“十二五”国家科技计划农村领域(2012AA101304-3)
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
- 相关作者：李一经唐丽杰乔薪瑗姜艳平崔文更多>>
- 相关机构：东北农业大学黑龙江省疾病预防控制中心中国动物卫生与流行病学中心更多>>
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- 猪传染性胃肠炎病毒S蛋白D位点单克隆抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2013年
- 通过大肠杆菌表达了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白的D位点,并以D位点的六聚体作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA筛选和3次有限稀释法进行克隆。结果显示,得到3株能稳定分泌抗TGEV S蛋白D位点单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2C104、5E1012和4B101,其中2C104和5E1012分泌抗体类型是IgM亚类,4B101为IgG1亚类。2C104、5E1012、4B101三株杂交瘤细胞培养上清液的间接ELISA抗体效价分别为1∶128、1∶128、1∶64,腹水效价分别为1∶103、1∶104、1∶4×103。间接免疫荧光鉴定结果表明,3株细胞均能和TGEV发生特异性反应,且在连续传代和冻存后仍能稳定分泌抗体。本研究针对S蛋白D位点制备了单克隆抗体,为传染性胃肠炎的诊断和TGEV与宿主互作机制的研究奠定了基础。
- 姜新鹏乔薪瑗唐丽杰葛俊伟姜艳平崔文李一经
- 关键词：传染性胃肠炎S蛋白单克隆抗体
- 猪轮状病毒间接ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 以纯化的猪轮状病毒VP6蛋白作为检测抗原,建立检测猪轮状病毒血清抗体的间接ELISA。优化后的反应条件为:抗原包被量为6μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,酶标二抗的工作浓度为1∶5 000。应用该方法检测阴性血清样本30份,确定的检测临界值为0.143(D490nm≥0.143,则判定为阳性)。特异性试验表明,用建立的间接ELISA对传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒和伪狂犬病病毒阳性血清进行检测时无交叉反应。重复性试验证实,批内和批间变异系数均小于10%。结果表明,本研究建立的用以检测猪轮状病毒抗体的间接ELISA具有较高的特异性和敏感性,可应用于猪轮状病毒的病原学检测。
- 孟柳乔薪瑗唐丽杰姜艳平崔文李一经
- 关键词：猪轮状病毒间接ELISA
- 猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的表达及其促淋巴细胞增殖活性测定
- 2013年
- 根据GenBank上公布的猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(pGM-CSF)基因序列(U67175.1)扩增该基因,克隆至pET30b载体,构建重组表达载体pET30b-pGM-CSF,并与分子伴侣辅助质粒pG-KJE8共同转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE分析,可见表达的目的蛋白大小约为23ku,主要以包涵体形式存在,且在分子伴侣的辅助下,增大了可溶性蛋白的表达量。经镍离子亲和层析纯化后,通过淋巴细胞增殖试验初步检测了pGM-CSF蛋白促进淋巴细胞增殖的活性。结果表明,猪GM-CSF具有明显的体外刺激淋巴细胞增殖的生物学活性,为进一步研究猪GM-CSF的生物学功能以及临床应用奠定了基础。
- 崔美实乔薪瑗唐丽杰葛俊伟王瑞翀姜艳平崔文李一经
- 关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子可溶性表达生物学活性
- 重组禽流感病毒(H5N2)的拯救及其生物学特性分析
- 2013年
- 为控制在我国流行的H5N1高致病性禽流感(Avian influenza virus,AIV)和筛选具有标记的疫苗毒株,用流行的H5N1亚型AIV的HA基因和H9N2亚型AIV的NA基因及H1N1亚型AIV(A/PR/8/34毒株)的6个内部基因通过流感8质粒反向遗传操作系统拯救了重组病毒rH5N2/PR8株。为了降低重组病毒的毒力,对H5N1亚型AIV的HA基因进行了修饰,使其裂解模式由PLRERRRKR↓GL修饰为PLIETR↓GL。将获得的rH5N2/PR8株在9日龄SPF鸡胚上连续传10代。该重组病毒的血凝效价稳定在1:2048,其半数感染量(EID50)可达10-8.77/0.1 mL。该病毒的毒力显著降低,对鸡胚的半数致死量(ELD50)为10-5/0.1 mL。将该病毒灭活与油佐剂乳化,制成灭活疫苗,给6周龄SFP鸡接种不同剂量,接种21 d后,用H5N1流行野毒A/Chicken/SD/2010(H5N1)攻击,结果显示:接种剂量为0.1 mL/只的试验组,10只鸡中有5只获得保护;接种0.3 mL/只的试验组可获得100%保护。以上说明,本实验获得的重组病毒具有疫苗标记、繁殖滴度高、毒力低、免疫原性好等特点,非常适合作为"标记疫苗"候选株,为AIV(H5N1)的标记疫苗研发奠定了坚实基础。
- 杨禹邵卫星徐天刚王志亮乔薪瑗唐丽杰葛俊伟李一经
- 关键词：禽流感病毒重组病毒标记疫苗
- 伪结核棒状杆菌试验感染家兔的临床与病理学变化被引量：3
- 2013年
- 为了系统掌握伪结核棒状杆菌人工感染实验动物后的发病情况、临床特征及主要病理学变化,为实验室诊断提供科学的基础数据,利用伪结核棒状杆菌标准强毒株ATCC19410按不同剂量感染3只家兔,观察其临床及病理学变化,从病料中分离病原菌,对其形态及培养特性进行观察。结果显示,家兔接种15d后,接种部位皮肤开始肿胀,随着时间的延长,肿块表面皮肤开始破溃,有白色而黏稠的脓汁排出,排脓后破溃创口逐渐结痂愈合,无其他明显临床症状;剖检可见肝、胃部大网膜有白色散在的化脓灶,两侧腋浅前淋巴结肿大,切开后有干酪样脓汁;病理组织学观察可见,皮肤感染局部病灶由典型的中央坏死区和周围纤维素性肉芽肿组成,其他各主要脏器组织均有充血、出血等现象;从病料中成功分离到了病原菌,镜下形态及培养特性均与感染所用标准毒株一致。结果表明,家兔人工感染伪结核棒状杆菌后主要形成局灶性脓肿,并有特征性的具有诊断意义的组织学病理变化。
- 兰宇李一经唐丽杰葛俊伟王瑞翀姜艳平崔文乔薪瑗
- 关键词：伪结核棒状杆菌病理变化
- 猪流行性腹泻病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2015年
- 为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究以原核表达的重组N蛋白作为检测抗原,优化ELISA反应条件,建立了PEDV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对PEDV血清检测为阳性,对猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒感染猪的阳性血清检测结果均为阴性;其批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。采用建立的ELISA方法检测了130份临床样品,其中78份血清样品为PEDV抗体阳性。表明建立的以重组N蛋白为包被抗原检测PEDV血清抗体的方法可以用于检测PEDV感染及相关的流行病学调查。
- 姜艳平姜新鹏孙刘妹赵广宇崔文唐丽杰乔薪瑗李一经
- 关键词：猪流行性腹泻病毒重组N蛋白抗体检测
- 发酵罐培养重组乳酸乳球菌表达犬γ-干扰素条件研究
- 2015年
- 为探讨发酵罐培养重组乳酸乳球菌表达犬γ-干扰素最佳条件,研究测定重组乳酸乳球菌p AMJ399-Ca IFN-γ/PSM565静置培养时生长曲线及p H,与添加不同浓度β甘油磷酸二钠的生长曲线及p H进行比较。结果表明,β-甘油磷酸二钠作为缓冲溶液,能使培养细菌p H保持稳定,促进重组菌生长。对重组乳酸乳球菌p AMJ399-Ca IFN-γ/PSM565在发酵罐中的培养条件优化,并对不同p H条件下培养重组乳酸乳球菌OD600及重组p AMJ399-Ca IFN-γ/PSM565表达的蛋白量进行Western-blot检测。发酵结果显示,32℃培养,搅拌子转速为52r·min-1,6 h后以0.25 m L·min-1速率补充50%葡萄糖,明显提高菌群数量,p H在5.5和5.75时检测重组菌OD600值达到6.87和7.0。p H为5.5和5.75时培养诱导重组乳酸乳球菌p AMJ399-Ca IFN-γ/PSM565的蛋白表达量均比p H 6和p H 6.25时高,但与静止培养诱导结果相比,重组菌表达量增长不明显。研究可为工业化生产重组犬γ-干扰素提供技术支持。
- 姜艳平吴煜张希姜新鹏唐丽杰乔薪瑗崔文李一经
- 关键词：发酵罐乳酸乳球菌
- 重组犬γ干扰素的分泌表达及抗病毒活性鉴定被引量：2
- 2015年
- 为了研究犬γ干扰素在抗病毒方面的应用价值,依据乳酸菌密码子的偏好性和原核表达载体p AMJ399的特点,在不改变编码蛋白的基础上,将原有的犬γ干扰素序列重新优化,构建重组乳酸乳球菌p AMJ399-Ca IFNγ/PSM565,获得了分泌表达的犬γ干扰素蛋白,将培养p AMJ399-Ca IFNγ/PSM565的培养上清液进行5倍浓缩后与MDCK细胞进行作用24 h后,接种VSV病毒,通过观察病变、MTT法检测活细胞数及荧光定量PCR检测方法,均证实该蛋白能够抑制VSV的复制,具有明显的抗病毒活性。为进一步研究犬γ干扰素在临床上的抗病毒应用和作为细胞因子佐剂的研究奠定了基础。
- 姜艳平吴煜张希姜新鹏唐丽杰乔薪瑗崔文李一经
- 关键词：分泌表达活性检测
