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广东省科技计划工业攻关项目(20128031800057)
作品数:
2
被引量:9
H指数:2
相关作者:
赖维
许庆芳
龚子鉴
郑跃
侯巍
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相关机构:
中山大学附属第三医院
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发文基金:
广东省科技计划工业攻关项目
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2018
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光老化对皮肤成纤维细胞降解晚期糖基化终末产物的影响
被引量:3
2018年
目的 探讨光老化对皮肤成纤维细胞降解胞内晚期糖基化终末产物(AGE)的影响。方法 连续长波紫外线(UVA)照射诱导成纤维细胞光老化,通过CCK8法、β半乳糖苷酶染色及细胞凋亡率检测验证模型是否构建成功。取原代成纤维细胞分为4组:光老化组(以UVA照射诱导光老化),非光老化组(不做处理),光老化 + AGE组(以UVA照射诱导光老化后加入200 mg/L AGE?BSA孵育),非光老化 + AGE组(未诱导光老化细胞中加入200 mg/L AGE?BSA孵育),孵育4 ~ 72 h后,流式细胞仪检测各组细胞内AGE?BSA荧光强度,激光扫描共聚焦显微镜定位、半定量各组细胞8 h点胞内AGE?BSA。ELISA检测各组细胞24 h内AGE?BSA浓度变化。结果 与对照组(未照射UVA)相比,UVA照射组细胞增殖活性显著下降(t = 7.559,P 〈 0.05),而凋亡率及β半乳糖苷酶染色阳性率显著升高(t值分别为14.075、43.524,均P 〈 0.05)。流式细胞仪检测示,孵育4、8、16、24、48、72 h后,光老化 + AGE组AGE?BSA平均荧光强度分别为293 ± 8.19、359.67 ± 11.59、347 ± 12.29、338 ± 12.77,334.67 ± 14.22、336.3 ± 10.21,非光老化 + AGE组分别为222.33 ± 8.74、276.33 ± 6.11、256.33 ± 5.51、243 ± 10.15,236.33 ± 1.53、240.33 ± 1.52,均分别高于相应时间点光老化组和非光老化组,差异均有统计学意义(P 〈 0.05)。其中光老化 + AGE组AGE?BSA平均荧光强度显著高于相应非光老化 + AGE组细胞(P 〈 0.05)。激光扫描共聚焦显微镜观察发现,吞入胞内的AGE?BSA主要位于溶酶体内,光老化 + AGE组AGE?BSA荧光强度显著高于非光老化 + AGE组,P 〈 0.05。ELISA检测发现,32 h点非光老化 + AGE组细胞AGE浓度较8 h点下降(14.6 ± 1.2)%,显著高于光老化 + AGE组(t = 6.604,P 〈 0.05)。结论 光老化皮肤成纤维细胞对吞入胞内AGE?BSA的降解能力下降,可能
许新雅
郑跃
许庆芳
黎钰莹
黄云芬
龚子鉴
陆春
赖维
关键词:
成纤维细胞
皮肤衰老
细胞衰老
糖基化
UVA照射对皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K表达的影响
被引量:6
2013年
目的探讨皮肤成纤维细胞中组织蛋白酶K(Cathepsin K,CatK)的表达随UVA照射后时间及其剂量的变化。方法原代培养的皮肤成纤维细胞来自儿童包皮,10代以内的细胞行后续实验。先以10J/em2UVA照射皮肤成纤维细胞,在照射后24、48、72h提取照射组和对照组细胞蛋白和mRNA。再以10J/cm2、20J/cm2、30J/cm2UVA照射皮肤成纤维细胞,在照射后48h收集细胞。用RT—PCR和Western印迹法分别检测各组间CatKmRNA、蛋白的表达的差异。结果10J/cm2UVA照射后1、2、3d,照射组CatKmRNA表达分别为0.351±0.038(对照组0.177±0.006)、0.510±0.017(对照组0.176±0.002)、0.313±0.012(对照组0.173±0.002)。照射组CatK蛋白灰度值分别为1.76±0.27(对照组0.82±0.45)、2.97±0.36(对照组1.58±0.15)、2.23±0.14(对照组1.29±0.32),照射组CatKmRNA、蛋白表达均较对照组升高(P〈0.05),且以照射后第2天表达最高。10、20、30J/cmzUVA照射后,48h皮肤成纤维细胞中CatKmRNA表达分别为对照组的2.34、2.91、3.18倍,CatK蛋白表达分别为对照组的1.77、2.82、3.64倍,均随UVA剂量的升高而增加,其差异有统计学意义(P〈0.05)。结论CatK在UVA照射后皮肤成纤维细胞中的表达升高。
许庆芳
侯巍
刘晨
郑跃
龚子鉴
赖维
关键词:
成纤维细胞
组织蛋白酶K
紫外线
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