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siRNA在抗流感病毒感染中的研究进展: 2017年; 季节性流感和全球性大流感的危害已普遍受到社会各界的关注,而目前的流感治疗药物和流感疫苗在使用上存在一定局限性。siRNA及其介导的RNAi过程自发现以来,其高度特异性和强选择性被广泛应用于抗流感病毒感染的研究中,为流感病毒的防治提供了新思路。而随着研究的深入,siRNA仍面临巨大挑战。对siRNA在抗流感病毒感染中的研究进展进行了综述。; 宋彦丽李长贵; 关键词：小干扰核糖核酸 RNA干扰流感病毒

甲型H1N1流感疫苗中神经氨酸酶含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用被引量：4: 2016年; 目的建立甲型H1N1流感疫苗中神经氨酸酶（Neuraminidase,NA）含量双抗体夹心ELISA检测方法,并对其进行验证及初步应用。方法以HCA3通用抗体作为包被抗体,N1抗血清作为显示抗体建立双抗体夹心ELISA,确定线性范围,验证该方法的准确度及精密度,并用该方法对3个厂家共9批次甲型H1N1流感疫苗中的NA含量进行测定。结果 NA质量浓度在0~50 ng/m L时线性良好（r2〉0.99）;回收率为97.54%~104.02%;实验内CV〈10%,实验间CV〈15%。不同厂家的甲型H1N1流感疫苗中NA含量差异很大,NA与HA（血凝素）的百分比最高达到29.85%,而最低的只有7.00%;而同一厂家各批次疫苗间的NA与HA的比例较为稳定。结论成功建立了甲型H1N1流感疫苗中NA含量双抗体夹心ELISA检测方法,该法具有良好的线性及灵敏度,准确度和精密度高,能满足甲型H1N1流感疫苗NA含量的检测需求。; 徐康维顾琴邵铭何蕊刘书珍赵慧黎旭光李长贵; 关键词：流感疫苗神经氨酸酶血凝素酶联免疫吸附测定

甲型H1N1流感疫苗神经氨酸酶含量测定参考品的建立被引量：2: 2015年; 目的建立甲型H1N1流感疫苗神经氨酸酶含量测定参考品。方法对甲型H1N1流感疫苗原液进行还原电泳后,采用免疫印迹,糖蛋白染色,方法初步确定甲流H1N1疫苗原液中神经氨酸酶SDS-PAGE条带位置,切取条带后通过edman N端测序法进行确认。采用Lowry法进行总蛋白定量,SDS-PAGE密度扫描的方法确定神经氨酸酶比例,计算出疫苗原液中神经氨酸酶含量。结果确定甲流疫苗原液中神经氨酸酶在SDS-PAGE中相对分子质量约71 000,对多批次疫苗原液进行测定后,选取神经氨酸酶含量较高的批次进行测定,总蛋白质量浓度为1046.00μg/m L,神经氨酸酶质量分数11.78%。二者相乘得出该批次疫苗原液神经氨酸酶含量为123.22μg/m L。结论研究成功建立了甲型H1N1流感疫苗神经氨酸酶含量测定参考品,其他毒株生产的流感疫苗也可以参考该方法建立NA含量测定参考品。; 徐康维陶磊邵铭刘书珍李长贵; 关键词：神经氨酸酶流感疫苗参考品 SDS-PAGE 免疫印迹

人乳头瘤病毒假病毒中和试验血清起始稀释倍数的研究被引量：1: 2018年; 目的对人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)假病毒中和试验起始稀释倍数进行研究,确定该系统中合适的起始稀释倍数。方法为了排除血清中HPV抗体以及母传抗体的干扰,选取50份15~18月龄的儿童血清作为验证样本。血清以不同的稀释倍数,与适量的假病毒中和。以光学显微镜观察接种细胞的形态,来判定不同稀释度的血清对细胞生长状况的影响;观察感染细胞表达的绿色荧光蛋白的强度及数量,以此考察血清对假病毒感染过程的影响。结果血清稀释度1∶40对细胞生长状况影响较小;该稀释倍数的病毒进入细胞表达的荧光强度与不加血清的阳性对照类似;假病毒感染细胞导致的荧光斑点数与真实病毒对照相比减少了10%,远低于中和试验判定阈值(相对抑制率50%)。结论在该实验系统中,HPV假病毒中和试验的血清起始稀释度以1∶40较为合适。; 赵慧李娟马新兴周凌云李长贵; 关键词：人乳头瘤病毒假病毒

人甲型H7N9禽流感全病毒灭活疫苗和裂解疫苗在小鼠中的免疫原性研究被引量：1: 2015年; 目的比较人甲型H7N9禽流感全病毒灭活疫苗和裂解疫苗在小鼠中的免疫原性，为该疫苗的类型选择提供初步依据。方法采用相同血凝素含量（5μg）的H7N9全病毒灭活和裂解疫苗（含或不含氢氧化铝佐剂共4种类型），分别对BALB／c小鼠进行1针或2针免疫。免疫后，用血凝抑制（hemagglutination inhibition，HI）试验检测血清抗体滴度，比较不同类型疫苗的免疫效果。结果小鼠免疫1针全病毒灭活疫苗后，全部血清阳转，HI抗体几何平均滴度（geometricmeantiter，GMT）为149；免疫2针后，抗体GMT为243。小鼠免疫1针裂解疫苗后无抗体阳转；免疫2针后全部抗体阳转，GMT为139。两种疫苗添加铝佐剂后，诱导的HI抗体GMT仅略有增加。结论H7N9全病毒灭活疫苗在小鼠中的免疫原性较强。在同样类型和剂量的情况下，裂解疫苗需要免疫两次才能达到与全病毒疫苗相同的效果。铝佐剂对免疫原性提升不明显。; 徐康维于丹邵铭刘书珍邹勇李长贵; 关键词：流感疫苗流感病毒A型免疫原性

季节性流感病毒裂解疫苗在小鼠体内的免疫原性分析: 2015年; 目的分析季节性流感病毒裂解疫苗在小鼠体内的免疫原性。方法将3批季节性流感病毒裂解疫苗进行不同倍数稀释后,分别采用1针及2针免疫程序经腹腔免疫小鼠,0.5 ml/只。血凝抑制法测定小鼠血清中H1N1、H3N2和B型抗体滴度,并计算抗体几何平均值（GMT）及疫苗半数有效剂量（ED50）;H1N1亚型及H3N2亚型以≥1∶40为阳转判定标准,B型以≥1：10为阳转判定标准来判定小鼠血清抗体阳转率。结果 3批原倍疫苗H1N1、H3N2和B型阳转率均达100%,随着疫苗稀释度增加,阳转率呈阶梯状下降,ED50分别为0.27～0.46、0.28～0.76和2.08～3.89μg。3批原倍疫苗进行1针免疫程序后,小鼠血清中H1N1、H3N2和B型的GMT分别为1∶184～1∶226、1∶106～1∶184和1∶14～1∶40,随着疫苗稀释度增加,各批疫苗的抗体GMT值均呈现逐步下降趋势;3批1∕3倍疫苗进行2针免疫程序后,H1N1、H3N2和B型的GMT分别为1∶1 372～1∶1 810、1∶905～1∶1 194和1∶343～1∶368。结论 3批季节性流感病毒裂解疫苗在小鼠体内均具有良好的免疫原性,本实验为季节性疫苗免疫原性的评价提供了实验依据。; 刘书珍邵铭于丹李长贵; 关键词：免疫原性半数有效剂量

定量检测Ⅲ型Sabin株脊髓灰质病毒突变的荧光MAPREC法的建立和应用: 2018年; 目的:使用荧光标记代替同位素标记,建立定量检测Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒472位U到C突变比例的MAPREC(mutant analysis by PCR and restriction enzyme cleavage)法。方法:提取病毒样品RNA,反转录合成c DNA后进行非对称PCR反应以生成单链DNA扩增产物,之后采用荧光标记引物进行扩增,合成双链产物,以突变位点敏感的限制性内切酶作用后电泳分离,并分析样品的突变比例。结果:采用建立的方法对4个国际标准品进行检测,100%DNA突变标准品、IS DNA标准品、LMVR标准品以及HMVR标准品的标示值分别为100%、0.9%、0.7%、1.1%,检测结果分别为95.59%、0.84%、0.68%、1.07%,与其标示值一致性良好,并且不同实验间RSD均小于15%。检测9个批次样品,结果突变率均小于1%,符合WHO要求。结论:初步建立了基于荧光素标记的MAPREC方法,可以代替同位素法进行病毒突变的定量检测。; 徐康维张平英志芳何蕊王剑锋江征李长贵; 关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗荧光标记突变率

荧光MAPREC分析Ⅰ型Sabin株脊髓灰质炎病毒突变率方法的建立和应用被引量：1: 2017年; 目的使用CY5荧光标记引物建立定量检测I型Sabin株脊髓灰质炎病毒480-A和525-C突变率的MAPREC。方法提取I型Sabin株脊髓灰质炎病毒样品RNA,反转录合成c DNA后,进行非对称PCR扩增以生成单链DNA,之后采用CY5荧光标记引物进行一步扩增反应以合成双链产物,以DNA内切酶Dde I和Nci I酶切后电泳分离,获取荧光信号,计算样品的突变率。检测4个国际标准品(100%DNA突变标准品、IS DNA标准品、LMVR标准品和HMVR标准品)的突变率,重复5次,验证方法的准确性和精密度,并进行初步应用。结果使用CY5荧光标记引物,建立了定量检测I型Sabin株脊髓灰质炎病毒480-A和525-C突变率的MAPREC。100%DNA突变标准品、IS DNA标准品、LMVR标准品以及HMVR标准品的标示值分别为100.00%、2.00%、1.84%、2.56%,检测结果分别为95.09%、2.06%、1.45%、1.92%,各标准品的实验间CV值均<15%。I型Sabin株口服脊髓灰质炎减毒活疫苗工作种子、单次收获液和原液的突变率为1.05%~1.22%,批间一致性良好。结论初步建立了基于荧光素标记的MAPREC,可以代替同位素法进行I型Sabin株脊髓灰质炎病毒突变率的定量检测。; 徐康维张平英志芳魏文明何蕊王剑锋赵慧李长贵; 关键词：脊髓灰质炎病毒荧光标记突变率

人甲型H7N9禽流感全病毒灭活疫苗在小鼠中的免疫原性被引量：4: 2016年; 目的评价人甲型H7N9禽流感全病毒灭活疫苗在小鼠中的免疫原性。方法分别将H7N9与H1N1、H5N1全病毒灭活疫苗稀释至血凝素抗原(hemagglutinin,HA)浓度分别为30、6、1.2、0.24和0.048μg/ml后,免疫BALB/c小鼠,各10只,0.5 ml/只,采用血凝抑制(hemagglutinin inhibition,HI)试验检测免疫后小鼠血清抗体滴度,计算抗体几何平均滴度(GMT)及半数有效剂量(ED_(50)),并检测免疫后小鼠血清对其他亚型病毒的HI滴度。结果 H7N9组小鼠阳转率与H1N1组较相近,仅H7N9 0.6μg剂量组GMT明显低于H1N1同剂量组(P<0.001),其余剂量组差异无统计学意义(P>0.05);H7N9与H1N1、H5N1全病毒灭活疫苗免疫小鼠ED_(50)分别为0.27、0.12和15μg HA。免疫后血清对其他亚型病毒无交叉反应。结论 H7N9疫苗在小鼠中的免疫原性略低于H1N1疫苗,但明显优于H5N1疫苗。; 徐康维于丹邵铭刘书珍高强李长贵; 关键词：流感疫苗小鼠免疫原性

2009～2016年脊髓灰质炎灭活疫苗批签发汇总及质量分析: 2018年; 脊髓灰质炎（简称脊灰）是由脊灰病毒引起的一种急性肠道传染病,口服脊灰减毒活疫苗（oral poliovirus vaccine,OPV）对控制和消灭脊灰作出了巨大贡献。但OPV使用后有极低的概率引起疫苗相关麻痹型脊灰（vaccine associated paralytic poliomyelitis,VAPP）和疫苗衍生脊灰病毒（vaccine deri-ved poliovirus，VDPV）; 王剑锋英志芳徐康维江征李长贵; 关键词：批签发

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国际科技合作与交流专项项目(2013DFA31680)

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