国家自然科学基金(30571096)
- 作品数：10 被引量：22H指数：4
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- 相关机构：东北农业大学中国农业科学院甜菜研究所东北林业大学更多>>
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- 甜菜硝酸还原酶活性分析及基因片段的克隆被引量：1
- 2008年
- 为了明确缺氮条件下甜菜NR的活性,用活体测定法检测了经缺氮胁迫不同时间后甜菜叶中NR活性.结果表明,随着缺氮处理时间的延长,甜菜叶中的NR活性逐渐降低,在缺氮处理1 h后,其活性下降较快.用50 mmol/L KNO3溶液处理的甜菜幼苗总RNA,通过RT-PCR分离得到了硝酸还原酶基因片段,长度为471 bp,Blast分析表明,其与Genbank中硝酸还原酶基因部分序列具有高度同源性.
- 张杰吴迪彭胜民姜月刘岩马凤鸣
- 关键词：甜菜硝酸还原酶活性基因克隆
- 甜菜硝酸还原酶全长基因的克隆及其在缺氮胁迫下表达与活性分析被引量：2
- 2008年
- 用50 mmol.L-1KNO3溶液处理的甜菜幼苗提取总RNA,通过RT-PCR法从甜菜总RNA中分离得到一个硝酸还原酶基因,其cDNA长2 760 bp,包含了完整的基因编码序列,与已公布的硝酸还原酶基因序列相似性达99%。同时利用活体测定法检测了经缺氮胁迫不同时间后甜菜叶中NR活性,并利用NR片段引物进行半定量RT-PCR,检测了基因的表达量。结果表明,随着缺氮处理时间的延长,甜菜叶中的NR活性随诱导时间增加活性逐渐降低,在缺氮处理1 h,其活性便有明显的降低;而NR的mRNA受缺氮胁迫下调表达,暗示着NR基因的表达与氮诱导相关。
- 张杰屈红军任静李雪婧张永强梁明马凤鸣
- 关键词：甜菜硝酸还原酶活性基因克隆RT-PCR
- 甜菜硝酸还原酶基因编码氨基酸偏好及功能预测分析
- 2011年
- 利用同源序列克隆方法从标准偏高糖型甜菜二倍体纯系Ty7中获得氮素诱导甜菜硝酸还原酶基因片段,通过RACE技术克隆基因全长序列;该基因ORF长度2718 bp,编码905个氨基酸,分子量大小为102kD(ExPaSy的分子量分析),等电点为6.12,含有147bp的5'UTR和382 bp的3'UTR,Genbank上的注册号为EU163265,甜菜硝酸还原酶基因编码多肽含有3个氧化还原功能区:钼辅因子功能区(eukary NR Moco;93-478),Fe-血红素结合区(Cyt-b5;535-608),FAD结合区(FAD binding 6;653-760)。利用网上的公共数据库和相关软件对该基因氨基酸偏好和编码蛋白的理化性质进行了分析,并对其功能进行了预测。上述研究结果为下一步基因的表达与调控研究奠定了基础。
- 丁广洲侯静马凤鸣
- 关键词：甜菜
- 不同类型甜菜品种根中Mg^(2+)-ATP酶活性和产质量的关系被引量：2
- 2009年
- 测定不同类型甜菜品种各生育时期根中Mg2+-ATP酶活性、可溶性总糖、可溶性蛋白含量和产量、含糖率。结果表明,在幼苗期和叶丛繁茂期,Mg2+-ATP活性呈先上升后下降趋势,从块根增长期直至糖分积累期,Mg2+-ATP酶的活性逐渐增强,并保持在全生育期最高水平。不同类型品种间存在差异,在各生育时期高糖型品种Mg2+-ATP酶活性较强。根中Mg2+-ATP酶活性与根中可溶性总糖呈正相关,与甜菜根的成熟进程正相关;Mg2+-ATP酶活性与可溶性蛋白质含量呈负相关,对可溶性糖的积累方面,二者的作用刚好相反。高糖型品种的可溶性总糖含量较高,相应的根中蛋白质含量很低,Mg2+-ATP酶活性较高。
- 赫磊王晔李丹石晓艳丁广洲马凤鸣
- 关键词：甜菜可溶性总糖可溶性蛋白
- 甜菜NADH-NR基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2011年
- 利用同源序列克隆方法从标准偏高糖型甜菜品种甜研7号(Ty7)中获得氮素诱导NADH-NR基因片段,通过RACE技术克隆NADH-NR基因全长序列。该基因ORF长度2 718 bp,编码905个氨基酸,包括147 bp的5'UTR和382 bp的3'UTR,GenBank上的注册号为EU163265,基因编码蛋白的等电点为6.12,推测分子量大小为102 kD,C端(778-891 aa)有一个跨膜区域。基因编码多肽含有3个氧化还原功能区:钼辅因子功能区(eukary NR Moco,93-478aa),Fe-血红素结合区(Cyt-b5,535-608 aa),FAD结合区(FAD binding 6,653-760 aa)。在甜研7号NR下游的氨基酸残基中含有NADH-NR特有的CGPPP-M基序,说明该蛋白以NADH为电子供体。通过比对,甜研7号的NADH-NR基因与菠菜NADH-NR基因同源性最高,为86.18%。经Southern杂交检验,甜研7号中NADH-NR基因以低拷贝数存在。经基因组克隆分析,甜研7号NADH-NR含有3个内含子,4个外显子。
- 丁广洲侯静陈丽马凤鸣陈连江
- 关键词：克隆
- 甜菜硝酸还原酶的研究进展被引量：5
- 2008年
- 施氮不当是影响甜菜产量、品质和生产效益的主要原因之一,而硝酸还原酶是氮素同化的关键酶,影响甜菜对氮吸收。文章分析了硝酸还原酶的特性及调控机理,阐述了甜菜硝酸还原酶的提取、纯化及一些基本特性、硝酸还原酶活力的测定方法和影响因素及其与产量质量的关系,并表述了结构基因表达调控的最新进展,这些研究内容对于提高氮肥利用率,提高甜菜的产量和品质具有重要意义。
- 陈志英马凤鸣
- 关键词：甜菜硝酸还原酶
- 甜菜基因组DNA的提取及Southern杂交分析被引量：6
- 2008年
- 分别采用常规CTAB法和SDS法提取甜菜基因组DNA,并将提取的DNA应用于Southern杂交分析,发现基因组DNA的质量对杂交信号有非常大的影响。常规CTAB法提取的DNA产生的Southern杂交信号,仅出现在高分子质量位置;SDS法提取的DNA产生的Southern杂交信号,在高分子质量和低分子质量位置均出现。SDS法提取的甜菜基因组DNA适于Southern杂交分析。
- 侯静马凤鸣陈胜勇丁广洲李彩凤
- 关键词：甜菜基因组DNASDS法SOUTHERN杂交
- 甜菜NADH-NR gDNA全长序列的克隆及酶切鉴定
- 2012年
- 为了研究甜菜NADH-NR gDNA的序列特征,从分子水平上为甜菜硝酸盐累积差异机理的研究做铺垫;利用二倍体甜菜品种‘甜研7号’,采用分步克隆方法,分别获得甜菜NADH-NR基因组DNA的3’端序列和5’端序列以及中间序列,再以3’端和5’端序列设计特异引物,克隆获得甜菜NADH-NR基因组DNA的全序列;结果表明,甜菜NADH-NR gDNA全长序列6346bp,经与先前获得的甜菜NADH-NR cDNA序列比对,甜菜NADH-NR gDNA含有3个内含子,4个外显子。内含子大小分别为197、1088、2343bp。甜菜NADH-NR gDNA的外显子序列与菠菜的同源性达到78%,但内含子序列在进化期间发生了较大分化,甜菜NADH-NR gDNA的内含子相对菠菜要大,两者也不处于同样的位点,甜菜NADH-NR gDNA的内含子靠近5'端较早出现,每个内含子大小均是菠菜的1.10～1.71倍。本研究首次从甜菜中克隆获得NADH-NR gDNA全长序列,揭示了其序列特征并将其与其他作物进行了比较分析,为进一步利用该基因开展甜菜硝酸盐含量的基因调控研究奠定了基础。
- 丁广洲侯静马凤鸣陈丽陈连江
- 关键词：甜菜GDNA克隆酶切鉴定
- 甜菜nia基因的克隆及不同氮素形态诱导的差异表达被引量：4
- 2011年
- 利用同源序列克隆方法从二倍体甜菜品种Ty7中获得氮素诱导nia基因片段,通过RACE技术克隆nia基因全长序列,该基因ORF长度2718bp,编码905个氨基酸,并已在GenBank上登录(EU163265),基因组中nia以低拷贝数存在。nia编码蛋白的等电点为6.12,推测分子量为102kD,以NADH为电子供体。为揭示不同氮素形态和处理对甜菜nia基因表达的影响,采用半定量PCR方法检测不同氮素形态诱导nia基因mRNA的表达,同时测定酶活力。结果表明,当铵态氮诱导nia基因时,低浓度的铵离子能促进基因的表达,过高浓度的铵离子抑制基因的表达。当硝态氮诱导nia基因时,随处理浓度的增加,nia的表达加强,呈正相关关系。用30mmolL–1硝态氮诱导4h后,nia基因表达达最高值,约在6h后,表达明显下降。
- 丁广洲侯静陈丽马凤鸣陈连江
- 关键词：基因表达
- RT-PCR克隆甜菜硝酸还原酶cDNA全长序列及分析被引量：4
- 2008年
- 根据GenBank中已公布的甜菜(Beta vulgaris)硝酸还原酶(nitrate reductase)基因序列(gb|ABW 05098.1|),设计引物,以50 mmol.L-1KNO3溶液处理的甜菜幼苗为材料,从总RNA中通过RT-PCR分离得到一个硝酸还原酶基因,其cDNA长2 760 bp,包含了完整的基因编码序列,与已公布的硝酸还原酶基因序列相似性达99%。Southern杂交分析表明,硝酸还原酶基因在甜菜基因组中可能以两个拷贝或低拷贝形式存在。根据其编码的氨基酸序列,利用生物信息学预测了其亚细胞定位和蛋白质的三级结构。
- 张杰彭胜民周波战晴晴张荣沭马凤鸣
- 关键词：甜菜硝酸还原酶基因克隆RT-PCR
