辽宁省教育厅科学基金(05L142)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：辽宁医学院辽宁医学院附属第三医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 端粒酶上调与甲状腺鳞癌细胞增殖关系被引量：1
- 2010年
- 目的上调甲状腺鳞癌细胞(SW579)的人端粒酶催化亚单位(hTERT)表达,观察细胞增殖情况,检测端粒酶活性变化。方法应用酶切方法获得hTERT序列全长3 453 bp的cDNA片段,克隆入荧光蛋白质粒(pEGFP-N1),构建真核表达载体pEGFP-hTERT,转染SW579细胞中,观察细胞生长状态的变化,检测端粒酶活性。结果稳定转染pEGFP-hTERT的SW579细胞的增殖率为148%,比非转染组增加48%,比空质粒组增加45%,差异均有统计学意义(P<0.01);重组质粒转染组G1、S、G2/M期细胞比例分别为68.05%,27.66%和10.45%,与非转染组和空质粒组比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);重组质粒转染组增殖指数(PI)为38.11,明显高于空质粒组的14.22和非转染组的13.60,其端粒酶活性检测梯状条带增加,活性增强。结论上调人端粒酶表达,能够促进SW579细胞增殖。
- 张蕾田力李伟伟李鹏飞
- 关键词：端粒酶增殖
- 端粒酶启动子突变对EGFP启动效率影响
- 2010年
- 目的观察人端粒酶催化亚单位(hTERT)的突变启动子启动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)发光强度的变化情况。方法应用PCR引入突变方法获得hTERT上游序列长约300bp的启动子片段,包括单增强子(E-box)突变序列(2个);双E-box突变序列;单转录因子特异蛋白1(Sp1)结合位点突变序列(5个);Sp1结合位点全部(Sp1-5)突变序列,分别克隆入无启动子的绿色荧光蛋白EGFP的基因上游,稳转入SW579细胞中,观察细胞EGFP的发光强度。结果除了约-110bp的单Sp1突变对EGFP的启动效率影响不大之外,任何一种E-box或Sp1突变的启动子均显示启动效率不同程度的下降,其中双E-box突变的启动子和5个SP1结合位点均突变的启动子启动绿色荧光蛋白的表达强度明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论转染人端粒酶启动子突变基因,能够抑制SW579细胞EGFP的发光效率,证明人端粒酶启动子的E-box序列、SP1结合序列对启动子的启动效率密切相关,为hTERTp调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗提供了基础依据。
- 张蕾田力李伟伟李鹏飞
- 关键词：绿色荧光蛋白
- 人甲状腺鳞癌细胞中端粒酶启动子功能分析被引量：1
- 2011年
- 目的观察不同长度的人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子对启动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)能力的差异,评价启动子启动功能与长度的关系。方法克隆4段不同长度的端粒酶基因起始位点(ATG)上游序列长约2 068、1 135、333和142 bp的启动子片段,通过观察EGFP的荧光强度,确定启动效率。结果显微镜观察荧光亮度及荧光分光光度计检测荧光强度随着启动子长度的缩短而减弱,荧光强度由高至低依次为8.56,7.81,6.88,3.62。结论人端粒酶的表达强度及端粒酶的活性变化与其启动子的长度有关,而肿瘤细胞的端粒酶表达相对增强,可通过下调启动子活性,为肿瘤的靶向性基因治疗提供新思路。
- 张蕾金辉田力李伟伟李鹏飞
- 关键词：荧光蛋白SW579
