国家科技重大专项(2008ZX08003-001)
- 作品数：16 被引量：94H指数：6
- 相关作者：谭君杨俊品陈彦惠邢少辰吴连成更多>>
- 相关机构：四川省农业科学院河南农业大学吉林省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项四川省农作物育种攻关项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用RNAi技术抗玉米矮花叶病效果研究被引量：2
- 2014年
- 以采用RNAi技术获得的HiⅡ、HiⅡA、HiⅡB和H99抗玉米矮花叶病转基因T1和T2代为材料,通过病毒接种、草丁膦涂抹、目的基因和标记基因PCR扩增,研究了利用RNAi原理构建的目的基因对玉米矮花叶病的抗性效果以及玉米转基因后代群体鉴定筛选技术。结果表明,90.00%的转基因株系抗病性超过非转基因株系,30.00%的转基因株系抗病株率超过了抗病对照黄早4,转基因株系的抗病性明显提高,说明利用RNAi技术选育抗矮花叶病转基因玉米株系是可行的。4种筛选鉴定方法比较结果表明,目的基因PCR和病毒接种鉴定方法最可靠,在转基因后代群体鉴定过程中,可在苗期用200mg/L的草丁膦筛选阳性植株基础上,再采用目的基因PCR鉴定,筛选出抗性转基因植株或株系,不仅可以减少鉴定的工作量,而且可以提高鉴定的准确性。
- 张莹莹吴连成库利霞张赛赛安允权崔新建陈彦惠
- 关键词：RNAI技术玉米矮花叶病转基因
- 转2mG2-epsps基因烟草的草甘膦耐受性分析被引量：12
- 2009年
- 利用农杆菌介导法将耐草甘膦基因2mG2-epsps转入烟草,获得87株PCR阳性植株,阳性率为43%。对PCR阳性植株进行Southern杂交、RT-PCR、Western杂交和ELISA分析,结果显示外源基因已经整合到烟草基因组中并高效表达,转基因植株的叶片中2mG2-EPSPS蛋白的最高表达量可达26.03μg/g鲜重。转基因烟草草甘膦耐受性分析显示,其中有15个转化事件表现出较好的草甘膦耐受性,对草甘膦的耐受性可达到1%。转基因植株的种子可以在10 mmol/L草甘膦异丙铵盐浓度下萌发,T1代转基因烟草幼苗可以耐受浓度为0.8%的草甘膦。研究结果表明转2mG2-epsps基因烟草具有较高的草甘膦耐受性,2mG2-epsps基因可以用于耐除草剂转基因作物的培育。
- 孙鹤郎志宏陆伟林敏黄大昉
- 关键词：转基因烟草
- 利用超声波处理花粉转化法获得玉米转基因新材料
- 玉米(Zea mays L.)是最重要的粮食作物,同时也是饲料和工业原料。因此,玉米的遗传改良对于拓宽玉米种质资源,进而达到增加产量、提高抗性和改善品质的目的,对于保障我国粮食安全和农业可持续发展都具有重要意义。
- 林春晶韦正乙宋鉴达邢少辰
- 关键词：超声波玉米植酸酶
- 文献传递
- 利用多重PCR技术鉴定玉米品种的初步研究被引量：12
- 2010年
- 在SSR分子标记的基础上,以3个玉米自交系、4个玉米杂交种和7对玉米SSR引物为材料,确定了较为适宜的多重PCR扩增体系和程序,获得了适宜琼脂糖凝胶电泳的、扩增效果较好的2～5重引物组合,并能有效应用于玉米杂交种和自交系的种子鉴定,不仅比单个引物鉴定更准确可靠,而且省时省工,成倍地降低了检测成本,将有利于推动多重PCR技术在玉米品种鉴定中的广泛应用。
- 谭君张彪唐海涛陈洁何文铸康继伟叶国成杨俊品
- 关键词：玉米SSR多重PCR琼脂糖凝胶电泳
- 烟草PR1a基因启动子的克隆及其活性检测被引量：1
- 2011年
- 【目的】从烟草中克隆得到病程相关蛋白1a基因的启动子PR1aP,并对其进行活性检测。【方法】通过PCR方法,从烟草基因组中克隆病程相关蛋白1a基因的启动子PR1aP,构建该启动子驱动的可溶性绿色荧光蛋白基因(smGFP)的植物表达载体p3300-PR1aP-GFP,并用农杆菌介导法将其导入烟草,检测转基因烟草植株经水杨酸(SA)诱导前后GFP的表达水平,通过SDS-PAGE和ELISA对其在不同诱导条件下GFP的表达情况进行分析。【结果】序列分析表明,PR1aP的长度为1 320 bp,含已报道序列的全部顺式作用元件,如水杨酸相关的W-box、ACGT序列等,也有增强子as-a-like元件及CAAT、TATA等常见应答元件。PCR检测结果显示,成功地获得了转基因植株;荧光检测表明,启动子PR1aP在正常条件下不表现活性,而在水杨酸诱导下有GFP表达。SDS-PAGE和ELISA分析结果表明,当水杨酸诱导时间为72 h、质量浓度为0.25 mg/L时,GFP表达量达到最大值,GFP最高占到总可溶性蛋白的0.083%,产率最高可达15μg/g。【结论】烟草病程相关蛋白1a的启动子PR1aP具有水杨酸诱导性。
- 王云鹏韦正乙邢少辰林春晶王丕武
- 关键词：烟草水杨酸绿色荧光蛋白
- 农杆菌介导的玉米愈伤组织遗传转化影响因子和植株再生条件被引量：2
- 2014年
- 以HiⅡ、HiⅡB、HiⅡA、H99玉米材料的幼胚诱导的胚性愈伤为转化受体，利用农杆菌介导转化的方法，将抗粗缩病RNA干扰基因导入玉米愈伤组织，并对影响转化的因素进行研究，以优化遗传转化体系。结果表明：继代3次的4种玉米材料的抗性愈伤率最高，且不同品种间存在差异，HiⅡ的抗性愈伤率最高，为31．25％，其次为HiⅡB（26．56％）、HiⅡA（24．45％），H99的抗性愈伤率最低，仅为10．26％；预培养6d的愈伤组织适于转化，其中HiⅡ的抗性愈伤率最高，为27．70％；结果还表明，菌液浓度D600nm=0．5-0．6是最佳的转化条件。通过优化后的条件对得到的抗性愈伤用除草剂进行筛选，HiⅡ、陇ⅡB、HiⅡA、H99材料分别得到10、5、4、3块抗性愈伤组织；标记基因为bar基因，通过PCR检测分别得到5、2、2、1块阳性愈伤组织，再进一步用bar基因试纸条检测，分别得到4、1、2、1株阳性植株。
- 张莹莹吴连成张赛赛安允权崔新建陈彦惠
- 关键词：农杆菌介导法植株再生抗性愈伤BAR基因
- 35S的克隆及原核表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 通过PCR技术和基因克隆方法对35S基因进行了分子克隆和序列分析,同时,利用PET-28 a构建了35S基因的原核表达载体,为抗体的制备以及在蛋白水平上检测转基因植物奠定基础.
- 王平安吴刘记杜孟芳陈彦惠
- 关键词：PCR分子克隆原核表达
- 杂交玉米新品种鼎玉818的选育及配套栽培技术被引量：1
- 2011年
- 阐述了玉米新品种鼎玉818的特征特性、选育经过、产量表现及相应的高产栽培技术要点,以期为该品种的推广应用提供一定参考。
- 谭君张彪林勇杨俊品
- 关键词：杂交玉米选育栽培技术
- 超声波辅助花粉介导法获得转BtCry1Ac基因玉米的研究被引量：3
- 2015年
- 为了进一步分析玉米基因功能及基因转化,并为玉米抗虫提供种质资源,利用超声波辅助花粉介导法,将抗虫基因Cry1Ac导入玉米优良自交系昌7-2中,获得大量的转基因植株。结果表明:转基因植株经过草铵膦抗性筛选、PCR检测、BT蛋白试纸条检测和室内抗虫性鉴定等分析,最后获得高抗玉米螟的转BtCry1Ac基因株系9个。培育出了高抗玉米螟的种质资源材料,同时也建立了超声波辅助花粉介导转化玉米的高效转化体系,该方法是简捷、快速有效、无基因型限制的植物转化方法。
- 南芝润惠国强罗绮宋红霞吴家和孙毅张红梅
- 关键词：玉米CRY1AC基因抗虫性
- 利用超声波处理花粉转化法获得玉米转基因新材料被引量：8
- 2012年
- 首次利用改良的超声波处理花粉方法将植酸酶基因phy转化到玉米基因组中,进行遗传转化和转化效率的验证研究。分子检测结果表明,该基因能够有效整合到玉米基因组中,并可以有效转录表达,从而证明超声波处理花粉转化技术是一种适合玉米的方便而有效的遗传转化途径。
- 宋鉴达林春晶韦正乙韩俊友邢少辰
- 关键词：玉米超声波植酸酶
