国家自然科学基金(31201982)
- 作品数：16 被引量：21H指数：4
- 相关作者：柳学周史宝徐永江李晓晓张金勇更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所大连海洋大学上海海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家鲆鲽类产业技术体系建设项目山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 半滑舌鳎促黄体激素基因克隆和表达分析及其血清浓度测定被引量：4
- 2014年
- 利用RACE技术首次克隆了半滑舌鳎脑垂体中促黄体激素(LH)基因cDNA全长序列。该基因全长670 bp,开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸。与其他脊椎动物的LH成熟肽氨基酸序列同源性比较表明:半滑舌鳎LH与鲽形目和鲈形目同源性高58%～68%。另外,半滑舌鳎LH含有12个保守的半胱氨酸残基和1个N-糖基化位点(19～21 NQT)。实时荧光定量组织表达分析表明,LH mRNA在脑、垂体、卵巢等组织中表达,垂体中表达量最丰富,其他组织尤以脑、性腺表达量较高,推测半滑舌鳎LH可能具有广泛的垂体外生理功能;实时荧光定量PCR方法对繁殖周期雌性半滑舌鳎LH表达水平进行测定,结果表明,LH mRNA在Ⅱ～Ⅵ各繁殖周期的脑、垂体、卵巢3种组织都有表达,但表达水平有差异,在Ⅳ、V期表达量最丰富,说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。利用125I标记的放射免疫测定(RIA)技术检测繁殖周期半滑舌鳎血清LH浓度,结果表明LH在V期含量最丰富,也说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。
- 柳学周史宝王珊珊徐永江李晓晓
- 关键词：半滑舌鳎CDNA克隆放射免疫测定
- 条石鲷促性腺激素β(FSH,LH)亚基cDNA克隆及表达特性分析被引量：1
- 2014年
- 采用同源性克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了条石鲷GtHβcDNA序列,并分析了GtHβmRNA在条石鲷组织中的表达差异和在卵巢发育不同时期的垂体、卵巢、脑中表达水平变化。结果发现,条石鲷FSH cDNA全长554 bp,ORF长363 bp,编码了120个氨基酸,前18个氨基酸为信号肽。条石鲷LH cDNA全长857 bp,ORF长450 bp,编码了149个氨基酸,前24个氨基酸为信号肽。FSH和LH包含了12个保守的半胱氨酸残基(Cys)和一个N-糖基化位点,在LH的第4和第5个Cys之间存在着硬骨鱼类特异性的Cys-Ser-Gly-His(CSGH)区域。同源性比较和进化分析显示,条石鲷FSH和LH与鲈形目鱼类的进化关系较近。采用实时荧光定量PCR法检测发现,FSH mRNA和LH mRNA在垂体中的表达量最高,其次是性腺;FSH mRNA在头肾和肾脏中不表达,LH mRNA在头肾中不表达。周期表达分析显示,垂体中的FSH mRNA在卵巢发育的Ⅳ期达到最大值,LH mRNA在Ⅴ期达到最大值;卵巢中的FSH mRNA在Ⅴ期达到最低值,而LH mRNA在Ⅴ期达到最大值;脑中的FSH和LH mRNA在Ⅴ期达到最低值。激素分析显示,血清中FSH在卵巢发育的Ⅳ期达到最大值,而LH在Ⅴ期达到最大值,血清中FSH和LH水平与垂体中FSH mRNA和LH mRNA表达趋势一致。
- 陈圣毅柳学周史宝徐永江李晓晓王珊珊臧坤
- 关键词：条石鲷CDNA克隆
- 半滑舌鳎孕酮受体膜组分1基因的克隆及组织和时空表达规律被引量：2
- 2016年
- 运用同源克隆和RACE方法获得了半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）孕酮受体膜组分I（PGRMCl）的cDNA全长序列，生物信息学分析显示，半滑舌鳎PGRMC1 cDNA序列全长1335bp，开放阅读框长546bp；其编码的蛋白是单次跨膜蛋白，在N端13～35位氨基酸残基处有一个跨膜区域。半滑舌鳎PGRMC1氨基酸序列与青鳝（Oryzias latipes）相似性最高，达到了82．9％；与青斑河纯（Tetraodon nigroviridis）相似度为81．2％。系统进化分析表明，半滑舌鳎PGRMC1与鲔形目和纯形目鱼类PGRMC1聚为一个分支。采用实时荧光定量RT-PCR技术研究发现，性成熟雌性半滑舌鳎PGRMC1 mRNA在各组织广泛表达，其中在卵巢组织中相对表达量最高（P〈0．05）。在不同卵巢发育时期，半滑舌鳎PGRMC1 mRNA在脑、垂体和卵巢中的周期表达变化特征显示：脑中PGRMC1 mRNA在卵巢Ⅲ期表达量升高明显，Ⅴ期表达水平最高（P〈0．05）；垂体中PGRMC1mRNA表达量在卵巢发育V期达峰值（P〈0．05）；在卵巢中，PGRMC1mRNA表达水平从卵巢发育Ⅱ到Ⅴ期稳步上升，Ⅴ期时达到最高值（P〈0．05）。综上，半滑舌鳎PGRMC1基因主要参与卵巢的发育和成熟过程，并在繁殖期介导孕酮调控卵母细胞的最终成熟，研究结果为半滑舌鳎繁殖内分泌调控研究提供了基础资料。
- 张金勇柳学周史宝徐永江李晓妮常亚青王滨
- 关键词：半滑舌鳎克隆
- 半滑舌鳎膜孕激素受体基因克隆与组织表达分析被引量：8
- 2013年
- 采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,首次获得全长为1319bp的半滑舌鳎膜孕激素受体(mPRα)的cDNA序列;将推断的氨基酸序列与其他物种mPRα氨基酸序列进行多重比较分析,发现存在7个跨膜区域。使用MEGA4.0临位相联法和ClustalX方法对mPRα的氨基酸序列进行聚类分析和序列相似度分析。结果表明,半滑舌鳎mPRα与漠斑牙鲆、大西洋绒须石首鱼以及青鳉等鱼类的mPRα聚为一支,亲缘关系较近,相似度较高,分别为94%、93%和90%;而与高等哺乳动物人和牛相似性均为53%,亲缘关系较远。应用半定量RT-PCR技术分析了mPRαmRNA在性成熟雌性半滑舌鳎不同组织的表达,结果表明,mPRαmRNA组织表达具有广泛性,但表达量存在差异,在脑、肾、脾和卵巢等组织表达丰富,在肝、胃和肌肉组织表达较弱。
- 史宝李晓晓柳学周徐永江王珊珊刘芝亮王妍妍
- 关键词：半滑舌鳎基因克隆
- 半滑舌鳎促性腺激素α亚基cDNA的克隆及组织表达特征被引量：5
- 2013年
- 采用同源克隆和末端快速扩增（RACE）方法,从半滑舌鳎脑垂体中克隆了促性腺激素α亚基（CGα）全长cDNA（GenBank序列登录号：JQ364953）.半滑舌鳎CGα基因全长685bp,其开放阅读框384bp,编码含127个氨基酸的蛋白,N端33个氨基酸为信号肽.半滑舌鳎CGα成熟肽与其他脊椎动物CGα成熟肽结构特征相似,具有10个半胱氨酸残基和两个N-糖基化位点.CGα成熟肽序列分析表明,半滑舌鳎CGα与鲽形目和鲈形目鱼类CGα同源性为60％～70％,与鲤形目鱼类CGα同源性为55％～60％.实时荧光定量RT-PCR结果表明,半滑舌鳎CGα mRNA在被检测的12个组织中均有表达,除头肾和脾脏、脾脏和肝脏间表达量差异不显著外,其他组织间表达量差异显著（P＜0.05）;CGα mRNA在垂体组织中大量表达,其次是鳃、肾脏、肌肉、卵巢和脑组织,而在心脏、头肾、肝和脾等组织中表达量很低.本研究为进一步探讨促性腺激素在半滑舌鳎繁殖生理中的作用机制奠定基础.
- 李晓晓柳学周史宝徐永江王珊珊刘芝亮王妍妍
- 关键词：半滑舌鳎CDNA克隆
- 半滑舌鳎垂体细胞体外原代培养方法研究被引量：1
- 2017年
- 本文旨在探讨半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)垂体细胞的体外原代培养方法。采用胰蛋白酶消化法,垂体细胞能够在含有5%的胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的L-15完全培养基中,在24℃培养箱中,在不添加细胞生长因子的条件下培养7天以上,并分泌促性腺激素。结果显示,建立的垂体细胞原代培养方法适用于亲鱼和成鱼。体外原代培养的细胞既可以应用其开展相关的生殖生理研究,也可以从细胞层面探讨营养素发挥生殖调控的作用机制,为亲鱼营养调控机制研究提供便捷的实验材料。
- 黄滨王娜史宝丛林梅陈松林王蔚芳
- 关键词：半滑舌鳎垂体细胞原代培养
- 我国鲆鲽类生殖内分泌研究进展被引量：1
- 2017年
- 鱼类的生殖和苗种繁育是鱼类养殖业持续健康发展的必要前提和关键技术基础之一,是海洋生物技术的重要研究领域。近年来,我国北方沿海鱼类繁殖生理主要围绕鲆鲽类"下丘脑–垂体–性腺轴"的组织结构特征、性腺发育规律、性类固醇激素、生殖相关功能基因内分泌调控机制等方面开展了较系统的研究。本文重点介绍主要养殖鲆鲽类"下丘脑–垂体–性腺轴"中表达的重要功能基因的研究进展,并综述了鲆鲽类生殖相关组织的结构及其内分泌系统特征、性腺发育的生理特性及其与环境因子和激素诱导的关系、性类固醇激素的表达变化规律及其与水温及光周期调控关系等。旨在为鲆鲽类生殖活动的精准调控和建立苗种繁育新技术提供参考。
- 柳学周史宝徐永江王滨刘新富孟振
- 关键词：鲆鲽类生殖内分泌功能基因性类固醇激素生殖调控
- 半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)新型膜孕激素受体基因(mPRL)在卵母细胞成熟过程中的表达特征被引量：2
- 2017年
- 为进一步提高半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)人工育苗技术的水平,对半滑舌鳎新型膜孕激素受体(mPR-like,mPRL)基因的表达特征和作用机制进行了研究。应用实时定量PCR方法分析mPRL mRNA在卵子形成过程中的时序表达,发现半滑舌鳎mPRL mRNA相对表达量的最高值出现在性成熟阶段卵巢的Ⅴ时相卵母细胞。原位杂交分析mPRL mRNA在繁殖相关组织的细胞学定位,发现mPRL mRNA分布在半滑舌鳎性成熟阶段卵巢的卵母细胞膜上;在脑的神经元和垂体内分散的细胞中,mPRL mRNA阳性信号较强。制备半滑舌鳎mPRL的多克隆抗体,采用Western blotting方法检测半滑舌鳎mPRL蛋白在不同组织的表达特征,发现mPRL蛋白的表达量在卵巢、脑、垂体中相对较高,在肝脏、头肾、肾脏中表达量相对较少。免疫组化结果显示,半滑舌鳎mPRL蛋白在卵巢、脑和垂体的细胞学定位与mPRL mRNA定位一致。应用实时定量PCR和Western blotting方法检测促性腺激素调控下半滑舌鳎不同时相卵母细胞mPRL基因mRNA和蛋白的表达变化,结果显示,促性腺激素对半滑舌鳎卵母细胞中mPRL基因mRNA和蛋白表达都有一定的上调作用,特别是对Ⅴ时相卵母细胞中mPRL mRNA和蛋白的表达量提升明显;发现表达量与促性腺激素调控作用具有剂量依存关系。半滑舌鳎mPRL在繁殖相关组织的表达特征表明其通过脑–垂体–卵巢轴参与繁殖调控,同时也揭示了mPRL介导卵母细胞成熟机制。
- 史宝柳学周徐涛李晓妮徐永江张金勇
- 关键词：半滑舌鳎卵母细胞成熟MRNA表达蛋白表达
- 性成熟雌性牙鲆(Paralichthysolivaceus)新型膜孕激素受体(mPRL)的定性定量表达分析
- 2017年
- 在牙鲆(Paralichthys olivaceus)繁殖周期,新型膜孕激素受体基因(mPR-Like,mPRL)在脑–垂体–性腺轴的表达变化规律与性腺发育成熟密切相关。为进一步研究牙鲆mPRL作用机制,本研究对其mRNA和蛋白的表达特征进行了分析。应用实时定量PCR方法分析mPRL mRNA在卵子形成过程中的时序表达,发现牙鲆mPRL mRNA相对表达量的最高值出现在性成熟阶段卵巢的Ⅴ时相卵母细胞。原位杂交分析mPRL mRNA在繁殖相关组织中的细胞学定位,发现mPRL mRNA主要分布在牙鲆性成熟阶段卵巢的卵母细胞膜上;在脑组织的神经元附近区域mPRL mRNA阳性信号也较强。制备牙鲆mPRL的多克隆抗体,采用Western blotting方法检测牙鲆mPRL蛋白在不同组织的表达特性,发现mPRL蛋白表达量在卵巢和脑组织中相对较高,在肝脏、头肾、肾脏中表达量相对较少。免疫组化结果显示,牙鲆mPRL蛋白在卵巢和脑组织的细胞学定位与mPRL mRNA定位一致。牙鲆mPRL在繁殖相关组织的表达特征说明其参与卵母细胞成熟的过程,并通过内分泌方式参与牙鲆的繁殖调控。
- 史宝柳学周徐涛李晓妮徐永江张金勇
- 关键词：牙鲆MRNA表达蛋白表达
- 膜孕激素受体(mPRα)在半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)卵母细胞成熟过程中的表达特征被引量：1
- 2017年
- 通过实时荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)雌性性成熟不同时期、不同时相卵母细胞中膜孕激素受体(mPRα)的表达,通过qRT-PCR和Western blotting方法检测促性腺激素(HCG)对成熟期半滑舌鳎卵母细胞mPRα表达的影响,同时,采用原位杂交、免疫组化和Western blotting方法研究雌性性成熟半滑舌鳎mPRα mRNA和蛋白在各组织中的表达。对半滑舌鳎性成熟不同时期、不同时相卵母细胞中mPRα mRNA的定量研究结果显示,在成熟时期半滑舌鳎Ⅴ时相卵母细胞的mPRα mRNA表达量最高。HCG对成熟期半滑舌鳎卵母细胞mPRα表达的影响研究结果显示,20 IU/ml HCG比10 IU/ml HCG对成熟时期半滑舌鳎卵母细胞mPRα mRNA和蛋白表达的促进作用更明显,进一步证明mPRα介导孕激素参与了卵母细胞成熟的调控。对mPRα组织表达的定量和定位研究中,Western blotting结果显示,在半滑舌鳎的卵巢、垂体、脑、头肾、肾、肝脏组织中均有mPRα蛋白表达,且在脑、垂体和卵巢中表达量较高,表明mPRα在不同组织中都发挥着一定的作用,且在内分泌相关组织如脑、垂体和卵巢中的作用更明显。原位杂交和免疫组化结果显示,mPRα mRNA和蛋白表达明显定位在卵母细胞膜上,且在其他组织的外周和管腔结构表达。本研究为进一步研究mPRα在膜上的信号转导机制提供了理论基础和形态学依据。
- 李晓妮柳学周史宝徐永江张金勇
- 关键词：半滑舌鳎WESTERNBLOTTING
