中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(QN2011062)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：王立新刘小林李锋刚杨辉胡伟更多>>
- 相关机构：陕西省农业分子生物学重点实验室西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项陕西省科技攻关计划陕西省农业科技攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 大鲵铁蛋白重链FTH基因的克隆、鉴定及表达分析被引量：4
- 2014年
- 从大鲵皮肤cDNA文库中,筛选出大鲵铁蛋白重链AdFTH的cDNA序列,其全长为864 bp,开放阅读框为531 bp,编码176个氨基酸,5′和3′非翻译编码区(Untranslated region,UTR)分别为120 bp和214 bp,预测蛋白质的分子量为20.6 kD,理论等电点PI为5.41,预测蛋白无信号肽及跨膜结构,在5′-UTR的22—51 bp处有一个特殊的铁反应元件(Iron response element,IRE)。同源性和系统进化分析表明,铁蛋白重链在进化上有着较高的保守性。实时定量PCR结果表明,大鲵铁蛋白重链mRNA在各个组织中广泛表达,其中肝脏的表达量高于其他8种组织,表明肝脏是大鲵主要的参与铁储存代谢的器官。成功构建了大鲵铁蛋白重链的重组表达载体pET32a-AdFTH,利用大肠杆菌Escherichia coli BL21表达系统和Ni2+亲和层析方法,获得了纯度较高的重组大鲵铁蛋白,并证实重组大鲵铁蛋白(Recombinant AdFTH protein,rAdFTH)具有氧化和吸收铁离子的功能,为进一步制备AdFTH抗体了解其在大鲵体内的多种作用机制打下坚实的基础。
- 杨辉李锋刚蓝青景胡伟刘小林王立新
- 关键词：原核表达
- 大鲵α1-血红蛋白基因的生物信息学分析及组织表达研究被引量：1
- 2012年
- 从大鲵皮肤cDNA文库中分离获得大鲵α1-血红蛋白基因全长cDNA序列,生物信息学分析表明,大鲵α-血红蛋白基因全长cDNA序列为594bp,开放阅读框共432bp,编码144个氨基酸,编码的大鲵α1-血红蛋白推测的理论分子量为16.05kDa,等电点为6.44。氨基酸组成中酸性氨基酸11.9%,中性氨基酸69.9%,碱性氨基酸18.2%。结构分析表明,该蛋白没有信号肽,但在100～122个氨基酸处以及98～122个氨基酸处分别有由里向外、由外向里的跨膜螺旋区,二级结构以α-螺旋为主。氨基酸序进行同源性列比对表明与人、猕猴的亲缘关系最近,和牛蛙的亲缘关系最低只有35%。荧光定量PCR结果表明,α1-血红蛋白基因在肌肉中表达量最高,在胃中最低。
- 杨辉艾闽李锋刚刘小林王立新
- 关键词：生物信息学分析
- 大鲵胸腺素β-4全长基因的分离与表达研究被引量：2
- 2013年
- 【目的】对大鲵胸腺素β-4基因进行生物信息学分析和原核表达载体构建,为大鲵胸腺素β-4蛋白生理活性的深入研究奠定基础。【方法】从大鲵皮肤cDNA文库中分离获得了大鲵胸腺素β-4基因全长序列,采用多种生物软件对其进行生物信息学分析,用定量PCR研究胸腺素β-4基因在不同组织的表达情况,并以pET32a为载体构建该基因原核表达载体。【结果】胸腺素β-4基因全长共699bp,其中开放阅读框135bp,5′-UTR 87bp,3′-UTR为474bp,该基因编码45个氨基酸,表达蛋白的理论分子质量为5 141.59u,等电点为5.34;结构分析发现,大鲵胸腺素β-4蛋白氨基酸序列的第7～43位处有"THY"特征模体,没有跨膜螺旋区、细胞膜外在跨膜结构域。氨基酸序列进化关系表明,大鲵与人、大鼠、牛、猩猩、鸡、倭蛙等动物亲缘关系较近,氨基酸同源性高于85%;与猪和爪蟾的亲缘关系次之,氨基酸同源性均为83%;而与虹鳟、大菱鲆、斑马鱼等鱼类的亲缘关系较远,氨基酸同源性低于80%。荧光定量PCR检测结果表明,胸腺素β-4基因在大鲵肺中的相对表达量最高。SDS-PAGE电泳结果表明,构建的大鲵胸腺素β-4原核表达重组菌株pET32a-Tβ4,在37℃条件下,用终浓度1.0mmol/mL IPTG诱导4h后,大鲵胸腺素β-4基因获得了较高的表达。【结论】分离获得了大鲵胸腺素β-4基因全长cDNA序列,该基因氨基酸序列与人等高等动物的同源性最高,能在大鲵肺中及大肠杆菌中获得高效表达。
- 艾闽杨辉胡伟李锋刚刘小林王立新
