国家自然科学基金(81372321)
- 作品数：11 被引量：83H指数：5
- 相关作者：许林许有涛邱满堂王洁尹荣更多>>
- 相关机构：南京医科大学江苏省肿瘤医院南京江北人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省临床医学科技专项江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- p53和p16基因过表达对人肺腺癌细胞株H1299生物学功能影响实验研究被引量：9
- 2018年
- 目的 p53及p16基因是肺腺癌的两种重要的驱动基因,但其在肺腺癌发生发展中的作用尚不明确。本研究探讨外源性突变型p53(p53mut)、野生型p53(p53wt)和p16基因过表达对人肺腺癌细胞株H1299生物学功能的影响。方法构建真核表达载体pIRES2-EGFP-p53mut、pIRES2-EGFP-p53wt和pIRES2-EGFP-p16,将H1299细胞分为空白对照组、阴性对照组和转染组(p53mut转染组、p53wt转染组、p53wt和p16联合转染组),空白对照组只加转染试剂,阴性对照组转染空载体,转染组转染含目的基因的过表达载体。蛋白质印迹法验证质粒载体转染效果,细胞增殖检测试剂盒8(cell counting kit8,CCK8)、划痕试验、Transwell小室侵袭实验分别检测转染前后细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化,流式细胞术检测转染前后细胞周期和凋亡的变化。结果真核表达载体质粒经测序鉴定证明构建正确。蛋白质印迹法证实,空白对照组及阴性对照组的H1299细胞不表达p53和p16蛋白。转染组的H1299细胞成功过表达目的基因(p53mut、p53wt及p16)。CCK8实验提示,空白对照组与阴性对照组在细胞增殖能力上差异无统计学意义(P>0.05),p53mut转染组细胞增殖能力增强,p53wt转染组及p53wt、p16共转染组细胞的增殖能力减弱,且以后者下降更为明显,P<0.001。划痕试验提示,空白对照组与阴性对照组细胞在迁移能力差异无统计学意义(P>0.05),p53mut转染组细胞迁移能力增强,p53wt转染组及p53wt、p16共转染组细胞迁移能力减弱,且以后者下降更为显著,P<0.001。Transwell小室侵袭实验提示,空白对照组与阴性对照组细胞的侵袭能力差异无统计学意义(P>0.05),p53mut转染组细胞侵袭能力增强,p53wt转染组及p53wt、p16共转染组细胞侵袭能力减弱,且以后者减弱更为明显,P<0.001。流式细胞术检测提示,空白对照组与阴性对照组G1期细胞比例差异无统计学意义(P>0.05),而p53wt转染组及p53wt、p16共转染�
- 卞春安蒋琰华陆世民许林李忠佑
- 关键词：肺腺癌突变型P53野生型P53
- 突变型P53蛋白在肺腺癌中的表达及其临床意义被引量：24
- 2015年
- 背景与目的突变型TP53基因不仅丧失了抑癌功能,其编码的突变型P53蛋白还能获得促进细胞增殖、抑制细胞凋亡等功能。目前TP53基因在肺腺癌中突变的临床意义尚不十分明确。本研究旨在探讨突变型P53蛋白在肺腺癌组织中的表达及其临床意义。方法回顾性分析120例肺腺癌手术患者的临床病理资料,应用免疫组化法检测患者组织标本中突变型P53蛋白的表达,采用χ2检验分析突变型P53蛋白表达与各临床病理参数的关系,采用单因素生存分析及多因素生存分析法分析突变型P53蛋白表达与总生存期的关系。结果突变型P53蛋白在肺腺癌组织中的表达率为63.7%,突变型P53蛋白的表达与肿瘤大小(P=0.041)及病理分期(P=0.025)有关。单因素生存分析提示肿瘤大小(P=0.031)、淋巴结转移(P<0.001)、病理分期(P<0.001)以及突变型P53蛋白的表达(P=0.038)与患者总生存期密切相关。多因素生存分析提示仅有淋巴结转移(P=0.014)是患者总生存期的独立影响因素。结论TP53基因突变的肺腺癌患者预后较差,突变型P53蛋白可以作为预测患者预后的分子标志物。
- 卞春安李忠佑许有涛王洁许林沈洪兵
- 关键词：突变肺肿瘤预后
- 长链非编码RNA结肠癌相关转录子2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义被引量：8
- 2015年
- 目的 观察长链非编码RNA结肠癌相关转录子2（CCAT2）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达,并探讨CCAT2的生物学功能.方法 选取91例病理学确诊为NSCLC患者的癌组织及癌旁组织,实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法检测CCAT2的表达.设计合成CCAT2的靶向小干扰RNA （siRNA）,脂质体法转染NCL-H1975细胞.实验分阴性对照组和CCAT2-siRNA转染组（实验组）：细胞计数试剂盒（CCK-8）实验检测CCAT2对增殖活性的影响;划痕实验及Transwell实验检测CCAT2对NSCLC侵袭转移的影响.结果 CCAT2在NSCLC肿瘤组织中高表达（平均上调7.21倍）,并与肺腺癌密切相关（P＜0.05）.CCK-8实验结果显示：24、48、72、96 h实验组450mm吸光度值较对照组显著降低（P＜0.05）;划痕实验显示：实验组与阴性对照组宽度为（194.2±18.3） mm比（62.4±5.2）mm（P ＜0.01）;Transwell实验显示：实验组与阴性对照组穿膜细胞数为（79.8 ±6.8）个比（244.2±14.8）个（P＜0.01）.结果表明siRNA沉默CCAT2表达后,抑制了NCl-H1975细胞的增殖和迁移侵袭.结论 CCAT2是肺腺癌特异的长链非编码RNA,能促进NSCLC的增殖和迁移侵袭.
- 许有涛邱满堂王洁毛启星蒋峰许林尹荣
- 关键词：长链非编码RNA非小细胞肺癌
- 长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1介导的内源竞争性RNA网络研究
- 2016年
- 目的使用生物信息方法构建长非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1（MALAT1）介导的内源竞争性RNA（ceRNA）网络。方法通过miRanda算法预测，MALAT1序列上存在1051个微小RNA（miRNAs，miR）结合位点；StarBase数据库下载MALAT1的紫外交联免疫共沉淀一高通量测序（CLIP—seq）数据；检索miRTarBase，筛选有文献证实的miRNA靶基因5595个；下载StarBase数据库中与MALATl表达存在正相关的基因528个。结果根据miRanda算法，MALAT1序列上存在1051个miRNA结合位点，结合MALATl的CLIP-seq数据进一步筛选，得到48个miRNA。与MALATl表达呈正相关的基因有528个；从miRTarBase数据库中筛选上述48个miRNA的靶基因，与正相关基因取交集，更获得323个基因。基于48个miRNA和323个基因构建MALATl的ceRNA网络。结论通过生物信息学方法可构建MALAT1介导的ceRNA调控网络。
- 张海天王国祥尹荣邱满堂许林
- 关键词：微小RNA
- 长链非编码RNA前列腺癌非编码核糖核酸1在结直肠癌组织中的上调对增殖及细胞周期的影响被引量：5
- 2015年
- 目的 观察长链非编码RNA（IncRNA）前列腺癌非编码核糖核酸1（PRNCR1）在结直肠癌中的表达及其对癌细胞增殖能力的影响,并在体外研究PRNCR1的功能.方法 入组63例经病理确诊为结直肠腺癌患者的癌组织及癌旁组织,实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法检测PRNCR1的表达水平.设计合成PRNCR1的靶向等位基因特异性寡核苷酸（ASO）,通过脂质体介导的转染法转入HT-29细胞,Real-time PCR法检测干扰后HT-29细胞内PRNCR1的转录水平.实验分Scramble转染对照组和PRNCR1-ASO转染实验组：细胞计数试剂盒（CCK4）实验检测PRNCR1低表达对增殖活性的影响;Transwell实验和Matrigel实验检测PRNCR1低表达对结直肠癌侵袭转移的影响.结果 PRNCR1在CRC肿瘤组织中高表达（平均上调10.5倍）,并与结直肠癌大小显著相关（P＜0.01）.CCK-8实验结果显示：沉默PRNCR1表达后,24、48、72、96 h实验组450 mm吸光度值较对照组显著降低（P＜0.05）.结论 PRNCR1是结直肠癌的特异性长链非编码RNA,能促进结直肠癌的增殖.
- 杨柳许有涛邱满堂王洁郑妍妍李明尹荣许林
- 关键词：长链非编码RNA结直肠癌
- 食管癌合并糖尿病患者术后营养支持的临床研究被引量：7
- 2016年
- 目的探讨不同营养方式对合并糖尿病的食管癌患者术后血糖情况、营养状况及术后恢复情况的影响。方法选取2015年1月至2015年8月期间在江苏省肿瘤医院胸外科就诊的食管癌合并糖尿病患者32例,根据术后肠内营养开始时间随机分为术后第1天组(d1),术后第3天组(d3)和术后第7天组(d7)。每日监测7段血糖;术后第1、3和7天分别检测患者的营养指标(转铁蛋白、白蛋白和前白蛋白);观察术后相关并发症发生情况。结果所有手术患者术后血糖控制尚可,未出现严重糖代谢并发症。3组患者术后营养指标无显著差异(P>0.05)。早期应用肠内营养能促进术后胃肠功能恢复(P<0.05),并且可减少术后切口感染及肺部感染的发生率(P<0.05)。结论术后第1天开始应用肠内营养有助于食管癌合并糖尿病患者控制血糖水平,提高机体营养状态,减少并发症发生,缩短患者术后恢复期。
- 王晓骏刘雅恬胡静雯蒋峰张勤许林
- 关键词：食管癌糖尿病食管癌手术营养支持
- 非小细胞肺癌组织miRNA-221表达及其与预后的关系研究被引量：19
- 2014年
- 背景与目的 microRNAs是肿瘤的重要调控因子,其中miRNA-221的表达与多种肿瘤相关,本研究旨在探讨miRNA-221在非小细胞肺癌组织中的表达及其与预后的关系。方法分析江苏省肿瘤医院2005年11月-2007年1月期间行手术治疗的117例非小细胞肺癌患者的临床资料。采用实时定量逆转录聚合酶链反应检测上述病例肺癌标本中miRNA-221的水平;应用χ2检验分析miRNA-221表达水平与各临床病理参数的关系;采用Kaplan-Meier方法分析miRNA-221表达与非小细胞肺癌生存期(overall survival,OS)之间的关系;采用Cox风险比例模型分析各个协变量的联合效应。以P<0.05认为差异有统计学意义。结果 miRNA-221的表达量与患者年龄相关,与患者性别(χ2=0.070,P=0.791)、病理类型(χ2=0.414,P=0.520)、p-TNM分期(χ2=0.068,P=0.794)及吸烟史(χ2=0.206,P=0.650)无明显关系;生存分析显示miRNA-221高表达组患者生存期显著低于低表达组(P<0.001)。Cox风险比例模型分析显示miRNA-221表达可作为非小细胞肺癌患者预后不良的标志。结论 miRNA-221的高表达提示非小细胞肺癌患者预后较差,是潜在的肺癌预后预测分子标志物。
- 吕俊杰徐磊许有涛邱满堂杨欣王洁尹荣许林
- 关键词：肺肿瘤基因表达预后
- 支气管内超声引导针吸活检术在纵隔肿物及纵隔肿大淋巴结诊断中的临床应用被引量：5
- 2014年
- 目的探讨支气管内超声引导针吸活检术(endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration,EBUS-TBNA)在明确纵隔肿物性质和纵隔或肺门肿大淋巴结定性诊断中的应用价值。方法 2012年4月至2013年12月期间,对胸部CT或PET/CT检查提示纵隔占位、纵隔或肺门淋巴结肿大≥1cm的患者行EBUSTBNA检查,阴性者进一步接受纵隔镜检查或胸腔镜、开胸手术明确病变性质。结果本组共203例病例,EBUS-TBNA明确诊断阳性者180例,其中诊断为小细胞肺癌54例,非小细胞肺癌119例,食管癌1例,贲门癌1例,鼻咽癌2例,淋巴瘤3例;EBUS-TBNA阴性者23例,其中5例最终证实为非小细胞肺癌的纵隔淋巴结转移,1例为小细胞肺癌,其余17例为良性病变。EBUS-TBNA在纵隔病变或纵隔淋巴结转移诊断中的灵敏度、特异性和准确性分别为96.8%、100%、97%。检查过程中,患者耐受性均较好,所有病人均无严重并发症发生。结论 EBUSTBNA是一种对纵隔病变及纵隔肿大淋巴结定性诊断安全、有效的方法。
- 李明谭旭艳张治胡静雯夏红香成静许林
- 关键词：纵隔肿物纵隔淋巴结
- p16和Smad4表达缺失在肺腺癌预后的意义被引量：3
- 2014年
- 目的 探讨p16和Smad4在人肺腺癌组织中的表达缺失及其与临床病理特征和预后的关系.方法 免疫组织化学法检测p16、Smad4蛋白在120例肺腺癌组织中的表达缺失,探讨p16和Smad4缺失表达与肺腺癌患者临床病理因素及预后的关系.结果 p16和Smad4在肺腺癌组织中的表达缺失率分别为45.0％和62.5％.p16的表达缺失与肿瘤的淋巴结转移（P＜0.01）和临床病理分期明显相关（P＜0.01）,Smad4的表达缺失与肿瘤大小（P＜0.05）,淋巴结转移（P＜0.05）以及肿瘤分化程度（P＜0.05）明显相关.p16和Smad4的表达缺失率与患者总生存期呈负相关（P＜0.01）,p16和Smad4表达共缺失者的总生存期最短（P＜0.01）.p16的表达缺失率与Smad4的表达缺失率呈正相关（r =0.182,P＜0.05）.结论 p16和Smad4在肺腺癌中表达缺失与肺腺癌的恶性生物学行为和不良预后有关.
- 卞春安许有涛王洁李忠佑许林
- 关键词：P16基因SMAD4基因预后
- 高通量转录组测序技术研究过表达GPC5对A549细胞基因表达影响被引量：1
- 2016年
- 背景与目的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5(glypican-5,GPC5)是一个重要的抑癌基因,然而GPC5对肺腺癌细胞增殖能力和基因表达的影响目前研究甚少。本研究拟在肺腺癌A549细胞中过表达GPC5以研究细胞增殖能力和基因表达变化情况。方法通过慢病毒载体构建稳定过表达GPC5的A549细胞株,通过Cell Counter Kit 8(CCK8)、平板克隆和Ed U实验检测细胞增殖能力;通过高通量转录组测序研究基因表达变化。结果相对于空白载体组,CCK8实验发现过表达GPC5可以明显抑制A549细胞的增殖速率;平板克隆实验结果显示,过表达GPC5之后A549细胞克隆形成能力下降(181±17 vs 278±23);Ed U染色结果显示过表达GPC5后阳性染色细胞比例下降。转录组测序结果提示过表达GPC5之后,2,108个基因表达发生明显变化,其中具有正性调节细胞增殖作用的基因明显下调。结论过表达GPC5可以明显抑制肺腺癌细A549的增殖能力,而且过表达GPC5后具有正性调节细胞增殖作用的基因表达下调。
- 张海天王国祥杨欣邱满堂许林
- 关键词：A549增殖
