四川省应用基础研究计划项目(04JY029-002-7)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 表达乙肝病毒preS2S蛋白的荷瘤小鼠模型的建立
- 2008年
- 目的:建立能表达乙肝病毒(hepatitis Bvirus,HBV)preS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,为研究HBV核酸疫苗的体内CTL应答及免疫治疗作用提供简便易行的研究模型。方法:以免疫印迹法验证SP2/0-S2S细胞中有HBVpreS2S抗原的稳定表达,将SP2/0-S2S细胞种植到BALB/c小鼠胁部皮下(荷瘤),观察能否生长成瘤,以及成瘤的时间、肿瘤大小和荷瘤后小鼠的生存时间;以免疫组织化学法检测小鼠肿瘤组织HBVpreS2S抗原的表达。以不表达preS2S抗原蛋白的SP2/0-CMV细胞荷瘤小鼠作为阴性对照。结果:荷瘤后3天～1周,SP2/0-S2S细胞可在小鼠皮下形成实体肿瘤,成瘤率为100%,肿瘤细胞中有preS2S抗原表达,荷瘤后小鼠的平均生存时间为16±1天;与不表达preS2S抗原蛋白的SP2/0-CMV细胞荷瘤小鼠相比,成瘤率、成瘤时间、肿瘤大小及生存时间差异。结论:建立了能表达HBVpreS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,可用于HBV核酸疫苗的体内CTL应答及免疫治疗作用的实验研究。同时也建立了不表达preS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,可用作阴性对照。
- 何芳唐红刘丽刘聪赵连三
- 关键词：乙型肝炎病毒BALB/C小鼠
- 乙肝病毒核酸疫苗诱导BALB/c小鼠特异性免疫应答
- 2008年
- 目的观察含乙肝病毒(hepatitis Bvirus,HBV)preS2S基因的核酸疫苗免疫小鼠后的特异性免疫应答。方法将BALB/c小鼠随机分为4组分别肌肉接种pCMV-S2S、乙肝表面抗原(HBsAg)、空载质粒(pCMV)及生理盐水(NS)。免疫组织化学法检测接种局部组织preS2S抗原的表达,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL活性,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体Anti-HBs。结果pCMV-S2S组小鼠肌肉细胞中有较多量的preS2S蛋白表达,其它小鼠肌肉细胞中均未检出preS2S蛋白表达。pCMV-S2S组小鼠CTL活性为(32.10±1.93)%,明显高于各对照组(P<0.05)。pCMV-S2S组小鼠8周后Anti-HBs阳性率最高为42.9%。HBsAg组小鼠4周时Anti-HBs阳性率即达到100%。pCMV组及NS组小鼠血清中均未检测出Anti-HBs。结论乙肝核酸疫苗pCMV-S2S能在小鼠体内表达preS2S蛋白,并能在小鼠体内诱生较强的特异性CTL活性,也能诱生一定程度的特异性体液免疫应答。
- 何芳唐红刘丽刘聪赵连三
- 关键词：核酸疫苗免疫应答
- 乙肝核酸疫苗接种小鼠后特异性抗原表达及CTL应答的动态观察被引量：1
- 2008年
- 目的:观察乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)核酸疫苗pCMV-S2S免疫小鼠后,接种局部HBV preS2S抗原的表达及特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答的动态变化。方法:将pCMV-S2S接种到BALB/c小鼠胫前肌,分别以免疫组化法检测接种局部肌肉HBV preS2S抗原表达的动态变化,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL活性的动态变化。结果:小鼠接种pCMV-S2S后,局部肌肉细胞3d后已有少量目的抗原HBV preS2S蛋白表达,4周时表达最强,至6月时仍可检出有preS2S蛋白表达,但表达强度明显减弱。小鼠接种pCMV-S2S3天后,特异性CTL活性平均值最高为21·67%,12周时CTL活性平均值最高为35·14%,6月时仍可检出较弱的CTL活性。结论:HBV核酸疫苗pCMV-S2S能在小鼠体内持续表达特异性抗原及诱生特异性CTL应答。
- 何芳唐红刘丽刘聪赵连三
- 关键词：乙型肝炎病毒核酸疫苗抗原表达细胞毒性T淋巴细胞
- 丙肝病毒核心蛋白抑制乙肝病毒转录与复制的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的观察丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)对乙型肝炎病毒(HBV)基因转录和病毒复制的影响。方法将不同剂量的HCVcore表达质粒(pNKF-HC Vcore)转染HepG2.2.15细胞。以空载质粒(pNKF)转染HepG2.2.15细胞作为阳性对照,转染HepG2细胞作为阴性对照。以Northern吸印杂交检测HBV mRNA的转录水平,以Southern吸印杂交检测HBV复制中间体DNA的复制水平。结果20μg pNKF-HCV core转染HepG2.2.15细胞后,可使细胞中HBV mRNA转录水平及HBV复制中间体DNA复制水平明显降低,抑制率分别为51.9%及36.5%。10μg及15μg pNKF-HCV core较pNKF转染的HepG2.2.15细胞的HBV mRNA信号与HBV复制中间体DNA检出信号强度无显著差异。结论HCV核心蛋白达到一定的剂量后能够在一定程度上抑制HBV的转录与复制。
- 何芳唐红刘丽王甦刘凤君刘聪
- 关键词：乙型肝炎病毒转录丙型肝炎病毒核心蛋白
