广东省医学科学技术研究基金(A2003222)
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
- 相关作者：陈伟李刚卢建溪朱明芬李莉更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”广东省教育厅“千百十工程”优秀人才培养基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种新的乙型肝炎病毒全基因组克隆技术的建立被引量：2
- 2006年
- 目的建立一种乙型肝炎病毒(HBV)全基因组扩增及克隆的新方法。方法设计含SalⅠ、NotⅠ酶切位点的引物,用一片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切后将PCR产物克隆入pBlueScript-(SK-)载体,进行HBV全基因组序列测定。结果用此方法成功获得35例HBV全基因组DNA序列。同时以重组质粒为模板进行敏感性和保真性测定,其敏感性为102个初始模板,核苷酸的人为突变率为1.6bp/kb。结论此方法可用于大规模HBV全基因组扩增和序列分析,为HBV的基础和临床研究提供了一种新方法。
- 李莉卢建溪谢冬英徐启桓朱明芬陈伟李刚
- 关键词：基因组聚合酶链反应
- 两种HBV全基因组克隆方法的比较
- 2008年
- 目的通过比较血清HBVDNA水平对一片段PCR法和两片段PCR法这两种不同方法的HBV全基因组克隆效率的影响,选择出合适的HBV全基因组克隆技术,供后续的HBV的基础和临床研究。方法采集了乙型肝炎患者85份血清,分别用本研究建立的一片段PCR法及两片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切鉴定后将PCR产物克隆入载体,进行HBV全基因组序列测定。同时用实时荧光定量PCR法检测上述85份血清的HBVDNA滴度。结果本研究建立的一片段法扩增成功需要的血清HBVDNA浓度高于二片段法,两种方法扩增的效率比较为一片段方法扩增的成功率低于二片段方法(P<0.05)。一片段方法的保真性:核苷酸的人为突变率为1.13bp/kb。灵敏度:为102个初始模板,大于103的重组质粒DNA80%可以成功扩增,浓度低于该值的扩增效率比较低。结论血清HBVDNA水平对两种扩增方法的成功率有一定影响,滴度高低是选择合适PCR扩增方法的依据。HBVDNA滴度大于103copies/ml的样本,可选用一片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术,而对HBVDNA滴度小于103copies/ml样本,则可选用两片段法的全基因组扩增、克隆技术。本研究建立的一片段PCR法扩增HBV全基因组克隆的技术是一种值得推荐的好方法,但需进一步优化。
- 卢建溪李莉朱明芬陈伟李刚
- 关键词：基因组聚合酶链反应
- 阿德福韦治疗慢性乙型肝炎过程中HBV DNA及丙氨酸氨基转移酶水平的变化
- 2008年
- 目的研究新药阿德福韦（ADV）治疗慢性乙型肝炎过程中HBV DNA及丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平的变化情况，从而指导临床用药。方法采集16例慢性乙型肝炎（CHB）患者用ADV治疗前血清，即基线（BL）血清，以及持续服药12、16、28．40、48、52、68、80、92周共10个时段的系列血清。用荧光定量PCR法检测其HBV DNA的水平。用全自动生化仪检测其ALT的水平。结果从BL到48周时段，HBV DNA中位数显著下降；在52周，HBV DNA中位数出现反弹；从52至92周时段，HBV DNA中位数再次下降。16例不同时段血清ALT中位数的变化与HBV DNA中位数变化一致。ADV治疗12周时，HBV DNA中位数较基线下降了2．34lg拷贝／ml，无HBV DNA阴转、HBeAg血清学转换；治疗28周时，HBV DNA中位数较基线下降了2．91lg拷贝／ml，有2例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗40．48周时，HBV DNA中位数较基线分别显著下降了3．83、3．95lg拷贝／ml，有4例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗52周时。HBV DNA中位数较基线下降了2．90lg拷贝／ml，出现反弹，但仍有4例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗68、80、92周时，HBV DNA中位数较基线显著下降了3．51、3．81、4．01lg拷贝／ml，分别有4、6、6例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换。16例患者接受ADV治疗的两年中，有9例患者分别从16、28、40周开始HBV DNA的水平显著下降；7例患者HBV DNA的水平下降但不显著。结论阿德福韦治疗慢性乙型肝炎过程中，HBV DNA及ALT中位数的变化情况基本一致。52周时段HBV DNA水平出现反弹。提示52周可能是抗病毒的关键时段。
- 卢建溪王强陈文思谢东英徐启桓陆伟伦李莉朱明芬陈伟李刚
- 关键词：肝炎乙型慢性阿德福韦聚合酶链反应
- 血清乙型肝炎病毒DNA水平对HBV全基因组克隆效率的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:通过比较血清HBV DNA水平对一片段PCR法和两片段PCR法这两种不同方法的HBV全基因组克隆效率的影响,选择出合适的HBV全基因组克隆技术,供后续的HBV的基础和临床研究。方法:采集了慢性乙型肝炎(CHB)患者85份血清,分别用本研究建立的一片段PCR法及两片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切鉴定后将PCR产物克隆入载体,进行HBV全基因组序列测定。同时用实时荧光定量PCR法检测上述85份血清的HBV DNA滴度。结果:本研究建立的一片段PCR法扩增成功需要的血清HBV DNA浓度高于两片段PCR法,两种方法扩增的效率比较为:一片段PCR法扩增的阳性率低于两片段PCR法(P<0.01)。一片段PCR法的保真性和灵敏度分析发现:保真性:核苷酸的人为突变率为1.13bp/kb;灵敏度:为102个初始模板。浓度大于103的重组质粒DNA80%可以成功扩增,浓度低于该值的扩增效率比较低。结论:血清HBV DNA水平对两种扩增方法的阳性率有一定影响,滴度高低是选择合适PCR扩增方法的依据。HBV DNA滴度大于106copies/L的样本,可选用一片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术,而对HBV DNA滴度小于106copies/L样本,则可选用两片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术。本研究建立的一片段PCR法扩增HBV全基因组克隆的技术是一种值得推荐的好方法,但还需进一步优化。
- 卢建溪钱师宇李莉朱明芬陈伟李刚
- 关键词：肝炎病毒乙型慢性乙型肝炎
- IL-10-1082位点单核苷酸多态性与我国胃癌的关系被引量：5
- 2008年
- 目的研究白细胞介素10(IL-10)基因-1082位点单核苷酸多态性在我国胃癌高发区和低发区普通人群和胃癌患者中的分布,并探讨该位点基因多态性与我国胃癌的关系。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测年龄和性别匹配的广东省104例普通人群及104例胃癌患者和陕西省普通人群和胃癌患者各102例的IL-10-1082位点单核苷酸多态性。采用ELISA检测血清幽门螺杆菌(Hp)IgG。结果IL-10-1082位点A/A、A/G、G/G三种基因型在本研究人群中的分布频率为86.7%、10.7%和2.4%。在胃癌低发区,胃癌患者携带IL-10-1082G*的频率明显高于普通人群(14.4%vs7.7%,χ2=4.02,P<0.05,OR=1.01,95%CI=1.08～3.10),IL-10-1082G*基因型增加Hp感染后胃癌发生的危险性(χ2=5.36,P<0.05,OR=6.0,95%CI=1.23～17.52);在胃癌高发区,胃癌患者IL-10-1082G*基因型频率与对照组无明显差异(12.7%vs16.6%,P>0.05)。两地区胃癌人群IL-10-1082G*基因型频率无显著差异(12.7%vs14.4%,χ2=0.13,P>0.05);两地区普通人群中,高发区IL-10-1082G*基因型频率明显高于低发区(16.6%vs7.7%,χ2=4.27,P<0.05,OR=1.29,95%CI=1.12～6.11)。结论IL-10-1082G等位基因增加Hp感染后胃癌发生的危险性,IL-10-1082位点单核苷酸多态性可能与我国汉族人群胃癌发生有关。
- 周韶璋朱伟良李明英李虹义张积仁
- 关键词：单核苷酸多态性聚合酶链反应-限制性片段长度多态性ELISA检测基因型频率胃癌高发区
- 阿德福韦治疗过程中乙型肝炎病毒核酸序列的变化被引量：8
- 2006年
- 目的研究新药阿德福韦抗病毒过程中乙型肝炎病毒(HBV)核酸序列的变化情况,以有效的指导临床用药。方法选取4例服用阿德福韦患者的系列血清,包括用药前血清及用药后半年(28周)、1年(52周)、2年(92周) 血清,将4例系列血清用一片段聚合酶链反应法进行全基因组克隆、测序;并对测序结果进行基因型及血清型分析、全基因序列同源性及差异性比较、HBV各编码区氨基酸变异等生物信息学分析。结果 4例系列血清的基因型及血清型分析为:1例为C基因型／adrq+血清型,1例为B、C混合基因型／adw2、adrq+昆合血清型,2例为B基因型／adw2血清型。全基因序列同源性比较情况为:同例血清组内序列同源性为97．5％-99．8％;B、C混合型感染者其组内同源性为 90．9％-99．3％。不同例血清组间序列同源性为90．6％-100％。各编码区氨基酸变异情况为:治疗52周时碱基突变数明显高于28周和92周。存在热点突变位点。在P基因的逆转录酶区,有几处非常有意义的有义突变,很可能会影响逆转录酶的活性,而使HBV对阿德福韦产生耐药逃逸。结论 HBV全基因组序列分析发现了几处有意义的氨基酸变异,这可能与HBV对阿德福韦的耐药逃逸有关。
- 卢建溪谢冬英徐启桓朱明芬陈伟李莉李刚
- 关键词：阿德福韦酯
