国家高技术研究发展计划(2002AA206651)
- 作品数：36 被引量：154H指数：7
- 相关作者：石德顺陆凤花韦精卫杨素芳韦英明更多>>
- 相关机构：广西大学广西中医学院中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广西大学博士科研启动基金广西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 亚牛磺酸对猪胚胎体外培养效果的影响被引量：1
- 2010年
- 为了探讨亚牛磺酸的浓度对猪胚胎体外培养效果的影响,试验以孤雌激活胚胎为研究对象,将NCSU-23中的亚牛磺酸浓度从原来的5mmol/L降低到2.5,1.0,0.5mmol/L,检测猪卵母细胞激活后的分裂率和囊胚发育率。结果表明:各种浓度亚牛磺酸处理后的分裂率和囊胚发育率(30.7%、27.6%、22.8%、26.5%)差异不显著(P>0.05);但不使用亚牛磺酸则导致囊胚发育率极显著下降(30.7%vs1.4%,P<0.01)。结果说明亚牛磺酸是猪胚胎培养液必不可少的重要成分,但其浓度可下调至0.5mmol/L。
- 吴正三卞桂华陆凤花杨素芳石德顺
- 关键词：猪胚胎体外培养囊胚率
- 兔·卵·母·细·胞·孤·雌·激·活·的·研·究被引量：2
- 2006年
- 本研究探讨了兔卵母细胞孤雌激活的方法。兔卵母细胞经7%乙醇单独激活处理5min的卵裂率(13.0%),显著低于乙醇处理后在2mmol/LDMAP继续处理3h(48.1%)和5μmol/L离子霉素处理后在DMAP继续处理3h的卵母细胞(92.2%);离子霉素+DMAP处理组的囊胚发育率(27.1%)亦显著(P<0.05)高于乙醇+DMAP处理组(15.4%)和乙醇单独处理组(0%)。当用离子霉素和DMAP激活处理时,注射hCG后18h卵母细胞的卵裂率(92.1%)和囊胚率(35.3%)最高2,4h后卵母细胞的卵裂率(19.0%)和囊胚发育率(4.2%)均显著(P<0.05)下降。卵母细胞经离子霉素激活处理后,在DMAP继续处理1、35、h的卵裂率差异显著(P<0.05);而囊胚发育率无显著(P>0.05)差异。离子霉素和DMAP处理后再电激1次对卵母细胞的卵裂率(83.3%、80.0%)和囊胚率(30.0%、27.0%)无显著(P>0.05)影响。以上研究表明:离子霉素+DMAP是兔卵母细胞最有效的激活方法,注射hCG后18h的卵母细胞可取得较好的激活效果。
- 崔奎青刘庆友汤刚彬石德顺
- 关键词：畜牧学孤雌激活
- EGF对牛卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响被引量：8
- 2006年
- 在卵母细胞体外成熟液(含FSH)中分别添加10,30,50ng/ml表皮生长因子(EGF),24h后检查成熟率,并进行孤雌激活。结果表明:添加10ng/ml、30ng/mlEGF组牛卵母细胞成熟率较对照组(未添加EGF)无显著差异(79.8%vs71.5%vs70.4%,p>0.05),但EGF添加至50ng/ml时牛卵母细胞第一极体排出率显著提高,达85.4%(P<0.01);在实验1的基础上,比较培养液中添加10ng/ml、30ng/ml、50ng/mlEGF对牛孤雌激活胚胎体外发育的影响,结果发现在培养液中添加EGF并不能显著提高牛卵母细胞体外孤雌发育囊胚率(P>0.05),但可显著提高其囊胚孵化率(P<0.01)。
- 韦精卫韦英明孟凡丽杨素芳石德顺
- 关键词：卵母细胞体外成熟表皮生长因子孤雌发育
- 不同来源的供体细胞对水牛体细胞核移植效果的影响被引量：6
- 2005年
- 采用电融合方法,探讨不同来源的供体细胞对水牛核移植效果的影响。体外成熟培养22～24h的水牛卵母细胞,在含有5μg/mL细胞松弛素B的操作液中进行去核,然后将经0.1μg/mLAphidicolin(APD)+0.5%FBS培养2～9d的水牛不同来源的供体细胞,注射到去核的卵母细胞卵周隙中,电融合形成重构胚。重构胚经5μmol/L离子霉素激活处理5min,并在2mmol/L的6-DMAP中培养3h后,在含有颗粒细胞单层细胞的微滴中培养7～9d,观察其卵裂和胚胎发育情况。结果发现,来自水牛胎儿耳部或腹部组织块的成纤维细胞用作供体细胞,其重组胚的融合率及体外发育能力差异不显著(P>0.05),且细胞培养方法(组织块法或酶消化法)对其核移植效果没有影响;来自编号011010的胎儿耳皮成纤维细胞重组胚的囊胚发育率显著高于来自编号030323和030410细胞(31.45%vs10.96%和14.49%,P<0.05),但它们的融合率、卵裂率无显著差异(P>0.05)。以上结果表明:经不同培养方法培养的细胞或来自身体不同部位的组织的成纤维细胞均可作为核移植研究的供体细胞,但是水牛体细胞核移植效果受供体的个体差异的影响。
- 陆凤花石德顺谢英韦英明潘红平韦精卫卞桂华成俊萍王晓丽
- 关键词：水牛胎儿成纤维细胞核移植
- 水牛β-酪蛋白5′启动区的克隆和序列分析被引量：2
- 2005年
- 水牛β-酪蛋白是水牛奶中最重要的蛋白质之一。本实验参照奶牛、绵羊、山羊的β-酪蛋白结构基因序列设计了一对引物P1、P2,以本地水牛基因组为模板,采用高保真ExTaq酶,LA-PCR扩增得到水牛β-酪蛋白基因的5′启动区序列,克隆到pMD18-T上,测序后得到长4.4kb的序列。与牛、山羊和绵羊同区段基因序列进行多重序列比较,并根据多重序列比较结果预测了该区中包含的核心启动子序列TATA盒、5′-UTR(非翻译区)、乳腺组织特异性转录因子(MGF)等重要元件。以该区序列构建的部分反刍动物的进化树与实际的进化关系保持了很好的一致。
- 崔奎青刘庆友石德顺李海涛汤刚彬
- 关键词：启动区顺式作用元件
- 微卫星标记分析广西水牛遗传多样性被引量：5
- 2008年
- 为研究广西沼泽型水牛(Bubalus bubalis)核基因组的多态性,采用23对荧光标记微卫星引物,对随机抽取的60个广西本地水牛样本进行了PCR检测。结果表明,23对引物中,有19对可以获得特异性产物且存在多态,平均有效等位基因数为4.0189,基因座ILSTS086含有13个等位基因;各微卫星基因座的平均杂合度变化范围为0.1852~0.4722,ILSTS019基因座平均杂合度最高(0.4722),而ILSTS017平均杂合度最低(0.1852);群体基因平均多态信息含量(PIC)为0.6639,19个标记中有18个PIC大于0.5,属高度多态位点。
- 崔奎青刘庆友李秀林黄银花王志强石德顺李宁
- 关键词：微卫星水牛
- 小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备的研究被引量：6
- 2005年
- 研究主要探讨在制备小鼠胎儿成纤维饲养层中,不同处理条件对小鼠胎儿成纤维细胞分裂与存活的影响.结果表明:小鼠胎儿成纤维细胞用适当处理浓度的丝裂霉素-C或适当强度的γ-射线处理一定的时间(10 μg/mL 1～4 h,20 μg/mL 1～2.5 h或21 Gy和28 Gy各处理1 h),能有效地抑制其分裂,且不影响其活力.
- 黄奔蒙超衡石德顺黎强杨素芳
- 关键词：小鼠胚胎干细胞成纤维细胞饲养层细胞分裂细胞活力
- 细胞松弛素B(CB)对水牛卵母细胞玻璃化冷冻保存的影响被引量：7
- 2008年
- 研究主要探讨冷冻前细胞松弛素B(CB)预处理水牛MⅡ期卵母细胞对其冷冻效果的影响。以水牛MⅡ期的卵母细胞为材料,通过玻璃毛细管(GMP)和玻璃化冷冻液EDS33(16.5%EG+16.5%DMSO+Sucrose)对水牛MⅡ期的卵母细胞进行两步法玻璃化冷冻保存,即卵母细胞首先放入预平衡液(7.5%EG+7.5%DMSO+Sucrose)中平衡3 min,然后再移入玻璃化冷冻液中30 s后装管直接投入液氮。冷冻前卵母细胞随机分为2组,一组用7.5μg/mL CB预处理30 min,另一组未用CB预处理作对照组,然后都冷冻保存。解冻是在蔗糖浓度逐渐降低的解冻液中进行的。解冻后存活的卵母细胞进行孤雌激活,以分裂率和囊胚发育率作为评定卵母细胞冷冻效果的指标。结果发现,GMP组和GMP+CB组卵母细胞解冻后的存活率(88.89%、94.20%)和培养后发育到囊胚的比率(8.82%、14.55%)差异均不显著(P>0.05),但GMP组和GMP+CB组存活卵母细胞激活后的分裂率差异显著(32.69%、55.56%,P<0.05),所以细胞松弛素B预处理可以提高GMP冷冻卵母细胞的发育能力。
- 卞桂华陈自洪杨娟陆凤花石德顺
- 关键词：卵母细胞囊胚玻璃化冷冻
- 供体核种类对水牛核移植效果的影响被引量：20
- 2004年
- 采用电融合法和直接注射法进行核移植,以比较不同来源和不同类型水牛供体细胞的核移植效果。当用电融合法进行核移植时,成体耳部成纤维细胞的融合率(46.0%)、卵裂率(53.9%)和囊胚发育率(10.9%),均显著低于胎儿成纤维细胞(64.5%,70.1%和21.6%)、胎儿皮肤细胞(71.5%,70.8%和22.1%)以及卵巢颗粒细胞(88.2%,79.1%和25.5%);后三种细胞间的卵裂率和囊胚发育率无显著差异,但卵巢颗粒细胞的融合率显著高于胎儿成纤维细胞和胎儿皮肤细胞(P<0.05)。当用直接注射法进行核移植时,胎儿皮肤细胞注核后的存活率(78.2%)、卵裂率(41.6%)均显著低于成体耳部成纤维细胞(88.6%和57.4%)和胎儿成纤维细胞(85.8%和65.0%)。胎儿成纤维细胞注核后的卵裂率和囊胚发育率(23.3%)均显著高于胎儿皮肤细胞(10.1%)和成体耳部成纤维细胞(12.0%)。结果表明:(1)采用直接注核法进行核移植时,胎儿成纤维细胞作为核供体较为合适,而采用电融合法进行核移植时,用颗粒细胞作核供体更为适宜;(2)胎儿成纤维细胞的核移植效果好于成体成纤维细胞。
- 杨素芳石德顺韩杰韦英明韦精卫陆凤花牛向丽
- 关键词：水牛卵母细胞核移植卵巢颗粒细胞胎儿成纤维细胞
- 水牛体细胞核移植方法的研究被引量：6
- 2005年
- 探讨电融合参数对水牛体细胞核移植效果的影响.体外成熟培养22～24 h的水牛卵母细胞,在含有5 μg/mL细胞松弛素的操作液中进行去核,然后将经0.1 mg/L Aphidicolin (APD)处理1 d, 再用0.5% FBS培养2～9 d的水牛耳皮成纤维细胞或颗粒细胞注射到去核的卵母细胞卵周隙中,再经电融合形成重构胚.重构胚经5 μmol/L离子霉素激活处理5 min并在2 mmol/L的6-DMAP中培养3 h后,在含有颗粒细胞单层细胞的微滴中(30 μL)培养7～9 d,观察其卵裂和胚胎发育情况.当电融合的电场强度为1 500 V·μs/mm(电压100 V/mm×脉时15 μs)时,电脉冲3次,颗粒细胞核移植的融合率为74.18%,分裂率为71.82%,囊胚发育率为10%,融合率显著高于2次电脉冲(52.03%,P<0.05),卵裂率显著高于4次电脉冲(53.95%,P<0.05);当电脉冲次数为3次时,电场强度为2 000 V·μs/mm的分裂率(53.54%)显著低于1 500 V·μs/mm,2 500 V·μs/mm的融合率(62.0%)和分裂率(53.23%)均显著低于1 500 V·μs/mm(P<0.05).采用耳皮成纤维细胞作供核的融合率(59.75%)和分裂率(57.45%)均显著低于颗粒细胞.染色体组型分析显示,66.7%的核移植胚胎具有正常的供体细胞二倍体核型.将来自1头22岁的摩拉公牛耳皮成纤维细胞的2枚冻胚移植给受体母牛,妊娠到215 d时发生流产.结果表明,高龄水牛的体细胞核移植胚胎能发育到妊娠晚期;水牛体细胞核移植的适宜电融合参数为100 V/mm,15μs,3次电脉冲;颗粒细胞的电融合核移植效果优于耳皮成纤维细胞.
- 陆凤花石德顺韦英明潘红平
- 关键词：颗粒细胞电脉冲水牛体细胞核移植电融合
