国家科技重大专项(2012ZX09301003-003)
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
- 相关作者：王莉莉龙隆李微冯帆苏瑞斌更多>>
- 相关机构：军事医学科学院广西医科大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用高内涵分析技术识别雄激素受体激动剂被引量：8
- 2014年
- 目的应用高内涵分析(HCA)技术快速识别对雄激素受体(AR)具有激动作用的药物。方法以稳定表达AR-增强绿色荧光蛋白融合蛋白(AR-EGFP)的人骨肉瘤细胞U2OS为模型,采用HCA技术观察本实验室收集的98个上市药物或优选化合物对AR-EGFP细胞核转位和核颗粒形成的影响,筛选对AR具有激活作用的化合物,分析其浓度效应关系;并用前列腺癌细胞PC-3(AR-/-)和LINCaP(AR+/+)的AR荧光素酶报告基因的筛选方法进行验证。结果 HCA筛选发现,在98个受试药物中,乐卡地平、螺内酯、异丙肾上腺素和组胺能浓度依赖地促进AR-EGFP细胞核转位,其EC50分别为0.067±0.008,0.21±0.04,0.87±0.26和(4.53±1.04)μmol·L-1;促进AR-EGFP细胞核颗粒形成,其EC50分别为0.023±0.006,0.82±0.13,3.00±1.68和(4.76±1.57)μmol·L-1;地塞米松≥3μmol·L-1时也表现出促进AR-EGFP细胞核转位和颗粒形成的作用。荧光素酶报告基因结果显示,在PC-3和LINCaP细胞中,乐卡地平、异丙肾上腺素、螺内酯、组胺和地塞米松均可促进外源和内源AR的转录活性,与HCA结果基本一致,但结果高于HCA筛选测得的EC50。结论以荧光标记细胞为基础的HCA技术是灵敏和快速识别AR激动剂的分析方法。乐卡地平、螺内酯、异丙肾上腺素、组胺和地塞米松具有AR激动活性。
- 冯帆龙隆李微王莉莉
- 关键词：雄激素受体激动剂
- 过氧化物酶体增殖物激活受体γ与适应性产热调节被引量：3
- 2015年
- 适应性产热是通过非颤抖性产热维持机体能量代谢平衡的重要方式。研究发现,小鼠体内除棕色脂肪组织外,一些诱因(如寒冷)刺激皮下白色脂肪组织生成的米黄色脂肪也是非颤抖性产热组织。通过调节机体非颤抖性产热过程,促进体内过剩能量以热量形式耗散,可能为肥胖、胰岛素抵抗了等能量代谢紊乱相关病症的治疗提供更安全有效的治疗手段。核受体过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)是调节脂肪组织功能的重要转录因子,其激动剂在药理学剂量下具有诱导米黄色脂肪细胞生成的作用。本文综述了PPARγ在适应性产热中的调节作用,分析了PPARγ选择性调节作用在非颤抖性产热中的可能机制,以期为新一代胰岛素增敏剂的研发提供理论依据。
- 严黄颉欣妮徐成周晓棉王莉莉
- 关键词：适应性产热过氧化物酶体增殖物激活受体Γ棕色脂肪组织
- 稳定表达人源α2A-肾上腺素受体细胞系的建立被引量：2
- 2016年
- 目的建立稳定表达人源α2A-肾上腺素能受体(α2A-AR)的细胞系。方法将带有潮霉素B(Hygro)抗性的α2A-AR(pc DNA3.1/Hygro-HA-α2A-AR)重组质粒通过脂质体介导转染至已表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的蛋白激酶A催化亚基(PKAcat)的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(以Hygro 200 mg·L-1进行压力筛选后,采用PKA重分布实验筛选阳性克隆),然后使用实时定量PCR验证α2A-AR受体在转录水平的表达,最后以时间分辨荧光共振能量转移免疫实验检测c AMP含量以鉴定受体功能。结果 PKA重分布实验结果表明,CHO-PKAcat-α2A-AR 7号克隆反应性良好;与CHO-PKAcat-EGFP细胞相比,该细胞系α2A-AR m RNA表达水平较高(P<0.01),且多次传代能保持稳定;在α2A-AR激动剂作用后,能显著抑制forskolin引起的c AMP水平升高(P<0.01)。结论成功构建稳定表达α2A-AR的CHO-PKAcat-α2A-AR细胞系,可用于药物筛选及机制研究。
- 杨怿李玉蕾刘梦周培岚苏瑞斌宫泽辉
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞蛋白激酶AAMP
- 阿片受体泛素化机制及其对受体功能的影响被引量：4
- 2015年
- 阿片受体是一类重要的G蛋白偶联受体(GPCR),是内源性阿片肽及阿片类药物结合的靶点,阿片受体激活后对神经系统、免疫及内分泌系统具有调节作用。但阿片受体在反复激活后,容易出现耐受,导致阿片成瘾。受体的内吞和再循环对受体复敏具有重要意义。近年来研究发现,受体的泛素化修饰参与了GPCR的转运过程,并且多数配体作用于阿片受体后,受体的泛素化水平明显升高。将阿片受体的泛素化位点突变后,对不同阿片受体亚型的内吞和降解过程产生了不同的影响,进而影响了阿片受体的信号转导过程。本文着重对阿片受体3种亚型的泛素化修饰特点及泛素化对受体转运的调节作用进行综述。
- 江洁冰周培岚郑志兵苏瑞斌
- 关键词：G蛋白偶联受体泛素化阿片受体溶酶体
- 新型微管靶向化合物WX-127-07体外抗肿瘤活性及作用机制被引量：3
- 2014年
- 目的：体外评价新型微管靶向化合物WX-127-07的抗肿瘤活性，并探讨其作用机制。方法以3种微管靶向药物紫杉醇、长春新碱和秋水仙碱为阳性对照，化合物WX-127-07在0.3~300nmol·L-1浓度下作用于5种细胞，72h后用SRB法检测细胞增殖抑制活性，用流式细胞术检测细胞周期阻滞，用高内涵分析（HCA）技术分析该化合物的细胞毒性特征及其与肿瘤和炎症等相关的信号转导途径，用秋水仙碱/荧光-长春碱竞争实验和胰酶消化微管蛋白实验在分子水平测定该化合物的微管蛋白结合位点。结果WX-127-07对肝癌HepG2细胞、宫颈癌HeLa细胞、非小细胞肺癌A549细胞、人胚肺成纤维细胞及脐静脉血管内皮细胞增殖均具有明显的抑制活性，lC50分别为4.47±0.05，5.18±0.08，4.90±0.19，4.10±0.16和（5.04±0.08）nmol·L-1，低于秋水仙碱〔lC50分别为21.17±1.22，14.19±0.53，43.80±1.64，145.89±10.97和（27.67±1.79）nmol·L-1〕和长春新碱〔lC50分别为16.51±0.36，16.76±0.33，27.80±2.75，43.80±1.48和（9.15±0.78）nmol·L-1〕，低于或近似于紫杉醇〔lC50分别为10.68±0.61，12.86±0.25，4.81±0.61，102.07±15.17和（3.04±0.12）nmol·L-1〕。用HCA技术进行细胞多参数分析显示，与长春新碱和秋水仙碱相似，WX-127-07浓度依赖性地诱发A549细胞微管含量降低（P＝0.0075），且作用浓度低于对照药物紫杉醇、长春新碱和秋水仙碱；WX-127-07、紫杉醇、长春新碱和秋水仙碱均能诱发A549细胞出现G2/M期阻滞，并使HepG2细胞核膜通透性增加，出现早期凋亡现象，但不影响肿瘤以及炎症相关的信号通路。微管蛋白位点竞争实验结果表明，WX-127-07浓度依赖性地抑制秋水仙碱与微管蛋白的结合（P＝0.0259）。化合物与微管蛋白作用后用胰酶消化，其产物经SDS电泳，发现WX-127-07作用后的条带与秋水仙碱相似。结论WX-127-07具有较强的体外抗肿瘤细胞增
- 关芳龙隆李微冯帆李菲菲谢蓝王莉莉
- 关键词：微管抗肿瘤药秋水仙碱
