上海市卫生局科研基金(20090122)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
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- UbcH10基因沉默联合紫杉醇抑制NCI-H226细胞活性实验研究
- 目的:通过脂质体转染化学合成siRNA的方法在人肺鳞癌细胞株NCI-H226中沉默UbcH10基因,同时以紫杉醇处理细胞,观察基因沉默联合紫杉醇处理对NCI-H226细胞增殖活性及凋亡的影响。方法:化学合成针对UbcH1...
- 赵黎明王良哲娄丽蓉孙光远方正修清玉
- 关键词：UBCH10SIRNA紫杉醇凋亡
- UbcH10基因沉默联合紫杉醇抑制NCI-H226细胞活性实验研究
- 目的：通过脂质体转染化学合成siRNA的方法在人肺鳞癌细胞株NCI-H226中沉默UbcH 10基因,同时以紫杉醇处理细胞,观察基因沉默联合紫杉醇处理对NCI-H226细胞增殖活性及凋亡的影响.方法：化学合成针对UbcH...
- 赵黎明王良哲娄丽蓉孙光远方正修清玉
- 关键词：UBCH10SIRNA紫杉醇凋亡
- UbcH10基因沉默对肺癌NCI-H226细胞增殖及细胞周期的影响被引量：2
- 2012年
- 目的通过脂质体转染siRNA方法沉默人肺鳞癌细胞NCI-H226中UbcH10基因,观察基因沉默后细胞增殖活性的变化及其对细胞周期的影响。方法设计3条针对UbcH10基因CDS区不同位点的siRNA序列并构建shRNA重组质粒,脂质体法转染重组质粒至NCI-H226细胞。转染后48 h,RT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测细胞内UbcH10 mRNA及蛋白含量。使用有效siRNA序列转染细胞,转染后24、48 h CCK-8检测细胞活性。使用有效siRNA序列转染细胞,转染后48 h收集细胞,流式细胞术检测细胞周期。结果成功构建shRNA重组质粒并转染NCI-H226细胞。转染siRNA 48 h后,3组NCI-H226细胞中UbcH10基因的mRNA及蛋白含量均明显下降;其中2号siRNA序列(pshRNA2)的沉默效果最好,UbcH10基因剩余表达量为对照组的14%。使用pshRNA2转染NCI-H226细胞24、48 h,细胞增殖活性降低,与基因未干预组比较差异有统计学意义(P<0.05)。使用pshRNA2转染NCI-H226细胞48 h,细胞明显阻滞于G2期,与基因未干预组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 UbcH10基因沉默可显著抑制NCI-H226细胞增殖活性,并使肺癌细胞阻滞于细胞G2期。
- 赵黎明孙光远娄丽蓉王良哲方正修清玉
- 关键词：肺肿瘤小分子干扰RNA细胞增殖细胞周期
- UbcH10基因沉默联合紫杉醇干预对NCI-H226细胞增殖活性和凋亡的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察小干扰RNA(siRNA)介导的UbcH10基因沉默联合紫杉醇处理对人肺鳞癌细胞株NCI-H226细胞增殖活性和凋亡的影响。方法化学合成针对UbcH10基因的siRNA-UbcH10序列,脂质体转染siRNA至NCI-H226细胞(siRNA转染组),转染后24 h,采用Real-Time PCR和Western blotting分别检测UbcH10 mRNA和蛋白的表达水平,以未予任何转染细胞作为空白对照,以阴性序列转染细胞作为阴性对照。以紫杉醇(1μmol/L)处理siRNA转染及未转染NCI-H226细胞(siRNA+紫杉醇组和紫杉醇组),分别于转染后24、48 h收集细胞,MTT比色法检测细胞增殖;转染后24 h收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡;以未经紫杉醇处理的siRNA转染、阴性序列转染和未予转染的NCI-H226细胞作为siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组。结果Real-Time PCR和Western blotting检测结果显示:转染后24 h,siRNA转染组UbcH10 mRNA和蛋白的表达较空白对照组和阴性对照组显著下调(P<0.01)。MTT比色法检测结果显示,siRNA转染组细胞增殖抑制率显著高于紫杉醇组和对照组(P<0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞增殖抑制率显著高于siRNA转染组(P<0.05)。siRNA转染组细胞凋亡率显著高于紫杉醇组和对照组(P<0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞凋亡率显著高于siRNA转染组(P<0.05),紫杉醇组与对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 UbcH10基因沉默可显著增强NCI-H226细胞对于化疗药物紫杉醇的敏感性。
- 赵黎明王良哲娄丽蓉孙光远方正修清玉
- 关键词：小干扰RNA紫杉醇细胞增殖
