广东省医学科学技术研究基金(A2003276)
- 作品数：15 被引量：53H指数：4
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- 神经生长因子重组反转录病毒载体在神经干细胞中的表达被引量：7
- 2014年
- 背景:神经生长因子属于生物大分子,难以透过血脑屏障,而反转录病毒载体能稳定地将外源基因插入并整合到宿主细胞基因组内,适于作为基因治疗的载体。目的:探讨神经生长因子基因重组反转录病毒表达载体在神经干细胞中的表达情况。方法:将SD大鼠神经生长因子基因重组反转录病毒表达载体pLEGFP-NGF通过脂质体Lipofectamine 2000转染包装细胞PT67,经G418筛选后,收集阳性克隆病毒上清,用于感染神经干细胞,用ELISA检测神经生长因子基因的表达,并利用PC12细胞检验神经生长因子的生物学活性,同时观察神经生长因子对神经干细胞存活、分化的影响。结果与结论:重组了神经生长因子基因的反转录病毒液感染神经干细胞后能表达外源性神经生长因子蛋白,该蛋白能促使PC12细胞数量增多,突起明显变长,并能增加神经干细胞的存活数量,促进神经干细胞分化。结果说明整合了神经生长因子基因的神经干细胞能表达外源性神经生长因子,表达的神经生长因子对神经干细胞的存活及分化均有促进作用。
- 何峻峰顾国妹龙大宏
- 关键词：干细胞神经干细胞神经生长因子反转录病毒载体PC12细胞基因重组
- 神经干细胞移植对192-IgG-saporin老年性痴呆模型鼠的学习记忆及海马胆碱能纤维的影响被引量：5
- 2007年
- 目的探讨神经干细胞(NSCs)移植对192-IgG-saporin致老年性痴呆模型鼠学习记忆和海马胆碱能纤维再生的影响。方法采用192-IgG-saporin(2.5μg/5μL)侧脑室注射SD大鼠建立痴呆模型后,行基底前脑神经干细胞移植,4周后行Y迷宫检测,并观察大鼠海马胆碱能纤维数的变化。结果Y迷宫检测显示大鼠的学习、记忆能力,模型组(107.38±9.34、3.75±0.71)与正常组比较明显下降(P<0.01),而移植组(75.26±5.33、5.45±0.51)有所改善(P<0.05);免疫组化显示模型组大鼠海马CA1区辐射层和齿状回分子层胆碱能阳性纤维,模型组与正常组比较,CA1辐射层和齿状回分子层纤维密度分别减少到11.07%和12.96%(P<0.01),与正常组比较均而干细胞移植组则分别恢复到正常组的81.39%和75.30%(P>0.05)。结论神经干细胞能促进192-IgG-saporinAD动物模型鼠学习记忆能力的恢复及海马胆碱能纤维的再生。
- 潘学兵龙大宏罗秀梅杨丹迪涂腊根宣爱国
- 关键词：神经干细胞阿尔茨海默病动物模型学习记忆
- 神经干细胞移植对注射192-IgG-saporin致AD动物模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元的影响
- 2007年
- 目的探讨神经干细胞(NSCs)移植对注射192-IgG-saporin致老年性痴呆动物模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元的影响。方法将24只成年SD大鼠随机分为正常组、模型组和移植组,每组8只。模型组:左侧侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin2.5μg/5μL,建立192-IgG-saporin致老年性痴呆动物模型;移植组:动物模型建立后,于基底前脑行神经干细胞移植,4周后行免疫组织化学染色,结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑ChAT阳性神经元数量和形态学参数的变化。结果模型组注射192-IgG-saporin后1个月,观察到注射侧基底前脑内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)ChAT阳性神经元明显减少,分别为正常组的9.70%和14.10%(与正常组相比,P<0.01);移植组ChAT阳性神经元恢复到正常组的71.51%和73.52%(与模型组相比,P<0.01)。细胞形态学参数提示,移植组ChAT阳性神经元中含有大小不等的未成熟细胞。结论神经干细胞移植对192-IgG-saporin致痴呆模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元有明显补充和保护作用。
- 罗秀梅龙大宏潘学兵杨丹迪曾凡表黄文燕
- 关键词：神经干细胞老年性痴呆动物模型
- BDNF和神经干细胞联用对老年痴呆鼠基底前脑 胆碱能神经元和学习记忆能力的影响被引量：21
- 2005年
- 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)和神经干细胞(NSCs)联合应用对老年痴呆大鼠基底前脑胆碱能神经元及大鼠学习记忆能力的影响。利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马NSCs,行BrdU标记。切断SD大鼠左侧穹隆海马伞,基底前脑注射NSCs,同时侧脑室注射BDNF,2周后行nestin和BrdU/NF、BrdU/GFAP免疫荧光双标染色,4周后行Y迷宫测试,免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑神经营养因子受体(NGFR)阳性神经元数目变化。结果发现,移植后NSCs能够在宿主体内存活且分化成神经元和胶质细胞;免疫组化结果显示损伤组大鼠胆碱能神经元数在内侧隔阂(MS)和斜角带(VDB)分别减少64.3%和49.3%,较正常组明显下降(P<0.01);移植组神经元数下降34.1%和27.6%较损伤组有改善(P<0.05),但与正常组比较有显著性差异(P<0.05);联合组神经元数减少15.1%和18.6%,与正常组无显著性差异(P>0.05)。Y迷宫测试结果显示,大鼠的学习记忆能力与基底前脑NGFR阳性细胞数呈正相关。提示,BDNF和NSCs移植的联用较单独使用NSCs或BDNF更好地改善老年痴呆大鼠的学习记忆能力。
- 宣爱国龙大宏杨丹迪谷海刚冷水龙
- 关键词：神经干细胞胆碱能神经元记忆能力
- 神经生长因子基因重组逆转录病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的构建神经生长因子(NGF)基因重组逆转录病毒表达载体,研究NGF在神经干细胞(NSC)中的表达情况。方法从大鼠海马组织提取总RNA,利用RT-PCR的方法获得编码大鼠β-NGF的基因片段,应用基因重组技术,将大鼠β-NGF基因片段克隆到逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1中,通过脂质体Lipofectamine2000转染包装细胞PT67,经G418筛选后,收集阳性克隆病毒上清,用于感染神经干细胞(NSC),观察该NSC表达的NGF对PC12细胞突起生长的作用。结果限制性内切酶酶切分析鉴定表明为正确重组子,β-NGF基因在NSC中获得表达,该NSC的培养上清液可以促进PC12细胞突起生长。结论重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-NGF构建成功,β-NGF基因可在NSC中表达并具有生物学活性。
- 何峻峰龙大宏李佳楣冷水龙谷海刚宣爱国潘学兵
- 关键词：神经生长因子逆转录病毒载体神经干细胞基因重组阿尔茨海默病
- 神经干细胞与脑源性神经营养因子联合治疗对老年性痴呆鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的影响被引量：2
- 2006年
- 目的探讨神经干细胞(NSCs)与脑源性神经营养因子(BDNF)联合应用对老年性痴呆鼠基底前脑一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的影响。方法切断成年SD大鼠左侧穹窿海马伞(FF),基底前脑行神经干细胞移植,同时持续侧脑室注射BDNF,4周后行组织化学染色结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑NOS阳性神经元数量和形态学参数的变化。结果损伤后1个月,损伤侧基底前脑内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)内可观察到NOS阳性神经元明显减少,分别为正常组的35.5%和55.8%,(与正常组相比P<0.01);移植组NOS阳性神经元数恢复到正常组的74.7%和95.7%,(与损伤组相比P<0.01);联合组NOS阳性神经元数达到正常组的115.2%和151.3%,(与移植组相比P<0.05及P<0.01)。细胞形态学参数提示,移植组NOS阳性神经元中含部分中等大小的未成熟细胞;联合组中该中等大小的细胞更多。结论神经干细胞移植与BDNF联合治疗,对AD模型鼠基底前脑MS、VDB的NOS阳性神经元有明显的补充和保护作用,并且联合治疗效果比单纯神经干细胞移植效果更佳。
- 杨丹迪龙大宏宣爱国冷水龙
- 关键词：神经干细胞脑源性神经营养因子一氧化氮合酶阳性神经元老年性痴呆细胞培养
- 神经干细胞和脑源性神经营养因子联用对老年痴呆鼠学习记忆能力和基底前脑小白蛋白的影响被引量：4
- 2006年
- 目的:观察神经干细胞和脑源性神经营养因子联合应用对老年痴呆大鼠学习记忆能力及其基底前脑小白蛋白神经元的作用。方法:实验于2003-12/2005-10在广州医学院解剖教研室神经生物学实验室完成。取健康雄性SD大鼠40只,随机分为4组:正常对照组、损伤组、移植组和联合组,每组10只。①利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马神经干细胞。②除正常组外,其他3组切断SD大鼠左侧穹隆海马伞建立老年痴呆大鼠模型;移植组和联合组,基底前脑注射神经干细胞;联合组同时侧脑室注射脑源性神经营养因子。③4周后行Y迷宫测试大鼠学习、记忆能力(学习次数分值高表示差,记忆能力分值低表示差),免疫组织化学结合图象分析技术观察各组大鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元数目受影响的情况。结果:①损伤组大鼠比正常对照组大鼠学习、记忆能力明显下降(98.2±5.6比59.8±4.1,3.5±0.5比8.4±0.4,P<0.01)。②移植组学习、记忆能力均有改善(74.1±5.4,6.7±0.5,P<0.05),但与正常组比较差异有显著性意义(P<0.05)。③联合组学习记忆能力(56.7±0.9,8.3±0.3)与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。④大鼠的学习记忆能力与基底前脑小白蛋白阳性细胞数呈正相关。结论:神经干细胞和脑源性神经营养因子联用较单独使用神经干细胞或脑源性神经营养因子更好地改善老年痴呆大鼠的学习记忆能力。
- 宣爱国龙大宏杨丹迪
- 关键词：干细胞脑源性神经营养因子阿尔茨海默病
- 神经干细胞和BDNF联用对痴呆模型鼠基底前脑小白蛋白表达的影响被引量：1
- 2006年
- 探讨神经干细胞(NSCs)和脑源性神经营养因子(BDNF)联用对老年痴呆大鼠基底前脑小白蛋白(PV)表达的影响。利用无血清培养技术获得新生SD大鼠海马NSCs。切断SD大鼠左侧穹隆海马伞,基底前脑注射NSCs,同时侧脑室注射BDNF。4周后行免疫组织化学结合图象分析技术观察各组大鼠基底前脑PV蛋白表达,同时采用半定量RT-PCR法分析基底前脑PVmR-NA表达水平情况。结果发现,损伤组大鼠PV蛋白在内侧隔核和斜角带的表达较正常组明显下降(P<0.01);移植组PV蛋白表达较损伤组有提高(P<0.05),但与正常组比较有显著性差异(P<0.05);联合组PV蛋白表达与正常组无显著性差异(P>0.05)。RT-PCR结果显示,PVmRNA在损伤组和正常组表达量分别为0.2407±0.0825,0.8536±0.1248,两者有显著差异(P<0.01);移植组的表达量为0.5016±0.1009,与损伤组比较差异显著(P<0.05);联合组的表达量较损伤组明显增高(P<0.01),也高于移植组(P<0.05),与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。本实验结果提示NSC和BDNF联用较单独使用NSC或BDNF更好地提高PV蛋白及其mRNA的表达,二者具有协同作用。
- 宣爱国龙大宏杨丹迪
- 关键词：老年性痴呆脑源性神经营养因子小白蛋白神经干细胞
- 免疫毒素192-IgG-saporin致痴呆动物基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的变化被引量：1
- 2007年
- 目的:建立侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin致痴呆动物模型,观察其学习记忆能力和基底前脑一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的变化。方法:侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin,行Y迷宫检测,采用NADPH-d组织化学法染色,结合图像分析技术观察大鼠基底前脑NOS阳性神经元数目和形态学参数的变化。结果:模型组大鼠的学习、记忆能力较正常组明显下降。模型组基底前脑内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)NOS阳性神经元数分别减少到正常组的21.62%和17.70%;细胞周长和面积降低,灰度值升高,均有显著性差异。结论:应用192-IgG-saporin免疫毒素可使基底前脑NOS阳性神经元明显减少。
- 罗秀梅龙大宏潘学兵杨丹迪冷水龙
- 关键词：一氧化氮合酶神经元基底前脑痴呆
- BDNF和神经干细胞联用对穹隆海马伞切割鼠基底前脑p75^(NGFR)阳性神经元数及其形态学的影响
- 2006年
- 目的研究神经干细胞(NSC)和脑源性神经营养因子(BDNF)联合治疗对穹隆海马伞切割鼠基底前脑p75NGFR阳性神经元及其形态学的影响。方法切断SD大鼠左侧穹隆海马伞模拟AD大鼠模型,利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马NSC,基底前脑注射NSC,同时侧脑室注射BDNF,4周后行免疫组化结合图象分析技术观察各组大鼠基底前脑p75NGFR阳性神经元及其形态学变化。结果损伤组大鼠p75NGFR阳性神经元数在内侧隔核(MS)和斜角带(VDB)较正常组明显下降(P<0.01);移植组细胞数较损伤组有改善(P<0.05);与正常组相比较,联合组免疫阳性神经元数无显著下降(P>0.05)。形态学参数测试结果显示,p75NGFR阳性神经元的面积、周长在4组中的改变类似p75NGFR阳性神经元数。结论NSC和BDNF联用较单独使用BDNF或NSC更好地增加p75NGFR阳性神经元数及其形态学参数。
- 宣爱国龙大宏杨丹迪
- 关键词：神经干细胞
