江苏省滩涂生物资源与环境保护重点建设实验室开放基金(JLCBE08002)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 水牛睾丸特异乳酸脱氢酶-C基因选择性剪接体的克隆与序列分析
- 2011年
- 为了克隆水牛睾丸特异乳酸脱氢酶-C(LDH-C)基因选择性剪接体,试验采用RT-PCR方法从水牛睾丸组织中克隆睾丸特异LDH-C基因的cDNA序列,发现1种LDH-C剪接体。根据LDH-C基因在进化上的保守性,参照普通牛LDH-C基因结构分析了水牛LDH-C基因的选择性剪接体的结构。结果表明:该剪接体缺失第7个外显子,因为LDH-C4酶的NAD+结合结构域由LDH-C的外显子2～4编码,酶的活性中心由外显子4编码,所以剪接体包含完整酶的NAD+结合结构域和酶的活性中心。对水牛睾丸组织LDH同工酶的电泳分析,未检测到潜在的LDH-C剪接体的表达,推测睾丸组织LDH-C选择性剪接的功能是调控该基因在睾丸中表达的方式之一。
- 洪键石云李明梅陆晓东郑玉才
- 关键词：水牛睾丸
- 水牛睾丸特异LDHC基因的原核表达及生物学活性研究
- 2011年
- 目的:克隆水牛睾丸特异Ldhc基因全长在大肠杆菌中原核表达,研究其生物学活性。方法:以水牛睾丸组织为材料提取总RNA,RT-PCR扩增Ldhc cDNA,PCR获得水牛全长Ldhc基因;连接pET-32b构建表达质粒pET-32b-Ldhc;转化BL21(DE3)大肠杆菌,IPTG诱导表达并利用SDS-PAGE分析。体外Ni离子柱纯化目的蛋白,Western印迹鉴定其抗体结合活性,同工酶谱鉴定其生物学活性。结果:成功制备了表达质粒pET-32b-Ldhc;IPTG诱导得到56kDa目的蛋白;Ni柱纯化获得纯度90%以上的蛋白;Western印迹显示目的蛋白具有特异的抗体结合活性;同工酶活性染色证明其具有乳酸脱氢酶活性。结论:试验成功制备了水牛睾丸LDH-C4蛋白,并初步验证了其生物学活性,为我们进一步探讨LDH-C4的功能及免疫节育疫苗的制备等奠定了基础。
- 洪键石云吴生才王加连刘忠权
- 关键词：原核表达生物学活性
- 睾丸特异乳酸脱氢酶-C的研究和应用进展
- 2009年
- 睾丸特异乳酸脱氢酶-C在酶学性质、免疫特性等方面不同于其他类型的LDH同工酶(LDH1～LDH5),并且在动物生殖中可能发挥重要作用,因此有关其研究在生物化学、基因进化、免疫节育、突变监测等领域长期以来一直引起研究人员的广泛关注,并且近年来不断有新的发现和进展。
- 洪键郑玉才石云
- 关键词：睾丸基因
