国家自然科学基金(N030270607)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：闻颖刘沛陆旭姜旭更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院中国刑事警察学院更多>>
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- 肿瘤坏死因子α增强肾小球系膜细胞胞内钙释放参与肝肾综合征发病机制被引量：4
- 2013年
- 目的研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）对肾小球系膜细胞（GMCs）胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）及细胞收缩的影响，证明TNF-α通过1，4，5-三磷酸肌醇受体（IP3Rs）增强GMCs对缩血管物质的易感性是肝肾综合征的重要机制。方法应用大鼠GMCs株，测量时均选无钙缓冲液及内皮素（ET）刺激。分正常对照ET刺激组（0h组）、TNF-α处理4hET刺激组（4h组）、TNF-α处理24hET刺激组（24h组）；另设上述3组于ET前10min加入IP3Rs阻断剂2-氨基乙氧基联苯硼酸盐（2-APB）。应用Fluo-3／AM标记及激光共聚焦显微镜，观察TNF-α预处理后GMCs对ET刺激后[ca2＋]i的变化及2-APB阻断后的变化。同时测量各组GMCs收缩前后表面积的变化以明确收缩幅度。结果ET刺激可使GMCs在短时间内[Ca22＋]i迅速、显著增加，TNF-α4h、24h组[Ca2＋]i上升幅度尤为明显[4h：（648．08±267．11）nmol／L；24h：（879．30±260．29）nmol／L；0h：（619．93±258．94）nmol／L，F：5．486，4hvs0h：P〈0．05；24hvs0h：P〈0．05；24hvs4h：P〉0．05]。2-APB阻断后3组细胞对ET刺激均失去反应，[Ca2＋]i无上升。ET刺激可使各组细胞面积缩小；TNF-α 4h、24h组上述效应更加明显[4h：（2198±340）μm2；24h：（2260±553）μm2；0h：（2436±474）μm2，F=4．001，4hvs0h：P〈0．05；24hvs0h：P〈0．05；24hvs4h：P〉0．05）。结论TNF-α可增加ET刺激引起的[Ca2＋]i上升进而引起细胞收缩，并证明是通过IP3Rs通路产生效应的，这可能是肝肾综合征时肾脏对缩血管物质产生高敏性进而引起。肾小球滤过率下降的重要机制。
- 闻颖陆旭刘沛
- 关键词：肿瘤坏死因子Α代谢肾小球膜细胞学肝肾综合征
- TNFα增强肾小球系膜细胞Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体表达受PKCα调控
- 2013年
- 目的 通过研究蛋白激酶Cα（PKCα）参与调控肿瘤坏死因子α（TNFα）增强肾小球系膜细胞Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体（IP3RI）表达的信号机制,揭示TNFα引起肝肾综合征肾小球滤过率（GFR）下降的分子机制.方法 选择大鼠系膜细胞株（GMCs）进行体外培养.按TNFα处理GMCs的不同时间点,分为对照组（D）、TNFα-2 h组、TNFα-4 h组、NFα-8 h组、TNFα-24 h组,另设2组分别为Sanfingol-8 h组（S）、TNFα＋ Sanfingol共培养8h组（TS）,共6组.应用免疫细胞化学染色、Western blot、Real time-PCR检测方法,观察TNFα孵育的GMCs中IP3RI表达的变化.结果 免疫细胞化学染色发现：IP3RI主要分布于GMCs的胞浆内,对照组阳性信号较弱,TNFα处理各组棕褐色阳性信号增强,以TNFα-8 h组最明显.Western blot分析发现：TNFα-4 h组、TNFα-8 h组、TNFα-24 h组与对照组差异有统计学意义（4 h：1.82±0.63,8 h：2.95±0.66,24 h：2.48±0.72,D：1±0.02,F=9.24,P＜0.05）.其中TNFα-8 h组、TNFα-24 h组IP3RI表达最高（P＜0.05）.S组、TS组与对照组差异无统计学意义（S：1.39 ±0.65,TS：1.35±0.37,P＞0.05）.Real time-PCR发现：TNFα处理各时间点组与对照组相比IP3 RI表达均明显增加,差异有统计学意义（2 h：3.35±1.97;4 h：3.16±1.35,8 h：3.70±1.76;24 h：4.49±1.70,D：1±0.01,F=6.167,P＜0.05）. TNFα各处理组组间差异无统计学意义（P＞0.05）.S组、TS组与对照组比较差异无统计学意义（S：1.53±0.79,TS：1.32±0.38,P＞0.05）.结论 IP3 RI主要分布于GMCs的胞浆内,TNFα可增加肾小球系膜细胞IP3 RI蛋白、mRNA的表达,并可被PKCα抑制剂Sanfingol所阻断,这可能是肝肾综合征时TNFα引起GFR下降的重要信号机制.
- 闻颖姜旭刘沛
- 关键词：蛋白激酶CΑ肝肾综合征肾小球系膜细胞
