中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(QN2011061)
- 作品数：9 被引量：28H指数：3
- 相关作者：胡建宏王春伟徐秀容张煜坤洪洁赟更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学陕西省白水县家畜改良站鹿儿岛大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织冷冻效果的研究
- 2014年
- 通过探讨不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织冷冻保存的效果以及睾丸组织低损伤冷冻保存的机理,为保护珍稀濒危物种、恢复人类未成年男性生育能力等提供依据。研究将二甲基亚砜(DMSO)、甘油、丙二醇、蔗糖和葡萄籽原花青素(GSP)五种冷冻保护剂设置八个浓度梯度,用以进行犊牛睾丸组织的冷冻保存,7d后解冻,解冻后检测睾丸组织内的一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和细胞活率。结果表明,经10%DMSO、丙二醇、蔗糖和GSP冷冻犊牛睾丸组织7d解冻后,组织细胞活率分别达到77%、62%、34%和24%,DMSO组优于其他组(P<0.05);NO水平分别为0.52、0.51、0.64和0.49μmol/mgprot,NOS活性分别为1.03、0.98、1.04和0.96U/mgprot,GSP组优于其他组(P<0.05)。7.5%甘油冷冻犊牛睾丸7d解冻后,细胞活率、NO和NOS分别为41%、0.54μmol/mgprot和1.07U/mgprot,优于组内其他浓度(P<0.05)。表明10%DMSO能有效地冷冻保存犊牛睾丸组织。
- 王春伟洪洁赟张卫艺吕妍郭秋平赵军胡建宏
- 关键词：冷冻保护剂一氧化氮一氧化氮合酶
- 哺乳动物精原干细胞研究进展
- 2012年
- 雄性生殖干细胞,即精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)可以自我更新产生大量可发育为精子的已经分化了的生殖细胞,并将遗传信息传递到下一代。SSCs是成体中唯一的生殖干细胞,因为所有雌性生殖干细胞在出生前已经停止分化。本文首先总结了SSCs的起源、标志物和分离纯化方法,然后重点概述啮齿类动物、灵长类以及人类SSCs的移植以及诱导分化方法,最后论述了人类SSCs体外培养和移植技术的现状以及在人类医学上的应用前景。
- 索丽娟凡志国胡建宏解广勤刘玉莫金鑫强者
- 关键词：精原干细胞诱导分化
- 牛精液冷冻保护剂研究进展被引量：10
- 2014年
- 牛的人工授精技术是目前应用最为广泛的动物繁殖技术之一，对牛的遗传改良做出了巨大贡献。但是，在冷冻一解冻过程中仍然有大约40％～50％的精子失去活性，限制良种公牛种用性能的发挥。论文在分析精子冷冻保存原理的基础上，阐述了渗透性、非渗透性冷冻保护剂以及低密度脂蛋白对牛精子的冷冻保护作用，以期为开发新型冷冻保护剂的研究提供一定参考，进一步提升牛冷冻精液的质量。
- 贾永宏朱庆超杨海涛武致存高璞李梅胡建宏
- GDNF和LIF对小鼠精原干细胞体外增殖的影响被引量：6
- 2012年
- 【目的】探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和白血病抑制因子(LIF)对小鼠精原干细胞(SSCs)体外增殖的影响,为后续SSCs的诱导分化、转基因动物生产、基因治疗等研究奠定基础。【方法】收集6～8日龄小鼠睾丸,采用机械法和2步酶消化法获得细胞悬液。通过多次差异贴壁法分离纯化SSCs和支持细胞,采用碱性磷酸酶(AP)染色和RT-PCR检测Ngn3和Oct4基因2种方法对SSCs进行鉴定。采用单独添加GDNF(添加量为0,10,20,40ng/mL)或LIF(添加量为0,500,1 000,1 500U/mL)的无血清DMEM/F12培养基培养SSCs,于培养第3,5,7天取样,同时用添加GDNF和LIF(各因子单独添加量两两组合)的无血清DMEM/F12培养基培养SSCs,于培养第3,4,5天取样,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测GDNF、LIF对SSCs体外增殖的单因子效应和配伍效应。【结果】与对照组相比,不论培养时间如何,单独添加20和40ng/mL的GDNF可以显著促进SSCs增殖(P<0.05),而单独添加不同量LIF对SSCs增殖的影响不显著(P>0.05);同时添加20ng/mL GDNF和1 000U/mL LIF可以显著促进SSCs的增殖,在该条件下当精原干细胞接种密度为(6×104)～(10×104)mL-1,共培养5d时,其OD490值为0.696。【结论】DMEM/F12培养基中单独添加20ng/mL GDNF或同时添加20ng/mL GDNF和1 000U/mL LIF可以显著促进小鼠SSCs的体外增殖。
- 索丽娟胡建宏王鹏洪洁赟王春伟李青旺史怀平
- 关键词：精原干细胞胶质细胞源性神经营养因子白血病抑制因子增殖
- 牛精原干细胞研究进展
- 2013年
- 精原干细胞(SSCs)是雄性生殖系干细胞,位于睾丸曲细精管基底膜上,具有自我更新和定向分化的潜能,是自然状态下出生后动物体内在整个生命过程中进行自我更新并能将基因传递至子代的惟一成体干细胞。本文在阐述精原干细胞发生的基础上,通过分析犊牛精原干细胞分离纯化、培养鉴定、冷冻保存和诱导分化的现状,分析了牛精原干细胞研究领域目前存在的主要问题,展望了牛精原干细胞的应用前景,以期为精原干细胞的研究提供参考。
- 王春伟扶晓波吕妍赵军郭秋萍张卫艺胡建宏
- 关键词：精原干细胞
- 酸化饮水对断奶獭兔肠道形态及内脏器官发育的影响被引量：3
- 2012年
- 通过在饮水中添加不同量的复合酸,研究不同pH饮水对断奶獭兔肠道形态及内脏器官发育的影响。40只体重相近的35日龄美系白色断奶獭兔按公母各半随机分为4组,每组10只,A组为对照组,饮用自来水;B组饮水中添加0.55%复合酸,pH 5.0;C组饮水中添加0.85%复合酸,pH 4.3;D组饮水中添加3.3%复合酸,饮水pH 3.6。结果表明,与对照组相比,pH 4.3饮水能显著增加脾脏重和脾脏指数(P<0.05);酸化饮水能提高断奶獭兔其他内脏器官重,改善内脏器官指数,但和对照组相比差异不显著(P>0.05)。酸化饮水可以改善断奶獭兔肠道形态,增加绒毛高度、降低隐窝深度,饮水酸度pH 4.3时可显著增加十二指肠绒毛高度(P<0.05),并降低空肠肠壁厚度(P<0.05);饮水酸度pH 3.6时可显著降低回肠肠壁厚度(P<0.05);酸化饮水对空肠、回肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度和肠壁厚度也有一定改善,以pH 4.3饮水酸度改善最好,但差异不显著(P>0.05)。结果显示,酸化饮水可以在一定程度上改善断奶獭兔内脏器官发育和肠道形态,其中以pH 4.3改善效果最好。
- 朱克华徐秀容汤际亮张煜坤孙得发
- 关键词：獭兔肠道形态
- 獭兔盲肠中枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定被引量：7
- 2013年
- 为了从獭兔肠道中分离、鉴定枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌,试验采用检测耐高温菌落的基本生理、生化反应,结合16S rDNA和促解旋酶B亚基(gyrB)的测序方法。结果表明:分离、鉴定出3株枯草芽孢杆菌,8株解淀粉芽孢杆菌。根据生理、生化反应和菌株gyrB基因序列可以鉴定枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌,试验獭兔个体盲肠中解淀粉芽孢杆菌的数量多于枯草芽孢杆菌。
- 汤际亮张煜坤孙得发徐宇静韩小雨李艳徐秀容
- 关键词：獭兔枯草芽孢杆菌
- 冷冻保护剂对犊牛睾丸组织标志性酶活性的保护作用被引量：2
- 2014年
- 为了探讨犊牛睾丸组织适宜的冷冻保存体系,设计以甘油、DMSO、乙二醇、海藻糖、BSA和睾丸液作为主要成分的6种冷冻保护液,以碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)和β-D葡萄糖苷酶(β-D-Glucosidase)的酶活性作为测定指标,以新鲜犊牛睾丸组织的4种酶活性为空白对照,使用6种冷冻保护液将睾丸组织于液氮中冷冻保存7d,然后37℃水浴解冻并无菌培养24h,再制备成φ=10%的睾丸组织匀浆液并测定4种酶活性,最后分析6种冷冻保护液对犊牛睾丸组织标志性酶活性的冷冻保护效果。结果表明,含ρ=0.015g/mL牛血清白蛋白(BSA)的冷冻保护液冷冻7d后,睾丸组织AKP、ACP、LDH和β-D葡萄糖苷酶的活性分别为599.99、129.11、1 891.53和489.98U/g,均显著优于其他组(P<0.05);含ρ=0.04g/mL海藻糖的冷冻保护液冷冻7d后,AKP、ACP、LDH和β-D葡萄糖苷酶活性分别为454.88、114.63、1 862.79和457.8U/g,其保护效果次于0.015g/mL BSA组,但均显著优于其他组(P<0.05);经DMSO、乙二醇和睾丸液冷冻7d后,4种标志性酶的活性均低于0.015g/mL BSA组和0.04g/mL海藻糖组,甘油组冷冻保护液的效果最差。因此,含ρ=0.015g/mL BSA和ρ=0.04g/mL海藻糖的冷冻保护液能够较好地保护犊牛睾丸组织的酶活性,是犊牛睾丸组织适宜的冷冻保护剂。
- 洪洁赟王春伟尚华扶晓波吕妍赵军胡建宏
- 关键词：冷冻保存冷冻保护剂酶活性
- 选择性培养基结合特异引物法分离鉴定家兔肠道脆弱拟杆菌被引量：1
- 2015年
- 脆弱拟杆菌作为严格厌氧菌,对培养环境要求苛刻,分离培养有较大难度。试验通过改进的选择性培养结合特异引物方法分离兔源脆弱拟杆菌,并利用16srDNA测序对其进行鉴定,为后续研究其与宿主关系奠定基础。试验从健康青年家兔肠道中采集内容物,先接种于含液态选择性培养基的厌氧管中,进行富集培养1~2d,然后将培养的菌液稀释后接种到选择性培养基平板上,于厌氧罐中培养1~3d,待长出菌落后,观察菌落形态,挑选符合脆弱拟杆菌菌落特点的单一菌落,培养后提取DNA,以脆弱拟杆菌特异引物进行PCR检测。对扩增出特异条带的菌株,扩增其16srDNA序列,并进行测序,测序结果与GenBank中脆弱拟杆菌序列进行比对,以鉴定分离的菌株。结果表明,细菌为大小不一的杆菌,革兰氏染色呈阴性。特异引物PCR产物电泳检测显示,挑取的27株单一菌落中,有7株可以扩增出符合目的片段大小的产物。随机选取两株进行16srDNA测序,其序列与GenBank中的递交的脆弱拟杆菌序列相似度大于99%,与其他细菌相似度均小于93.43%,可确定分离到的菌株为脆弱拟杆菌。
- 张煜坤张晓霄徐秀容
- 关键词：家兔脆弱拟杆菌
