上海市重大科技攻关项目(11441901800)
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
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- 炎性因子对人胰腺癌PaTu8988细胞NF-KB及Hedgehog通路成员表达的影响被引量：5
- 2015年
- 目的探讨肿瘤坏死因子仅（TNF-α）和白介素lp（IL-1β）对人胰腺癌PaTu8988细胞核因子KB（NF-KB）及Hedgehog（HH）通路成员Shh、SMO、Glil、SuFu基因表达的影响。方法分别应用TNF-α和IL-1β刺激人胰腺癌PaTu8988细胞48h，以未处理细胞作为对照组。采用实时定量RT-PER和蛋白质印迹法检测各组细胞NF-KB及Shh、SMO、Glil、SuFu的mRNA和蛋白表达，采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡。结果TNF-α刺激组、IL-18刺激组、对照组PaTu8988细胞的NF-KBmRNA表达量分另0为9．92±0．78、7．74±0．32、1．01±0．08；GlilmRNA为7．25±0．45、5．74±0．33、1．00±0．06；ShhmRNA为3．60±0．36、4．33±0．45、1．00±0．04；SMOmRNA为1．03±0．15、1．07±0．16、1．01±0．06；SuFumRNA为0．88±0．14、0．96±0．13、1．01±0．05。其中TNF-α刺激组、IL-1β刺激组的NF-KB、Glil、ShhmRNA表达量均较对照组显著增加，差异有统计学意义（P值〈0．05或〈0．01）。两刺激组的NF-KB、Glil、Shh蛋白表达量也较对照组增高，差异具有统计学意义（P值均〈0．05）。TNF-α刺激组、IL-1β刺激组、对照组PaTu8988细胞凋亡率分别为（17．40±2．87）％、（11．05±1．34）％、（49．90±2．96）％，TNF-α刺激组、IL-1β刺激组的细胞凋亡率均较对照组显著减少，差异有统计学意义（P值均〈0．01）。结论TNF-α和IL-1β可激活PaTu8988细胞的NF-KB和HH信号通路的Shh、Glil基因的表达，减少细胞的凋亡。
- 王玉琼丁佳寅诸娴吴红玉金晶满晓华高军李兆申
- 关键词：胰腺肿瘤信号传导NF-KB
- 肽核酸钳制-PCR/K-ras突变检测方法在结直肠癌组织中的诊断应用
- 2013年
- 目的确定本实验室建立的肽核酸钳制(PNA)-PCR/K-ras突变检测方法的阳性判断标准,并评价其对结直肠癌组织的诊断价值。方法将含K-ras基因12密码子突变的质粒和野生质粒以不同比例(突变/总体:0,1/3 200,1/1600,1/800,1/400,1/200,1/100)混合作为标准样品,独立配制6个批次并分别进行PNA-PCR/K-ras突变检测,收集Kras突变CT值及K-ras总体CT值,计算ΔCT值(突变CT值-总体CT值),采用ROC曲线分析突变CT值和ΔCT值诊断K-ras突变的最适Cut-off值,联合两者最适Cut-off值,设定该方法的最终阳性判断标准。分别采用该方法和直接测序法对35例结直肠癌组织及对应癌旁组织进行K-ras突变检测并比较分析。结果突变模板浓度为1/800及以上的标准样品突变CT值和ΔCT值与阴性标准品之间差异存在统计学意义(P<0.05);突变CT值和ΔCT值的最适Cut-off值分别为41.7和15.4。最终阳性判断标准为突变CT值≤41.7或ΔCT值≤15.4,对应的ROC曲线下面积为0.955(P=0.001),以此判断标准,各标准样品(0,1/3 200,1/1 600,1/800,1/400,1/200,1/100)的阳性检测率分别为0%、66.7%、83.3%、100%、100%、100%、100%,检测下限为1/800。在结直肠癌及癌旁组织标本中,该方法阳性检测率为45.7%(32/70),与直接测序法(18.6%,13/70)比较差异具有统计学意义(P=0.000)。结论 PNA-PCR/K-ras突变检测方法具有较高的检测灵敏度,在结直肠癌组织样本中具有较直接测序法更高的阳性检出率。
- 李泉江胡佳佳金晶吴洪玉满晓华朱玲高军李兆申
- 关键词：K-RAS基因突变
- 大黄对急性坏死性胰腺炎大鼠炎性介质表达的影响被引量：10
- 2011年
- 目的观察中药生大黄空肠灌注对急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠胰腺组织炎性介质表达的影响。方法sD大鼠33只，按完全随机法分为对照组、ANP组及生大黄治疗组，每组11只。胰胆管逆行注射3％牛磺胆酸钠溶液方法制备ANP模型，同时做空肠造瘘。生大黄组于造模后空肠灌入1g／ml生大黄煎液1ml／kg体重。造模36h后处死大鼠。取血测定淀粉酶活性；取部分胰腺组织常规病理检查；取部分胰腺组织抽提总mRNA，采用实时PCR方法测定胰腺组织IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达。结果造模后大鼠血淀粉酶活性明显升高，胰腺组织大片坏死、出血，大量炎细胞浸润，符合ANP改变。对照组胰腺组织IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达量分别为0．29±0．13、0．35±0．15、1．09±0．32：ANP组分别为2．23±0．49、2．26±0．51、5．24±0．59，均较对照组显著增加（P值均〈0．05）；生大黄组分别为0．974-0．30、1．02±0．34、2．59±0．36，均较ANP组显著减少，但仍显著高于对照组（P值均〈0．05）。结论生大黄空肠灌注治疗ANP大鼠可减少胰腺组织IL-6、IL-8、TNF-αmRNA的表达，从而减轻胰腺的病理损伤。
- 金晶高军吕顺莉刘枫龚燕芳满晓华吴红玉李兆申
- 关键词：胰腺炎急性坏死性白细胞介素6白细胞介素8
- 人胰腺癌编码SUFU蛋白的新剪接体
- 2013年
- 目的分析人胰腺癌组织和细胞中Hedgehog信号通路主要成员SUFU蛋白的剪接体。方法用反转录和3’cDNA末端快速扩增（3’RACE）法扩增suppresseroffused（SUFU）片段，测序发现一个新的外显子，应用RT—PCR方法扩增全长含新外显子的SUFU（nSUFU）。采用脂质体法将nSUFU及SUFU转染SWl990细胞，应用蛋白质印迹法检测SWl990细胞及胰腺癌组织新剪接体编码的蛋白质的表达。结果通过3’RACE法的第二轮巢式PCR扩增产物约600bp，经测序并将其序列与NCBI网站Blast序列对比分析发现，在SUFUmRNAisoforml（NM_016169．3）的第10外显子和第11外显子之间插入了一个长为126bp的新外显子。通过对SWl990细胞的验证，包含新外显子的完整的新剪接体片段长约1400bp。转染nSUFU的SWl990细胞强表达nSUFU蛋白，胰腺癌组织既表达SUFU蛋白，又表达nSUFU蛋白。结论人类胰腺癌组织和细胞中存在一种新的可以编码SUFU蛋白的剪接体。
- 徐清满晓华高军李兆申龚燕芳吴红玉金晶
- 关键词：胰腺肿瘤HEDGEHOG信号通路剪接体SUFU
- 肿瘤标记物在胰腺癌早期诊断中的应用被引量：3
- 2014年
- 胰腺癌是一种死亡率极高的恶性肿瘤,早期症状缺乏特异性。当疑似此病时,多数已处于晚期,所以提高胰腺癌的早期诊断率尤为重要。最近几年,许多研究聚焦于胰腺癌早期阶段存在的相关标记物,包括肿瘤组织中的标记物、体液中的肿瘤标记物和粪便标记物。本文就目前胰腺癌肿瘤标记物的诊断应用研究做一综述。
- 丁佳寅李泉江姜瀚高军李兆申
- 关键词：胰腺肿瘤肿瘤标记体液粪便
- 胰腺癌高危人群外周血K-ras12密码子和K-ras13密码子突变的定量检测和意义
- 2013年
- 目的探讨胰腺癌高危人群外周血K—rasl2密码子和K—rasl3密码子突变量检测的临床价值。方法收集2010年5月至2011年11月有胰腺癌高危因素且诊断明确者160例，其中最终确诊胰腺癌36例，慢性胰腺炎（CP）36例，自身免疫性胰腺炎（AIP）6例，其他恶性肿瘤16例，胰腺良性肿瘤13例，胆总管结石13例，其他良性疾病40例。采集所有入选者的空腹外周静脉血，以肽核酸钳制实时荧光定量PCR法检测K—rasl2密码子和Krasl3密码子突变量。两组间突变量的比较采用Mann—WhitneyU检验，率的比较采用卡方检验。根据ROC曲线计算K—rasl2和K—rasl3突变阳性判定值和突变阳性率。结果胰腺癌组K—rasl2密码子突变量[i154（2207）]与其他良性疾病组[-476（973）]、CP组[-446（808）]、胆总管结石组[357（568）]比较差异均有统计学意义（u=502、446、117，P均d0．05）。胰腺癌组Krasl3密码子突变量与其他良性疾病组、CP组、胆总管结石组、AIP组、胰腺良性肿瘤组、其他恶性肿瘤组比较差异均无统计学意义（P均〉0．05）。K—rasl2密码子突变量〉i000拷贝为K—rasl2突变阳性判定值时，胰腺癌和非胰腺癌的K—rasl2突变阳性率分别为55．6％（20／s6）和25．0％（31／124），以K—rasl2突变鉴别胰腺癌和非胰腺癌的ROC曲线下面积为0．664，具鉴别诊断价值（P=0．003）。以K—rasl3突变鉴别胰腺癌与非胰腺癌的ROC曲线下面积为0．522，无鉴别诊断价值（P=0．695）。吸烟者和不吸烟者的K-ram3密码子突变量[分别为943（1510）和571（964）]差异有统计学意义（u=1779，P=0．010）。结论外周血Krasl2突变或可用于胰腺癌的筛查。
- 朱艳平王丽华高军李泉江金晶李兆申
- 关键词：RAS密码子点突变流行病学研究
- 胰腺癌及相关胰腺疾病组织中K-ras12、13密码子突变的检测及其临床诊断价值被引量：3
- 2012年
- 目的研究K-ras基因第12、13位密码子突变在胰腺导管腺癌及相关胰腺疾病组织中的定量检测及其临床意义。方法收集经手术切除的130例（胰腺导管腺癌105例，胰腺腺鳞癌8例，胰腺黏液腺癌2例，内分泌癌3例，十二指肠及壶腹部恶性肿瘤6例，胰腺良性疾病6例）有明确病理诊断的组织标本及临床资料，应用双荧光探针联合肽核酸钳制实时定量PCR方法检测组织中K-ras基因第12、13密码子的突变量，以突变量〉100拷贝为阳性计算突变阳性率。结果胰腺导管腺癌、腺鳞癌、黏液腺癌、内分泌癌、十二指肠及壶腹部恶性肿瘤、胰腺良性疾病的K-ras12密码子突变量的中位数及四分位数分别为4062（495，10800）、238（45，8420）、15（9，21）、3（3，16）、2283（73，5037）和21（8，56）；突变阳性率分别为84．8％（89／105）、50．0％（4／8）、0、0、66．7％（4／6）和16．7％（1／6）。胰腺导管腺癌的K-ras12密码子突变量及阳性率与胰腺腺鳞癌、十二指肠及壶腹部恶性肿瘤差异无统计学意义，而较胰腺黏液腺癌、内分泌癌、胰腺良性疾病显著增加（P值均〈0．05）。通过接受者操作特征（ROC）曲线分析，胰腺导管腺癌K-ras12密码子突变的曲线下面积为0．727，诊断胰腺导管腺癌的敏感性及特异性分别为84．8％、64．0％。胰腺导管腺癌的K-ras基因第12密码子突变量与患者生存期显著相关。胰腺导管腺癌的K-ras13密码子突变量及阳性率与其他胰腺疾病的差异无统计学意义。结论K-ras12密码子基因突变对胰腺癌有较好的鉴别诊断及患者预后判断价值。
- 朱艳平李泉江高军顾俊俊黄浩杰李兆申
- 关键词：K-RAS基因密码子
- K-ras基因突变在胰腺癌诊断及发病高危因素中的研究现状
- 2012年
- 胰腺癌早期症状及诊断缺乏特异性,治疗效果不佳。手术切除是现阶段唯一能治愈胰腺癌的手段,但疑诊此病时,多数已处于进展期,肿瘤已转移或超出手术切除范围,所以预防胰腺癌的发生和提高早期诊断率尤为重要。胰腺癌的高危因素包括男性、高龄、长期吸烟、酗酒、饮咖啡、糖尿病、慢性胰腺炎、遗传因素、肥胖、非家族性高血脂、高热量饮食、职业暴露等。多项研究表明胰腺癌的发生与K-ras基因突变密切相关,且在具有高易感性患者中k-ras突变率很高。本文就检测K-ras突变对胰腺癌的诊断价值、癌前病变中的K-ras突变情况及高危因素与K-ras突变发生的关系作一综述。
- 朱艳平高军李兆申
- 关键词：K-RAS基因突变胰腺肿瘤
