自然界中的微生物总是通过各种各样的保护机制,使它们能够与恶劣的环境及侵袭性核酸共存。许多微生物都能通过基于基因序列特异性的方式抵抗核酸入侵。CRISPR(clustered regularly inter-spaced short palindromic repeats)即是属于这种保护机制之一。该位点是由独特的DNA间区间隔开的短的重复序列组成,并与一些被称为CRISPR相关蛋白(CRISPR association protein)的蛋白质共同作用,形成一套完整的自我保护机制。这种高变位点能从外源片段中摄取约36bp的短片段,从而建立可遗传的、DNA介导的"特异性免疫保护机制"。
为建立一种基于细菌16 S rDNA的粪肠球菌PCR检测方法,用于检测临床样本和鉴定分离纯化的细菌,通过比较肠球菌间16 S rDNA的差异,设计了1对特异性引物,并对PCR反应条件进行了优化,对PCR的特异性和敏感性进行了检测。结果显示,粪肠球菌ATCC29212及42个鉴定阳性的临床分离株为PCR阳性,检测结果与16 S rDNA测序的鉴定结果一致,其他种属的4株菌为PCR阴性,所得扩增条带单一且与预期的产物大小一致,测序表明该条带为目的条带;该方法的最小检出量为134 CFU,并能直接对病料进行检测。表明所建立的PCR方法能特异地检测粪肠球菌,且敏感、简易、快捷,适用于实验室的日常检测。
