国家自然科学基金(30571002)
- 作品数：2 被引量：16H指数：2
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- 分离植物目的基因全长cDNA和启动子的新方法——快速定位转录起始位点(RITIS)被引量：3
- 2006年
- 启动子是调控外源基因在植物体内表达的“开关”。随着植物转基因技术的广泛应用,无论是基础研究还是应用研究,人们希望能够充分利用启动子来准确控制外源基因在植物体内的表达,使目的基因的“开”和“关”、表达的“多”和“少”、在“何地”和“何时”表达等,能够听从人的指挥,以实现植物育种的分子设计。因此,快速分离和鉴定植物体内各种特异启动子已经成为植物基因工程研究的热点和难点。本文在互补末端连接反向PCR(CELI-PCR)技术基础上建立起一种快速分离目的基因全长cDNA和启动子序列的新方法。该方法利用CELI-PCR进行染色体连续步移,获取足够长的目的基因及其上游基因组DNA序列,再根据转录起始位点是目的基因转录本和启动子的分界点,其下游转录本中的外显子可通过RT-PCR扩增,而上游启动子序列则不能被RT-PCR扩增这一特点,借助RT-PCR进行cDNA连续步移,直到获得全长cDNA,确定启动子基因5'非翻译区的位置,进而精确定位转录起始位点。从而获取目的基因准确的启动子序列和全长cDNA序列。因此,建立在CELI-PCR基础上的RITIS技术,可绕过繁琐的构建cDNA库和5'-RACE等方法快速分离目的基因全长cDNA和启动子序列。
- 冯丽任茂智罗洪发何光华
- 关键词：启动子全长CDNA转录起始位点
- 一个水稻披叶突变体的遗传分析和基因定位被引量：13
- 2007年
- 在杂交育种后代中,发现了一个叶片披垂的突变体,暂命名为dl(t)。通过两年观察,表现稳定遗传。以该突变体为父本,Y2B和缙香2B分别为母本配制杂交组合,F2遗传分析表明,该披叶性状由一对隐性基因控制。利用突变体与Y2B杂交得到的F2代群体进行基因定位,发现dl(t)基因位于第3染色体短臂上标记RM6038和RM5347之间,遗传距离分别为3.99cM和0.94cM。进一步在两标记之间发展新的分子标记,将该基因定位在RM6038和RM7576之间,分别相距3.99cM和0.47cM,且与RM1324共分离。这一结果表明该基因可能与已报道的水稻披叶突变基因dl(drooping leaf)等位。但该披叶突变体除叶片表现披垂外,其他性状与所有已报道的dl等位基因都不同,特别是花器官性状发育正常,这显然与已有报道的dl等位基因不同。
- 王楠赵芳明凌英华钟秉强杨正林李云峰杨国华何光华
- 关键词：水稻SSR标记
