山西省卫生厅科技攻关计划项目(2011055)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：张莉吴博威刘清华张新华刘克战更多>>
- 相关机构：山西省儿童医院山西医科大学北京协和医学院更多>>
- 发文基金：山西省卫生厅科技攻关计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Zacopride通过PKA途径选择性激动大鼠心肌Kir2．1通道被引量：3
- 2013年
- 前期研究发现促胃肠动力药zacopride(5-HT4受体激动剂兼5-HT3受体拮抗剂)通过选择性激动大鼠心室肌内向整流钾电流(inward rectifier potassium current,IK1)表现出抗室性心律失常无房性致心律失常作用,本研究旨在探讨zacopride这一独特的药理特性的分子机制.采用胶原酶法急性分离大鼠心房肌细胞;利用全细胞膜片钳技术观察zacopride对大鼠心房肌细胞IK1电流、细胞跨膜电位和在HEK293细胞上表达的大鼠心肌Kir2.1,Kir2.2,Kir2.3通道和磷酸化位点突变的Kir2.1(S425L)通道的效应,以及干预5-HT受体和干预PKA,PKC,PKG信号通路的工具药对zacopride调节IK1作用的影响.运用Western blot分析大鼠心房肌及心室肌kir2.x通道构成.结果表明,zacopride对大鼠心房肌细胞IK1电流及跨膜电位无显著影响;可使HEK293细胞上表达的同源Kir2.1外向电流增加40.7%±9.7%(在50 mV,P<0.01),而对同源Kir2.2、同源Kir2.3及异源Kir2.1+Kir2.2,Kir2.1+Kir2.3和Kir2.2+Kir2.3通道电流均无明显作用.Western blot分析显示,Kir2.3表达量在大鼠心房及心室无明显差异,而大鼠心房Kir2.1的表达量仅为心室相应量的25%;HEK293细胞上5-HT3受体缺失,5-HT4受体呈低表达水平.PKA抑制剂能够显著抑制zacopride激动Kir2.1电流的效应,而PKC,PKG抑制剂不能影响这一效应;zacopride在50 mV可使Kir2.1 S425L突变体电流增加13.3%±6.5%,但无统计学意义(P>0.05).以上结果提示,zacopride激动Kir2.1电流的效应是经AC/cAMP/PKA信号通路介导的,而与其对5-HT3和5-HT4受体的作用无关.
- 张莉刘清华刘成芳翟旭雯封启龙许瑞龄崔香丽赵志青曹济民吴博威
- 关键词：内向整流钾通道5-HT受体蛋白激酶
- 大鼠kir2.1通道重组质粒的构建及其在HEK293细胞中的表达
- 2014年
- 内向整流钾电流（IK1）是心肌最主要的背景外向电流,参与静息电位的维持和心肌动作电位3 期终末的复极,进而调控心肌的兴奋性和传导性[1,2].已知心肌细胞IK1通道主要由Kir2 亚家族（Kir2.x） 中的Kir2.1、Kir2.2 和Kir2.3 构成,它们的编码基因分别是KCNJ2、KCNJ12 和KCNJ4.其中,Kir2.1是最重要的亚型[3], 也是组成人类心肌细胞IK1电流的主要亚单位[4],大量研究表明IKir2.1减弱或增强均可导致严重的心律失常[1,2].基于此,国内外众多学者在抗心律失常药物筛选过程中将目光投向了Kir2.1 通道,Kir2.1 通道电流克隆细胞模型成为必备的研究工具.本研究利用分子克隆技术, 构建pEGFP-N1-Kir2.1 真核表达质粒, 并对其在人胚胎肾细胞（HEK293）中的表达进行检测.
- 张莉秦桂秀燕美琴刘克战张新华
- 关键词：通道电流HEK293细胞重组质粒心肌动作电位分子克隆技术内向整流钾电流
- 大鼠心脏kir2.2、kir2.3通道重组质粒构建及真核表达被引量：1
- 2014年
- 目的构建大鼠心脏kir2.2、kir2.3通道真核表达质粒,并鉴定其在人胚胎肾细胞(HEK293)中的表达。方法提取大鼠心脏组织细胞RNA,逆转录扩增kir2.2、kir2.3通道编码基因,克隆至真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组质粒并转染HEK293细胞,应用全细胞膜片钳法定kir2.2、kir2.3通道电流。结果重组质粒pEGFPN1-kir2.2及pEGFP-N1-kir2.3经双酶切和测序证实构建正确,并在HEK293细胞中成功表达,且记录到相应通道电流。结论成功构建了大鼠心脏kir2.2、kir2.3通道真核表达质粒,并在HEK293细胞中成功表达。
- 张莉秦桂秀张新华刘克战吴博威刘清华焦咪范辰辰宋瑞瑞鲍春丽李瑜
- 关键词：基因表达
