200,纯化后抗体蛋白含量分别为11·32和14·03mg/ml,IgG含量分别为10·45和13·12mg/ml,且纯度分别达到92·3%和93·5%。结论已获得高效价、高纯度的多克隆抗体IgG,为建立布鲁菌免疫检测方法奠定了基础。
- 唐景峰李晓艳王兴龙梅建军刘锴刘文森
- 关键词：布鲁菌多克隆抗体诊断试剂
- 新城疫病毒TL1株P、NP、L蛋白基因表达载体的构建及鉴定被引量：2
- 2007年
- 将新城疫病毒TL1株的P、NP、L基因通过RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM-Teasy载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI-neo上,命名为pCI-P、pCI-NP、pCI-L,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确.纯化后的重组质粒单独转染BHK-21细胞,经间接免疫荧光试验检测到了P、NP、L蛋白的表达.新城疫病毒TL1株的P、NP、L基因的克隆成功,为即将进行的新城疫病毒的反向遗传操作奠定了基础.
- 王学理李晓艳关洪玉任林柱刘锴殷小宇闫广谋王兴龙
- 关键词：新城疫病毒间接免疫荧光
- 口蹄疫病毒WFL株2C-P3-3′NCR片段的克隆及适于设计siRNA的序列分析
- 2007年
- 目的筛选出口蹄疫病毒(FMDV)基因组上适于设计siRNA的基因片段。方法以FMDV WFL株RNA为模板,用3′RACE法扩增出2C-P3-3′NCR序列,将PCR扩增片段克隆到pMD18-T载体上,转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,进行序列测定,并与参考毒株序列比较。结果扩增的基因片段大小为4033bp,其2C、P3和3′NCR序列的核苷酸序列与参考毒株的同源性分别为87·11%～94·23%、84·91%～96·66%和66·98%～82·35%,2C和P3与参考毒株的氨基酸同源性分别为94·97%～99·39%和91·84%～98·55%,WFL株P3基因的第1150～1270、1680～1840和2080～2490bp以及2C基因的第354～470bp范围内与参考毒株具有高度保守的特性。因此,可以依据siRNA设计原则,在这4个区域内筛选抑制效果好的siRNA。结论成功克隆了FMDV WFL株2C-P3-3′NCR基因的序列,并筛选出4个适于设计siRNA的基因区段。
- 任林柱孙大辉王兴龙刘锴王学理张辉
- 关键词：口蹄疫病毒小干扰RNA克隆
- 口蹄疫病毒WFL株ORF基因真核表达质粒的构建及病毒的拯救被引量：1
- 2008年
- 构建了FMDVWFL株ORF(open reading frame)基因真核表达质粒pEGFP-C1-A3I3,并进行了表达研究和共转染研究。结果发现,该质粒可以在BHK-21细胞中表达。将其与体外转录获得的FMDV RNA共转染BHK-21细胞后,用夹心ELISA、RT-PCR法以及电镜观察证明共转染后的细胞培养液中有病毒粒子,且病毒量高于单独转染RNA所得病毒量。证明用FMDV基因组真核表达质粒与其基因组体外转录RNA共转染敏感细胞可提高拯救病毒的数量。
- 任林柱王兴龙崔丽瑾张辉孟柯音
- 关键词：口蹄疫病毒真核表达反向遗传技术拯救
- 新城疫病毒TL1株P基因的克隆及序列分析
- 2007年
- 根据GenBank登陆的新城疫病毒P基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR技术对新城疫病毒内蒙古分离株TL1的P基因进行了扩增。将扩增产物提纯后克隆入pGEM-Teasy载体,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。测序拼接得出P基因的序列长度为1248bp,该基因的ORF总长为1188bp,编码395个氨基酸。与GenBank下载的12株参考毒株比较P基因编码区全核苷酸序列和氨基酸序列,发现TL1株与鹅源新城疫NA-1株核苷酸的同源性为99.8%,氨基酸的同源性为99.2%;与鹅源新城疫ZJ1株核苷酸的同源性为96.1%,氨基酸的同源性为95.5%,说明TL1株和与鹅源新城疫NA-1株、ZJ1株的同源性极高,它们三者亲缘关系较近,同属于基因VII型新城疫病毒。而与传统疫苗株LaSota核苷酸的同源性为83.4%,氨基酸的同源性81.8%,说明该毒株相对于经典的NDV在P基因上已发生了较大的变异。
- 王学理王兴龙李晓艳任林柱张辉闫广谋
- 关键词：新城疫病毒P基因
- 口蹄疫病毒WFL株基因组全长cDNA的克隆及序列分析被引量：3
- 2007年
- 根据口蹄疫病毒基因组的结构特点以及GenBank上公布的全序列,用DNAMAN分别设计了涵盖整个基因组序列的3对引物,从接种口蹄疫病毒WFL株的细胞培养液中提取了病毒基因组RNA,采用RT-PCR方法和RACE法分别扩增了3条基因片段,并将扩增片段分别与T载体连接,在体外分别进行了5'半分子和3'半分子的构建。最后将5'半分子和3'半分子连接成基因组全长cDNA分子。经PCR鉴定、酶切鉴定及全长cDNA测序,证实成功构建了口蹄疫病毒WFL株基因组全长cDNA分子。序列分析结果表明,供试口蹄疫病毒基因组全长为8155nt,5'UTR长1059nt;具有一个大的读码框,其核苷酸长度为6969nt,包括201aa的前导蛋白基因和2122aa的聚合蛋白基因;3'UTR长127nt,包括34nt的poly(A)。
- 任林柱王兴龙李莉李晓艳段小宇梅英武刘锴王学理
- 关键词：口蹄疫病毒基因组全长CDNA
- 布病胶体金免疫层析检测方法的建立被引量：17
- 2007年
- 目的建立诊断布病的胶体金免疫层析方法。方法以B.abortus 544A全菌免疫BALB/c小鼠,以杂交瘤细胞技术制备单抗,纯化后以胶体金标记,选择最佳反应模式组装试纸条,并对其进行鉴定。结果已筛选4B8、1G9、1C9和1E24株稳定分泌单抗的细胞株,以其单抗互相配对组合的试纸条均能检出B.abortus 544A菌。其中以1G9为包被抗体、4B8为金标抗体的试纸检测效果最佳,与以B.abortus 544A菌多抗为包被抗体、4B8单抗为金标抗体的试纸对比,检测结果一致,且不与其他菌发生交叉反应。对PCR检测为阳性的70份牛血清样品,两种试纸条检测结果的符合率均为100%。结论所建立的诊断布病的胶体金免疫层析法快速、简便、准确,有望用于布病的诊断。
- 唐景峰李晓艳王兴龙梅建军
- 关键词：布鲁菌病单克隆抗体
