国家自然科学基金(30972124)
- 作品数：8 被引量：53H指数：4
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- 毕赤酵母优化表达外源蛋白策略
- 毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是一种异源蛋白表达的理想系统,但目前并非所有的外源蛋白都能在毕赤酵母中成功高效表达,不同的蛋白表现为不同表达水平、生物活性及稳定性。从遗传因素和表达条件综述了外源蛋白在毕...
- 余占桥马青山赵龙妹张日俊
- 关键词：毕赤酵母外源蛋白
- 文献传递
- 细菌素Subticin 112对小鼠的急性毒性作用研究被引量：2
- 2011年
- 本文旨在研究枯草芽孢杆菌素Subticin 112对小鼠的急性毒性作用,并测定该细菌素单次给药的半数致死剂量(median lethal dose,LD50)或最大耐受剂量(maximum tolerated dose,MTD)。将80只体重为(20±2)g的SPF级KM小鼠随机分成4组,雌雄各占1/2,每组每只小鼠分别灌胃0.4 mL的无菌生理盐水(对照组)及相同体积、浓度分别为0.25(低浓度组)、0.50(中浓度组)和1.00 g/mL(高浓度组,且为最大给药浓度)的Subticin 112溶液。灌胃后14 d内密切观察小鼠的反应。试验结束后记录小鼠的体重变化,眼球采血法收集小鼠血液,进行血清生化指标的测定,解剖后分别取心脏、肝脏、脾脏和肾脏等器官称重以测定其脏器系数,每组随机取2只小鼠(雌雄各1只)的心脏、肝脏、脾脏和肾脏等器官用于制作病理组织切片。给药14 d后,各组小鼠均正常生长且未表现出任何中毒症状。试验组小鼠增重与对照组相比,虽然有下降的趋势,但差异不显著(P>0.05);试验组小鼠的脏器系数、血清生化指标等与对照组相比差异均不显著(P>0.05);观察试验组小鼠的心脏、肝脏、脾脏和肾脏等器官的病理组织切片也均未出现任何病变或坏死细胞。由此可见,Subticin 112对小鼠的MTD大于20 g/kg BW,根据急性毒性试验国家标准(GB 15193.3—2003)中的急性毒性剂量分级表,Subticin 112属于无毒药物。
- 邓凯张日俊
- 关键词：最大耐受剂量半数致死剂量
- 乳酸菌素基因PlnE和PlnF在大肠杆菌中的异源表达被引量：4
- 2010年
- 为获得高产量纯品植物乳杆菌素PlnE和PlnF,研究其开发生物兽药的可能,试验通过人工合成植物乳杆菌素基因PlnE和PlnF,构建表达载体pGEX-4T-E和pGEX-4T-F,经IPTG诱导表达条件优化后,进行亲和层析纯化融合表达蛋白,并使用SDS-PAGE进行鉴定。试验结果表明,pGEX-4T-E和pGEX-4T-F构建成功,纯化后获得2种产量高达30%的纯品融合蛋白,SDS-PAGE鉴定两融合蛋白表达正确。说明PlnE和PlnF基因片段编码的多肽能在原核细胞中正确表达,为进一步研究该细菌素的生物活性奠定了基础。
- 杨芳余占桥张日俊
- 关键词：植物乳酸杆菌细菌素原核表达融合蛋白
- 毕赤酵母优化表达外源蛋白策略被引量：15
- 2010年
- 毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是一种异源蛋白表达的理想系统,但目前并非所有的外源蛋白都能在毕赤酵母中成功高效表达,不同的蛋白表现为不同表达水平、生物活性及稳定性。从遗传因素和表达条件综述了外源蛋白在毕赤酵母中的优化表达策略。
- 余占桥马青山赵龙妹张日俊
- 关键词：毕赤酵母外源蛋白
- 细菌素Bacteriocin E50-52(H)基因设计及其毕赤酵母表达载体构建被引量：2
- 2011年
- 设计及合成细菌素Bacteriocin E50-52(H)基因,克隆到组成型分泌表达质粒pGAPZαA中构建重组质粒pGAPZα-Bacteriocin E(H),经PCR、测序验证正确后,电转化整合到毕赤酵母基因组,基因组PCR、测序验证结果表明成功构建了细菌素组成型重组表达载体,为在毕赤酵母中表达奠定了基础。
- 余占桥马青山韩冰张日俊
- 关键词：基因设计毕赤酵母
- 细菌素Subticin 112对金黄色葡萄球菌CVCC 1885的体内外抑菌活性被引量：4
- 2011年
- 【目的】研究枯草芽孢杆菌素(Bacillus subtilis bacteriocin)Subticin112在体内外对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CVCC 1885的抑菌活性(bacteriostatic activity),为Subticin112的临床应用提供理论依据。【方法】体外抑菌:取相同有效质量的Subticin112、土霉素、青霉素、万古霉素、新霉素、链霉素和庆大霉素等分别溶于等体积的无菌生理盐水中,然后采用琼脂扩散法比较相同浓度的上述药物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性。体内抑菌:将体重为18-22 g的SPF级KM雄鼠120只分成6组,分别为空白对照组、阴性对照组、土霉素治疗组、低浓度Subticin112治疗组、中浓度Subticin112治疗组和高浓度Subticin112治疗组。试验开始后,各组小鼠每隔8 h分别灌胃0.4 mL不同浓度的上述药物或无菌生理盐水,3次灌胃结束后,各组小鼠分别腹腔注射0.5 mL绝对致死剂量(absolute lethal dose,LD100)的金黄色葡萄球菌或无菌生理盐水。试验结束后测定死亡率、促炎性细胞因子水平、腹腔液金黄色葡萄球菌浓度并制作病理组织切片进行观察。【结果】体外抑菌:与抗生素相比,相同浓度的Subticin112对金黄色葡萄球菌具有很好的抑菌活性,其中与万古霉素和新霉素相比,Subticin112对该致病菌的抑制活性更好,且差异极显著(P<0.01),而与其它抗生素相比抑菌活性相当,差异不显著(P>0.05)。体内抑菌:试验结束后,阴性对照组小鼠死亡率为100%,低浓度Subticin112治疗组为30%,其它组小鼠均无死亡;与阴性对照组相比,药物治疗组小鼠的促炎性细胞因子(IL-1β,IL-6和TNF-α)水平均有下降,差异显著(P<0.05),药物治疗组小鼠腹腔液中的金黄色葡萄球菌浓度也均有下降,差异极显著(P<0.01),且呈明显的量效关系;病理切片显示阴性对照组肝脏和脾脏具有明显的病变,而药物治疗组病变轻微或无病变。【结论】可以得出细菌素Subticin112在动物体内外对金黄色葡�
- 邓凯苏丽芳张日俊
- 关键词：金黄色葡萄球菌抑菌活性
- 大豆肽和乳酸菌素对蛋鸡生产性能、蛋品质及血液生化指标的影响被引量：16
- 2012年
- 本试验旨在研究大豆肽和乳酸菌素对蛋鸡生产性能、蛋品质及血液生化指标的影响。选取336日龄健康罗曼商品蛋鸡576只,随机分成8组,每组3个重复,每个重复24只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加0.075%、0.15%、0.3%大豆肽和0.1%、0.2%、0.4%乳酸菌素及0.15%大豆肽+0.2%乳酸菌素的试验饲粮。预试期1周,正试期4周。结果表明:1)饲粮中添加0.15%大豆肽或0.2%乳酸菌素均可显著提高蛋鸡产蛋率(P<0.01),降低料蛋比(P<0.05),显著提高哈夫单位(P<0.05),对平均日采食量、蛋壳厚度、蛋壳强度无显著影响(P>0.05)。2)饲粮中添加0.15%大豆肽或0.2%乳酸菌素可以极显著或显著提高血浆谷草转氨酶(GOT)(P<0.01,P<0.05)、谷丙转氨酶(GPT)活性(P<0.01),降低血浆尿酸含量(P<0.01),对血浆总蛋白、清蛋白、球蛋白含量无显著影响(P>0.05)。由此可见,饲粮中添加0.15%的大豆肽或0.2%的乳酸菌素均能提高蛋鸡生产性能和蛋品质,改善蛋白质代谢,并且0.15%大豆肽+0.2%乳酸菌素的联合应用优于单独添加大豆肽或乳酸菌素。
- 孙汝江吕月琴张日俊
- 关键词：大豆肽乳酸菌素蛋鸡蛋品质血液生化指标
- 抗菌肽融合表达研究进展被引量：10
- 2011年
- 抗菌肽抗菌谱广、活性稳定,且具有与抗生素不同的抗菌机制,在抑杀病原微生物的同时不易产生耐药性,因而在食品、饲料、医药等领域具有重要的应用价值。基因工程技术是降低抗菌肽生产成本的主要方式,其中融合表达在提高抗菌肽产量方面起到了重要作用。文中综述了抗菌肽融合表达的国内外研究进展,探讨了部分融合标签用于抗菌肽表达的策略,并对今后的发展提出了自己的看法。
- 马青山余占桥韩冰张日俊
- 关键词：抗菌肽基因工程技术
- 发酵基质对枯草菌素Subticin 112产生规律的影响及发酵参数优化
- 2011年
- 寻求枯草菌素Subticin 112产生的最佳发酵参数,阐明不同发酵基质对细菌素产生规律的影响,同时最大限度减少有机氮源,为细菌素的分离纯化减少工序和成本,从而为Subticin 112的高效生产提供理论依据。利用响应面法中的部分因析设计(FFD)与中心组合试验(CCD)相结合,确定发酵基质中各组分最适宜配比;比较不同发酵基质对菌体生物量、细菌素效价、比生产速率、比生长速率的影响。结果表明:发酵基质中有机氮源含量降低了74.3%,总氮源含量降低了56%,细菌素活性提高了170%,相当于青霉素当量163.8 mg/L。细菌素最大比生产速率提高了184%。证实了微量元素锰与Subticin 112的产量有密切关系,Subticin 112以菌体的混合代谢模式产生。
- 尚雅婧张日俊
- 关键词：活性有机氮源细菌素
