天津市应用基础与前沿技术研究计划(YFJMJC12000)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：天津出入境检验检疫局山东农业大学东营职业学院更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛疱疹病毒I型gB基因原核表达载体的构建和高效表达
- 2007年
- 用PCR法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型B artha N u/67株gB基因,将其插入原核表达载体pBAD/TOPO中构建重组质粒pBAD-gB。将pBAD-gB质粒转化大肠杆菌TOP 10后进行了诱导表达,对表达产物进行了纯化和抗原性检测,并通过改变诱导剂L-A rab inose的浓度和诱导时间对诱导表达条件进行了优化。结果表明,重组质粒pBAD-gB构建成功,gB蛋白获得了高效表达,并以包涵体形式存在,纯化后gB蛋白的纯度达90%以上,gB蛋白抗原性良好,最佳诱导表达条件:L-A rab inose终浓度为0.2 g/L,诱导时间为5 h。
- 吴春涛王建华侯相山霍雷侯艳梅牛钟相
- 关键词：GB基因原核表达
- 牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株gD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2006年
- 用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株的MDBK细胞中扩增gD基因,将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析,设计合成3对引物,以获得的克隆质粒为模板,PCR扩增gD胞外域基因,将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载体中构建成表达质粒pGEX-4T-gDQ、pGEX-4T-gDQB、pGEX-4T-gDHB和pET-gDQ、pET-gDQB、pET-gDHB,利用上述质粒分别转化大肠杆菌BL21和BL21(DE3),IPTG诱导后SDS-PAGE检测,结果pGEX-4T-gDQ、pGEX-4T-gDQB、pGEX-4T-gDHB和pET-gDQ四个表达质粒出现表达且符合预期大小,Western blot表明表达产物均有抗原性。
- 庄东明王建华吴春涛霍蕾侯艳梅赵祥平牛钟相
- 关键词：克隆原核表达
